短時(shí)受精后不同脫顆粒時(shí)間對體外受精胚胎移植周期的影響

短時(shí)受精后不同脫顆粒時(shí)間對體外受精胚胎移植周期的影響

2003年，chen等人首次提出了早期治療的概念，并將其應(yīng)用于臨床。在添加精華6小時(shí)后，血液檢測功能得到了顯著改善，收集率和臨床結(jié)局顯著改善。目前短時(shí)受精即刻脫顆粒觀察第2極體排出情況,判斷是否受精,并對未受精卵實(shí)施補(bǔ)救ICSI的方法已被廣泛應(yīng)用于臨床。有研究報(bào)道,短時(shí)受精可以提高胚胎質(zhì)量,但對于受精早期脫顆粒細(xì)胞的機(jī)械操作是否會(huì)影響受精、胚胎發(fā)育和臨床結(jié)局,各種報(bào)道不一?，F(xiàn)本研究對比同周期患者不同脫顆粒時(shí)間的胚胎發(fā)育情況和臨床結(jié)局,報(bào)道如下。1數(shù)據(jù)和方法1.1胎移植及療效選擇2013年4月至2013年11月在我中心接受常規(guī)體外受精-胚胎移植的214個(gè)治療周期,滿足以下3個(gè)條件:(1)原發(fā)不孕;(2)獲卵數(shù)≥7個(gè);(3)精子質(zhì)量達(dá)到行常規(guī)體外受精-胚胎移植的要求(除去完全受精失敗以及受精率低下的治療周期)。1.2學(xué)習(xí)方法1.2.1hclc的k-b-b-c誘導(dǎo)誘導(dǎo)誘導(dǎo)誘導(dǎo)誘導(dǎo)誘導(dǎo)誘導(dǎo)誘導(dǎo)誘導(dǎo)排卵采用長方案促排卵,于黃體中期用短效促性激素釋放激素激動(dòng)劑曲普瑞林(天臺(tái)山制藥)0.1mg降調(diào)節(jié),用基因重組促卵泡生長激素果納芬(瑞士)或人絕經(jīng)期尿促卵泡素麗申寶(麗珠制藥)促排卵,卵泡有一個(gè)達(dá)到18mm或兩個(gè)達(dá)到17mm時(shí)肌肉注射HCG10000IU,36h后在陰道B超引導(dǎo)下穿刺取卵。1.2.2體外經(jīng)濟(jì)1.2.3受精情況觀察精卵孵育后更換生長皿,將每個(gè)病人的卵子隨機(jī)分為兩組:一組即刻用拆蛋管剝除顆粒細(xì)胞并觀察第二極體來判斷受精情況(4h組);另一組僅更換生長皿,不剝除顆粒細(xì)胞,于次日晨即18h后再剝除顆粒細(xì)胞(18h組)。1.2.4胚胎發(fā)育情況觀察D1即受精后18h,觀察原核評估受精情況。D3觀察胚胎發(fā)育情況,按照本中心的標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)胚胎,根據(jù)患者年齡及病史予以移植2~3個(gè)胚胎,移植后剩余胚胎發(fā)育形成優(yōu)質(zhì)囊胚予以玻化冷凍保存。1.2.5統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS12.0軟件進(jìn)行分析。兩組之間的各種統(tǒng)計(jì)學(xué)概率數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2兩組優(yōu)質(zhì)胚胎率、胚胎利用率b組比較2.1受精率、多精受精率、卵裂率和優(yōu)胚率、胚胎利用率兩組比較,受精率、多精受精率、卵裂率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。優(yōu)質(zhì)胚胎率、胚胎利用率B組略高于A組,A組與B組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。2.2臨床妊娠率比較臨床妊娠率A組為49.15%,B組為53.00%,A組與B組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3抗混養(yǎng)性卵母的早期增殖補(bǔ)模在常規(guī)IVF周期中,約10%~25%的周期因受精失敗而導(dǎo)致無胚胎移植。傳統(tǒng)做法通常于次日晨即授精后18~22h行晚期單精子卵泡漿內(nèi)注射(ICSI)來補(bǔ)救,但臨床結(jié)局并不理想。近年研究提出在加精后4~6h通過判斷第二極體是否排出預(yù)測受精與否,進(jìn)而對未排出第二極體的卵母細(xì)胞行早期補(bǔ)救ICSI,可明顯改善臨床結(jié)局。但是關(guān)于提早去除顆粒細(xì)胞對受精以及胚胎發(fā)育和著床的影響研究報(bào)道結(jié)果不一。3.1影響受精性因素有研究認(rèn)為,短時(shí)受精4h即刻脫顆粒細(xì)胞會(huì)增加多PN率。在體外受精周期中多精受精和極體染色體滯留是形成多PN最主要的原因?？蓪?dǎo)致多精受精的原因包括:卵母細(xì)胞過度成熟或未成熟、透明帶缺陷、精子濃度過高以及培養(yǎng)環(huán)境不穩(wěn)定等。皮質(zhì)反應(yīng)和透明帶反應(yīng)是受精時(shí)阻止多精受精的兩個(gè)重要生理功能,影響皮質(zhì)反應(yīng)和透明帶反應(yīng)的各種因素都可能會(huì)影響正常受精。質(zhì)量差的卵母細(xì)胞易出現(xiàn)細(xì)胞成熟度不夠或老化的情況,故此類卵母細(xì)胞的皮質(zhì)反應(yīng)和透明帶反應(yīng)受到影響易發(fā)生多精受精現(xiàn)象。對未成熟卵來說,精子的進(jìn)入不能引起卵母細(xì)胞釋放皮質(zhì)顆粒,并且由于細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較少而導(dǎo)致缺乏足夠的Ca2+振蕩,使皮質(zhì)反應(yīng)滯后,從而發(fā)生多精受精;而卵子一旦發(fā)生老化,將不能釋放或只能釋放一部分的皮質(zhì)顆粒,致使不能完成皮質(zhì)反應(yīng),也會(huì)引起多精受精的發(fā)生。也有研究認(rèn)為,若卵子成熟度欠佳,過早去除顆粒細(xì)胞可能會(huì)降低正常受精率。在體外,通常精卵孵育4h精子即可到達(dá)卵母細(xì)胞皮質(zhì),激活卵母細(xì)胞排出第二極體,在此時(shí)脫顆粒細(xì)胞并不會(huì)影響卵母細(xì)胞的正常受精。但未成熟或過熟的卵母細(xì)胞是會(huì)降低受精率。本研究結(jié)果顯示,短時(shí)授精(A組)加精后4h去除顆粒細(xì)胞沒有導(dǎo)致異常受精率增加和正常受精率降低。因此,筆者認(rèn)為影響受精的主要因素是卵母細(xì)胞的質(zhì)量(不成熟或老化、透明帶缺陷)和精子的濃度,精卵孵育4h已足夠滿足體外受精所需要的作用時(shí)間,只要培養(yǎng)環(huán)境適宜穩(wěn)定,脫顆粒輕柔,盡量減少機(jī)械性刺激,孵育4h后去除顆粒細(xì)胞并不會(huì)導(dǎo)致增加異常受精和降低正常受精。這與其他一些短時(shí)受精的研究結(jié)果是相似的。3.2抗菌藥短時(shí)脫顆粒細(xì)胞減治對胚胎發(fā)育的影響有研究認(rèn)為包裹卵子的顆粒細(xì)胞可以提供某些細(xì)胞因子,這些細(xì)胞因子對卵子的成熟以及胚胎后期的發(fā)育都有重要的作用。卵丘細(xì)胞即卵母細(xì)胞周圍的多層顆粒細(xì)胞起著促進(jìn)卵母細(xì)胞成熟的作用,在哺乳動(dòng)物的受精過程中也起著引導(dǎo)精卵結(jié)合,幫助精子獲能、活化和穿卵,防止透明帶硬化等重要作用。但在受精之后卵丘細(xì)胞對胚胎發(fā)育的利弊,各研究結(jié)論不一。張麗紅等研究發(fā)現(xiàn),短時(shí)受精后去除顆粒細(xì)胞組的優(yōu)胚率高于不去除顆粒細(xì)胞組,認(rèn)為卵丘細(xì)胞在受精后長時(shí)間存在可能影響胚胎的發(fā)育。短時(shí)受精后去除顆粒細(xì)胞可以減少來源于精子和顆粒細(xì)胞的高濃度代謝產(chǎn)物,包括活性氧化物、E2、孕酮等,降低其對卵母細(xì)胞的不利影響。但也有研究認(rèn)為,短時(shí)受精后脫離受精環(huán)境但保留未脫落卵丘細(xì)胞有利于胚胎發(fā)育,認(rèn)為卵丘細(xì)胞做為共培養(yǎng)細(xì)胞可分泌一些物質(zhì),如生長因子、氨基酸、丙酮酸、糖蛋白等促進(jìn)胚胎發(fā)育;同時(shí),通過代謝途徑,去除了包括金屬二價(jià)陽離子、葡萄糖、次黃嘌呤等影響胚胎早期發(fā)育的物質(zhì)。本研究結(jié)果顯示,同患者同一周期卵母細(xì)胞在短時(shí)受精4h后即刻脫顆粒組(A組)和受精后換液次日晨脫顆粒組(B組)在卵裂率、優(yōu)胚率、胚胎利用率、妊娠率之間差異不顯著(P>0.05),但B組略高于A組。因此我們推測短時(shí)受精4h后,受精卵脫離了受精環(huán)境,減少了暴露在不良環(huán)境中的時(shí)間,無論即刻脫顆粒還是次日晨脫顆粒對胚胎的發(fā)育及妊娠率影響不大,而拆蛋時(shí)由于不當(dāng)操作對卵母細(xì)胞可能造成的機(jī)械損傷,也許是導(dǎo)致A組在優(yōu)胚率、胚胎利用率上略高于B組的原因,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上所述,短時(shí)受精后即刻脫顆粒細(xì)胞與次日晨脫顆粒細(xì)胞比較,可以提前觀察第二極排出與否,利于早期補(bǔ)救ICSI,