醫(yī)院物體表面及醫(yī)務(wù)人員手采樣-劉奔華6.8

醫(yī)院物體表面及醫(yī)務(wù)

人員手采樣一、醫(yī)院物體表面及醫(yī)務(wù)人員手采樣的意義

1.引起醫(yī)源性感染的因素很多,物體表面及醫(yī)務(wù)人員手可以充當(dāng)醫(yī)源性感染的媒介,手的微生物污染是造成醫(yī)院感染的最直接的傳播途徑,由于醫(yī)務(wù)人員的手傳播細(xì)菌而造成的醫(yī)院感染約占30%。醫(yī)護(hù)人員做好手的清潔消毒是控制醫(yī)院感染重要措施一。2.一些物體表面清潔后的效果監(jiān)測需要通過環(huán)境物表采樣培養(yǎng)數(shù)據(jù)來反映。3.促進(jìn)醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生的依從性。4.進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。

二、物體表面采樣

醫(yī)院物體表面采樣的對象：一切與醫(yī)療活動相關(guān)的物體表面均可以作為采樣的對象：治療臺，治療車，器械車、器械臺、麻醉機、新生兒暖箱、診療儀器，床頭柜、床尾桌、監(jiān)護(hù)儀按鈕、診療儀器操作把手、血壓計袖帶、聽診器、床欄、床欄按鈕、遙控器、門把手、電腦鍵盤、鼠標(biāo)，電話機、病歷夾等。采樣時間常規(guī)：消毒處理后進(jìn)行采樣暴發(fā)流行：未處理表面，隨機采樣采樣面積：常規(guī)：＜100cm2,全部表面；≥100cm2，取100cm2暴發(fā)流行：不限，盡可能多采

采樣方法5cm×5cm滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面用蘸有生理鹽水的棉拭子1支在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂擦5次并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子被采表面＜100cm2，取全部面積被采樣表面≥100cm2，取100cm2剪去手接觸部分將棉拭子投入裝有10ml無菌檢測用洗脫液的試管中送檢門把手等小型物體用棉拭子直接涂抹物體表面采樣采樣物體表面有消毒劑殘留時采樣液應(yīng)含有相應(yīng)中和劑

采樣方法：（1）棉拭子法：①準(zhǔn)備材料5cm×5cm標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板：材質(zhì)為牛皮紙或不銹鋼，中間為一5cm×5cm正方形空格，面積是25cm2。采樣液：無菌磷酸鹽緩沖液或無菌生理鹽水10mL（如果有殘留消毒劑，應(yīng)加相應(yīng)的中和劑）；無菌棉簽；酒精燈等。磷酸鹽緩沖液（PBS，0.03mol/L,pH7.2）配方無水磷酸氫二鈉2.83g磷酸二氫鉀1.36g蒸餾水加至1000ml，待完全溶解后，調(diào)pH至7.2-7.4，于121℃壓力蒸氣滅菌20min備用。②采樣步驟平面物體：用5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板,放在被檢物體表面,用浸有無菌磷酸鹽緩沖液（0.03mol/L）或生理鹽水采樣液的棉拭子1支,在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次（并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，連續(xù)采樣1-4個規(guī)格板面積）,剪去（或用酒精燈燒斷）手接觸部分,將棉拭子放入裝l0mL采樣液的試管中送檢。對小型物體及不規(guī)則物體表面，如水龍頭、門把手等，直接用棉拭子涂抹物體，用cfu/件表示

③標(biāo)本接種：a涂抹法：充分震蕩采樣管后，用無菌吸管吸取0.5mL待檢樣品接種于營養(yǎng)瓊脂平皿，置36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，計數(shù)并鑒定細(xì)菌。b傾注法：充分震蕩采樣管后，先取采樣液1.0mL加到無菌空平皿，再將冷卻至40℃～45℃的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL～20mL，36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h,計數(shù)菌落數(shù)并鑒定細(xì)菌

檢測方法傾注法充分振蕩采樣管取不同稀釋倍數(shù)的的洗脫液1.0ml接種平皿（每一標(biāo)本接種2個平皿）將冷卻至40℃～45℃的融化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（45℃～48℃）每皿傾注15-20ml（15-18ml）36℃±1℃恒溫箱培養(yǎng)48h計數(shù)菌落數(shù)懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關(guān)時，進(jìn)行目標(biāo)微生物的檢測④注意事項：a采樣管充分震蕩b涂抹法：充分涂抹開c傾注法：控制好瓊脂溫度，搖勻。⑤結(jié)果的報告及計算細(xì)菌計數(shù)按cfu/cm2報告小型物件物體表面的結(jié)果計算，用cfu/件表示如果36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，無細(xì)菌生長，可報告為：0cfu/cm2

結(jié)果計算規(guī)則物體表面物體表面菌落總數(shù)（cfu/cm2)平皿菌落數(shù)×洗脫液稀釋倍數(shù)采樣面積（cm2）=小型物體表面物體表面菌落總數(shù)（cfu/件)=平皿菌落數(shù)×洗脫液稀釋倍數(shù)例1：棉拭子法對患者床頭柜采樣（采樣面積100cm2），用上述涂抹法接種,（采樣液10mL，接種量0.5mL），36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時后培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌菌落數(shù)為25個。例2：棉拭子法對患者床頭柜采樣（面積100cm2），用上述傾注法接種（采樣液10mL，接種量1mL），36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時后培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌菌落數(shù)為10個。(2)壓印法：用細(xì)菌定量采樣皿對物體表面直接壓印采樣并培養(yǎng)計數(shù)。①準(zhǔn)備材料：面積25cm2的營養(yǎng)瓊脂平皿（既是采樣皿，又是培養(yǎng)皿）

②瓊脂平皿的制備及結(jié)果判定后平皿的處理

制備：熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿消毒滅菌：打開平皿蓋，置于超凈臺的紫外線下照射60分鐘，底的內(nèi)面和蓋的內(nèi)面均要照射（或環(huán)氧乙烷滅菌），在無菌采樣皿中倒入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，加蓋冷卻凝固,置4℃冰箱備用。注意：加營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的量，要根據(jù)采樣皿邊沿具體厚度，培養(yǎng)基高度略高于平皿邊緣在瓊脂沒冷卻前不要移動平皿，以免培養(yǎng)基溢出。標(biāo)本處理后平皿的處理：挑取瓊脂，煮沸消毒，平板浸泡在消毒液中，然后沖洗晾干備用，制備培養(yǎng)皿時再紫外線照射。③采樣操作：面積25cm2的瓊脂平皿壓印物體表面10~20秒,置36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h,計數(shù)菌落數(shù)并鑒定細(xì)菌。④結(jié)果計算例：某治療臺面采樣，36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h后,4個平皿上的菌落數(shù)分別為14、25、25、36CFU物體表面消毒合格標(biāo)準(zhǔn)判定：I、II類區(qū)域：物體表面的細(xì)菌菌落≤5cfu/cm2I、II類區(qū)域包括：潔凈手術(shù)部，其他潔凈場所，非潔凈手術(shù)部，非潔凈骨髓移植病房，產(chǎn)房，導(dǎo)管室、新生兒室，器官移植病房，燒傷病房，重癥監(jiān)護(hù)室，血液病病區(qū)等。III、IV類區(qū)域：物體表面的細(xì)菌菌落數(shù)≤10cfu/cm2III、IV類區(qū)域：兒科病房、母嬰同室、婦產(chǎn)科檢查室、人流室、治療室、注射室、換藥室、輸血科、消毒供應(yīng)中心、血液透析中心、急診科、化驗室、各類普通病室、感染疾病科門診及其病房等。

合格標(biāo)準(zhǔn)

、Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌菌落總數(shù)≤5cfu/cm2Ⅲ

、Ⅳ類區(qū)域：細(xì)菌菌落總數(shù)≤10cfu/cm2

、Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌菌落總數(shù)≤5cfu/cm2Ⅲ類區(qū)域：細(xì)菌菌落總數(shù)≤10cfu/cm2Ⅳ類區(qū)域：細(xì)菌菌落總數(shù)≤15cfu/cm2不得檢出致病微生物三醫(yī)務(wù)人員手采樣及檢測方法

1.幾個概念手衛(wèi)生:洗手、衛(wèi)生手消毒和外科手消毒的總稱。洗手:醫(yī)務(wù)人員用肥皂或者皂液和流動水洗手，去除手部皮膚污垢、碎屑和部分致病菌的過程。衛(wèi)生手消毒：醫(yī)務(wù)人員使用速干手消毒劑揉搓雙手，以減少手部暫居菌的過程。外科手消毒：外科手術(shù)前醫(yī)務(wù)人員用肥皂（皂液）和流動水洗手，再用手消毒劑清除或者殺滅手部暫居菌和減少常居菌的過程。使用的手消毒劑具有持續(xù)抗菌活性。常居菌：能從大部分人體皮膚上分離出來的微生物，是皮膚上持久的寄居菌，不易被機械的摩擦清除,一般情況下不致病。暫居菌：寄居在皮膚表層，常規(guī)洗手容易被清除的微生物。直接接觸患者或被污染的物體表面時可獲得，可隨時通過手傳播，與醫(yī)院感染密切相關(guān)。手采樣時間常規(guī)：洗手后從事診療前（在接觸病人、從事醫(yī)療活動前進(jìn)行采樣）。暴發(fā)流行：未洗手時采樣,當(dāng)發(fā)生醫(yī)院感染暴發(fā)流行時，懷疑與醫(yī)務(wù)人員的手污染相關(guān)時，應(yīng)及時采樣。3.采樣面積及方法（1）棉拭子法

①采樣方法：被檢人五指并攏，用浸有無菌磷酸鹽緩（0.03mol/L）或生理鹽水采樣液的棉拭子1支,在雙手指曲面從指根到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面積約30cm2），并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉試子，剪去手接觸部位，將棉試子放入裝有10mL采樣液的試管內(nèi)送檢。若手上有消毒劑殘留時，采樣液應(yīng)含相應(yīng)的中和劑。

②標(biāo)本接種：a涂抹法：充分震蕩采樣管后，用無菌吸管吸取0.5mL待檢樣品接種于營養(yǎng)瓊脂平板，置36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，計數(shù)并鑒定細(xì)菌。b傾注法：充分震蕩采樣管后，取采樣液1.0mL接種平皿，將冷確至40℃～45℃的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL～20mL，36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h,計數(shù)菌落數(shù)并鑒定細(xì)菌。③結(jié)果計算：2只手的采樣面積按30×2=60cm2計算例1：采用上述棉拭子涂抹法對某醫(yī)務(wù)人員的雙手采樣，用上述涂抹法接種（采樣液10mL，接種量0.5mL），36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時后培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌菌落數(shù)為6個例2：采用上述棉拭子涂抹法對某醫(yī)務(wù)人員的雙手采樣，用上述傾注接種（采樣液10mL，接種量1mL），36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時后培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌菌落數(shù)為18個。（2）壓印法面積25cm2的瓊脂平皿壓印10~20秒（要采雙手，每只手分別用一個平皿）。結(jié)果計算：4.醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生合格的判斷標(biāo)準(zhǔn)：衛(wèi)生手清毒：監(jiān)測的細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤10cfu/㎝2外科手消毒：監(jiān)測的細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤5cfu/㎝2

采樣及檢測原則:采樣后必須盡快對樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測,送檢時間不得超過2h,若樣品保存于4℃冰箱,存放時間不得超過4h。5、合格標(biāo)準(zhǔn)

、Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌菌落總數(shù)≤5cfu/cm2Ⅲ類區(qū)域：細(xì)菌菌落總數(shù)≤10cfu/cm2Ⅳ類區(qū)域：細(xì)菌菌落總數(shù)≤15cfu/cm2衛(wèi)生手消毒：細(xì)菌菌落總數(shù)≤10cfu/cm2外科手消毒：細(xì)菌菌落總數(shù)≤5cfu/cm2不得檢出治病微生物例：采用上述壓印法對某醫(yī)務(wù)人員的雙手采樣（左右手各一個），36℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時后，兩個平皿上生長的細(xì)菌菌落數(shù)分別為24、26個。

四、棉拭子法與壓印法的比較壓印法的優(yōu)點:1.試驗材料少、成本低。2.采樣過程簡便,人為影響因素少,可標(biāo)準(zhǔn)化。3.便于大量開展監(jiān)測工作。壓印法的缺點:細(xì)菌較多時,平皿細(xì)菌菌落相互融合棉拭子法的優(yōu)點:

1可用于不規(guī)則表面（門把手，水龍頭）2方便外科手的采樣（加中和劑）棉拭子法的缺點:1準(zhǔn)備工作復(fù)雜2受人為影響因素多3實驗室操作過程復(fù)雜4試驗材料多5接種過程:無菌操作

五、監(jiān)測要求每季度對手術(shù)室、產(chǎn)房、導(dǎo)管室、層流潔凈病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重癥監(jiān)護(hù)病房、新生兒室、母嬰室、血液透析病房、燒傷病房、感染疾病科、口腔科等部門工作的醫(yī)務(wù)人員手進(jìn)行消毒效果的監(jiān)測；當(dāng)懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)與醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生有關(guān)時，應(yīng)及時進(jìn)行監(jiān)測，并進(jìn)行相應(yīng)致病性微生物的檢測六、出現(xiàn)的問題及注意事項：1.培養(yǎng)基、采樣液等：無菌試驗,試驗時要設(shè)陰性對照和陽性對照。采樣用的棉簽、規(guī)格板等盡量在使用前一周內(nèi)滅菌，不被污染。樣本的采集和送檢:（1）采樣液的蘸取:適量（2）采樣面積:手：若超過或僅