藥物溶出測試數(shù)據(jù)異常分析

Part1、儀器

為了使溶出度測試普遍用于控制藥物劑型的一致性，必須對所用儀器的類型進行控制。美國藥典<711>“溶出度”描述了溶出度測試中使用的幾種儀器類型。美國藥典裝置1(籃)和裝置2(槳)是目前最常用的速釋和控釋劑型的裝置。美國藥典以外的藥典，如日本藥典、英國藥典和歐洲藥典、中國藥典均包含美國藥典中描述的儀器1和儀器2。目前對此兩種裝置都有標準的要求。中國在2016年發(fā)布《藥物溶出度儀機械驗證指導(dǎo)原則》表明與國際接軌。在確保符合《藥物溶出度儀機械驗證指導(dǎo)原則》情況下平時也要注意一些特殊情況。槳葉有時部分涂有特氟隆。這種涂層可能會從槳葉上剝落和部分脫落，導(dǎo)致容器內(nèi)流體動力學(xué)的流動擾動。槳葉可能生銹，并有缺口或凹陷；這可能對溶解流體動力學(xué)產(chǎn)生不利影響，也是污染源。有些藥品不銹鋼桿槳在某些介質(zhì)對溶出度有影響如pH1.2條件下的苯磺酸氨氯地平片，也需要引起注意。徹底清潔槳葉對于防止藥物或介質(zhì)的污染非常重要?；@子需要小心檢查。使用時，它們可能會磨損、變形或扭曲。篩網(wǎng)尺寸可能會隨著時間的推移而變化，尤其是在酸性介質(zhì)中使用時。這些變化可能會影響溶解結(jié)果。如果使用后不立即徹底清洗，籃子特別容易積聚明膠或輔料，造成污染。溶出杯如果沒有清洗干凈，可能會造成污染。重復(fù)清洗后刮傷和腐蝕的容器應(yīng)丟棄。在溶解過程中，蓋子始終需要到位，以防止蒸發(fā)。湯麗娟湯老師有篇文獻《Introductionofdissolutionerrorasaresultofdifferentopeningsinvesselcovers》詳細講述了蒸發(fā)量對溶出度的影響，有興趣可以閱讀。儀器的震動也要引起注意。平時應(yīng)注意儀器的維護和保養(yǎng)，以確保平穩(wěn)運行。外部振動源可能包括平臺上的其他設(shè)備，如振動篩、離心機或超聲儀等。還應(yīng)避免沉重的腳步聲和關(guān)門聲。Part2、沉降籃

在溶出度測試過程中傾向于漂浮或移動的劑型會產(chǎn)生可變性和結(jié)果偏差的問題。沉降籃通常用于在溶出度測試中固定這種劑型。溶出度測試中使用的沉降籃有很多種（見下圖），有些是自制的，有些是市售的，沉降籃的類型會影響結(jié)果。USP中規(guī)定了很多中的沉降籃，各個儀器公司也有市售的沉降籃。在需要沉降籃的情況下，必須在方法和任何法規(guī)提交對沉降籃的詳細說明和使用沉降籃的原因。當比較不同的沉降籃(或沉降籃與無沉降籃)時，測試必須與每個沉降籃同時進行。每種沉降籃類型必須根據(jù)其在不抑制藥物釋放的情況下保持容器底部劑量的能力進行評估。沉降籃會顯著影響藥物的溶出度，不同沉降籃類型(或無沉降籃)的比較應(yīng)在溶出方法確定前期進行驗證。沉降籃的設(shè)計必須在方法中明確說明。轉(zhuǎn)移方法時，沉降籃必須在任何后續(xù)測試設(shè)施中盡可能緊密地復(fù)制。

沉降籃的使用應(yīng)需要符合一些要求：沉降籃不應(yīng)抑制或影響溶解。膠囊或者片劑應(yīng)該可以自由溶解，劑量的任何部分都不應(yīng)該截留在沉降片之下或之內(nèi)。劑型應(yīng)該總是落在中心溶解容器的底部。結(jié)果應(yīng)該是可重現(xiàn)的；可變性不應(yīng)該由沉降籃的形狀引入。形狀應(yīng)該易于定義和制作，最好是常見的。“Effectsof

SinkerShapesonDissolutionProfiles”這篇文獻中提到了不同沉降籃的影響，通過下面數(shù)據(jù)可以看到沉降籃的影響。Part3、溶出方法的穩(wěn)健性

由于溶出度試驗貫穿于整個藥品研發(fā)的始終，因此溶出方法的穩(wěn)健性也至關(guān)重要。確定溶出方法的關(guān)鍵測試參數(shù)通常通過對每個溶出度參數(shù)進行細微變化來評估。數(shù)據(jù)評估將建立測試參數(shù)所需的必要控制，以保持方法的一致性。這將有助于任何方法的轉(zhuǎn)移，并最大限度地減少故障排除的需要。穩(wěn)健性研究應(yīng)包括評估不同介質(zhì)pH、轉(zhuǎn)速、沉降籃(如果適用)、介質(zhì)脫氣、介質(zhì)表面活性劑水平、介質(zhì)溫度和過濾器的影響等等。對于藥物來說介質(zhì)pH、介質(zhì)種類選擇、介質(zhì)表面活性劑水平是需要重點考察的目標。藥事縱橫在《看明白新藥如何開發(fā)溶出方法，才能做好仿制藥》文章中詳細介紹了如何選擇合適的pH值、表面活性劑濃度、轉(zhuǎn)速來確保方法的穩(wěn)健性。另外一篇《依托考昔為例：適度區(qū)分力的溶出方法開發(fā)與驗證》同樣是不可多得的確認溶出方法穩(wěn)健性的好文章，值得多學(xué)習(xí)，應(yīng)用在實際工作中。Part4、介質(zhì)

介質(zhì)中溶解的氣體可能會影響溶出度。粘附在片劑表面或籃篩上的氣泡會阻礙介質(zhì)接觸，并會減慢溶解速度。顆粒會附著在容器或軸的玻璃表面的氣泡上。介質(zhì)的溫度也需要注意，有的儀器每個溶出杯都能顯示杯液溫度。如果沒有在進行實驗前就需要對杯液溫度進行核查。如果溶出介質(zhì)中含有表面活性劑，那么在使用中需要注意。首先表面活性劑不同廠家不同等級之間質(zhì)量差距很大，因此在方法確定之前需要進行廠家和等級的篩選以及對比。表面活性劑的發(fā)泡特性也很難有效地使介質(zhì)脫氣。將籃子放入表面活性劑介質(zhì)時，表面氣泡可能會粘附在籃子底部，并顯著降低溶解速率。表面活性劑會帶來嚴重的清潔問題，尤其是當濃度很高時，例如超過0.5%，在自動取樣時取樣管線中，表面活性劑如十二烷基硫酸鈉可能需要多次沖洗才能確保完全去除。不同表面活性劑帶來問題也不一樣，常用的十二烷基硫酸鈉，質(zhì)量易于控制，與鉀鹽聯(lián)用容易析出，在低溫下同樣易析出。吐溫80批間質(zhì)量差異大，操作沒有十二烷基硫酸鈉方便等。通過對參比制劑剖析選擇合適的表面活性劑。介質(zhì)的離子濃度同樣需要引起注意，不同國家的介質(zhì)配置方法不同，離子濃度也不同，如日本藥典和中國藥典的pH6.8緩沖鹽。《Assessingtheinfluenceofmediacompositionandionicstrengthondrugreleasefromcommercialimmediate-releaseandenteric-coatedaspirintablets》（研如玉組織翻譯的評估溶出介質(zhì)的組成和離子強度對商業(yè)化生產(chǎn)的阿司匹林速釋制劑和腸溶片釋放的影響）一文中詳細介紹了不同離子強度對藥物釋放的影響。在實際工作中可能需要考察不同離子強度的影響。Part5、觀察

準確的溶解發(fā)生在產(chǎn)品溶解時，不會受到溶解障礙的干擾，也不會受到任何來源的容器流體動力學(xué)干擾。因此，對測試的近距離視覺觀察非常重要。顆粒分解模式必須顯示自由分散的顆粒。異常溶解通常涉及以下一種或多種觀察結(jié)果：片劑的漂浮塊、旋轉(zhuǎn)、錐形、堆積、膠粘、膨脹、封蓋、“蛤殼”侵蝕、偏心定位、粘附、顆粒粘附在裝置或杯壁上、囊狀物、膨脹/橡膠塊或透明薄膜、明膠膠囊老化引起溶出度變慢等，還有可能為投片過程中“位置相關(guān)的”。例如，如果片劑偏離中心，由于剪切力的作用，溶解速率可能會更高。也有文獻報道不同的投片位置造成溶出度差異。薄膜包衣片劑可能是粘性的，并且會引起與片劑位置相關(guān)的問題。孫亞洲孫老師在各中公開場合多次提到觀察現(xiàn)象的重要性，甚至于在溶出結(jié)束后的溶出顆粒的手感等。在孫老師的“API、制劑特性與溶出度、BE的相關(guān)性及案例分析”中詳細描述了觀察的一些現(xiàn)象，可以在實際工作中聯(lián)系起來。隨著行業(yè)對溶出度的認知的提高，溶出度異常的一些現(xiàn)象得到了廣泛的認知，如堆積、漂浮、投片位置影響等，也有了一些手段來預(yù)防或解決。但溶出現(xiàn)象的觀察是貫穿于整個藥品研發(fā)甚至于藥品生命周期管理過程中。藥品研發(fā)過程中前期需要觀察參比制劑的溶出現(xiàn)象，了解溶出行為，甚至于需要根據(jù)溶出現(xiàn)象來調(diào)節(jié)溶出的方法，防止出現(xiàn)異常數(shù)據(jù)和批間誤差。之后的仿制藥開發(fā)中需要仔細觀察仿制藥的溶出現(xiàn)象，與參比制劑進行對比，與參比制劑的溶出現(xiàn)象一致。后期穩(wěn)定性試驗中如膠囊劑型，明膠膠囊老化引起溶出度變慢是需要重點觀察的。藥品上市后穩(wěn)定性試驗或每一次的變更申請試驗都需要進行觀察。Part6、取樣和過濾

1取樣取樣目前有自動取樣和手動取樣兩種。自動取樣省事省力，但是有時會帶來比手動取樣更多的問題。由于各種原因，采樣線經(jīng)常是錯誤的來源：長度不相等、卷曲、磨損超出極限、取樣管線的部分或完全堵塞、斷開連接、殘留、混淆或交叉連接以及清潔不充分。泵管可能因經(jīng)常使用或沖洗而磨損，可能需要更換。不同溶廠家溶出儀自動取樣方式不一樣，有注射泵和活塞泵兩種形式。理論上注射泵較好，每個取樣點后排空管路，即管路殘留為0，取樣時間較短?；钊脽o法完全排空管路，需要大量的介質(zhì)來潤洗管路，取樣提前時間早。在線過濾方式上也有差異，有濾膜過濾和濾頭過濾。建議在使用自動取樣系統(tǒng)之前確定合適的方式。手動取樣技術(shù)會因不同分析員之間人手的力量和大小的差異而引入誤差。通過過濾器的牽引速度可能變化很大。2過濾過濾是溶出取樣過程中不可忽視的步驟。必須對過濾步驟進行評估，以確定適當量的溶液是否已經(jīng)通過過濾器，從而最終過濾的溶液不會由于通過過濾器吸附的藥物損失而產(chǎn)生偏差。過濾是通常是防止未溶解顆粒進入分析樣品并進一步溶解。應(yīng)注意過濾器孔徑不大于藥物粒度，這對于微粉化或納米顆粒尤其重要。過濾還可以去除可能會導(dǎo)致高背景不溶性輔料。過濾器的驗證通常包括制備合適的標準溶液(推薦最低和最高濃度)和完全溶解的樣品溶液。對于標準溶液，將過濾溶液的結(jié)果(應(yīng)事先確定適當?shù)膹U棄量)與未過濾標準溶液的結(jié)果進行比較。對于過濾后的樣品溶液，應(yīng)將結(jié)果與完全溶解和離心的樣品溶液進行比較。標準和樣品過濾效率的可接受范圍通常在未過濾標準溶液和未過濾但離心的樣品溶液的98%-102%之間。如果過濾步驟有干擾，需對不同廠家不同型號的過濾器、不同處理方式進行篩選。仿制藥研究過程中，除了標準溶液和樣品溶液需要考察，參比制劑的濾膜影響同樣需要引起注意。自動取樣溶出儀的濾膜吸附由于其管路問題可能比手動取樣更加復(fù)雜，管路對樣品可能會有吸附和干擾。已有文章（自動溶出儀對硝苯地平緩釋片(I)釋放度測定的干擾）報道自動取樣器對溶出度的結(jié)果有干擾。因此對于自動取樣溶出儀還需要增加管路吸附的干擾，與手動取樣進行對比。Part7、檢測

由于溶出度測試中通常會產(chǎn)生大量樣品，因此分析系統(tǒng)應(yīng)該相對快速。用于溶出度測試的最常見的分析儀器是紫外可見分光光度法和帶有紫外檢測的高效液相色譜法。無論使用哪種方式，檢測方法都需要進行驗證。溶出方法學(xué)驗證相信各個公司都有自己的方式，因此在此文中就只簡單的提出幾個重要的容易忽視的地方。1線性通常線性濃度需要包含檢出溶出度的最小量至最高預(yù)期濃度的120%的濃度范圍。劑型的線性測試應(yīng)涵蓋產(chǎn)品的整個規(guī)格范圍。如有必要，分析前所有樣品應(yīng)加熱至37℃(或規(guī)定的溶解溫度)；如果樣品接近漏槽條件，這一點尤其重要。線性的驗證雖然比較簡單，但是有些情況不能忽視。對于較大規(guī)格或者特殊藥品而言，在檢出溶出度的最小量至最高預(yù)期濃度的120%的濃度范圍不一定成線性，可以用分段線性來解決。對于某些藥品外標一點法可能不適用，則需要采用標準曲線來進行每次溶出度計算。2準確度一般來說，準確性是通過制備包含藥物和劑型中存在的其他成分(例如輔料、包衣材料等)的多個樣品來確定的。膠囊殼、涂料混合物、油墨和沉降籃也應(yīng)在適當?shù)牡胤教砑?。如果?guī)格較大，藥物在輔料之前或之后加入介質(zhì)的順序可能比較重要。例如，一些藥物需要在沒有輔料的介質(zhì)中適當潤濕，反之亦然，其中輔料需要在引入藥物之前首先混合。如果規(guī)格較小或者藥物靜電較大，使得精確稱量變得困難時，可以采取溶液形式。如有必要，分析前所有樣品應(yīng)加熱至37℃(或規(guī)定的溶解溫度)。對于某些難溶性藥品，在介質(zhì)中溶解較低，對照品溶液配制需要用適量的有機溶劑助溶，但是有機溶劑的比例不得過5.0%。3溶液穩(wěn)定性由于溶出度測試中通常會產(chǎn)生大量樣品，因此溶液穩(wěn)定性是必需進行的實驗。一般對照品溶液和供試品溶液都需要進行考察?？疾斓臅r間盡可能的長，防止在后續(xù)工作中的特殊情況。如果在介質(zhì)中藥品不穩(wěn)定，可以通過不同的方式來解決。如可以考慮樣品控溫、加入穩(wěn)定劑或者同時與降解產(chǎn)物檢測等方式。有些藥品在不同介質(zhì)下的穩(wěn)定性不一樣，可以考慮在不穩(wěn)定的介質(zhì)中加入pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)至穩(wěn)定的pH值等。通過對藥物不穩(wěn)定方式進行分析選擇一種省力省時的方式是至關(guān)重