金銀木總黃酮含量測(cè)定

金銀木總黃酮含量測(cè)定

黃酮類化合物以其抗逆性、腫瘤、抗高血壓、闡明血管疾病和提高戰(zhàn)斗力而聞名。近年來，黃酮類化合物的分析已在各種中藥中進(jìn)行，但關(guān)于金銀木的研究報(bào)道很少。金銀木和金銀花（i）屬于金銀花科和廢人型。在本研究中，分析了金銀木花、枝、葉和果實(shí)中的黃酮類物質(zhì)，并以金銀木作為裝飾材料的開發(fā)、抗高血壓藥物、心血管疾病藥物的利用為基礎(chǔ)。1材料和方法1.1絡(luò)欣通銀杏葉片金銀木的花、枝、葉、果均采自山西大學(xué)校園內(nèi);絡(luò)欣通(銀杏葉片),山西瑞福萊藥業(yè)有限公司,批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字Z20027951;聚酰胺薄膜,中國(guó)浙江臺(tái)州路橋四甲生化塑料廠出品.1.2方法1.2.1金銀木花總黃酮含量的測(cè)定超聲波提取總黃酮:分別稱取適量洗凈、干燥、粉碎的金銀木花、枝、葉、果,加入8～10倍體積分?jǐn)?shù)為(下同)60%乙醇中密封浸泡24h,超聲波提取20min,抽濾收集濾液,濾渣再加入60%乙醇反復(fù)浸泡提取抽濾,將所得濾液合并后加60%乙醇至一定體積為待測(cè)總黃酮.蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程建立:按照文獻(xiàn)操作,并以蘆丁濃度對(duì)光密度值計(jì)算回歸方程.樣品中總黃酮的測(cè)定:分別取制備的金銀木花、枝、葉、果的待測(cè)濾液1mL于25mL容量瓶中,用30%乙醇補(bǔ)至12.5mL;以下操作同蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線,并以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程分別計(jì)算其總黃酮含量.1.2.2聚酰胺薄膜的層析分離、熒光定量和紫外分析方法觀察溶劑萃取:分別將1.2.1制得的4種濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去掉乙醇味,乙酸乙酯萃取,待分離.絡(luò)欣通黃酮類化合物的提取:取絡(luò)欣通胞衣片除去紅棕色胞衣,研碎,其余步驟同1.2.1.層析分離:取8cm×8cm聚酰胺薄膜,于距底邊1.0cm處劃線,并于兩側(cè)邊1.0cm內(nèi),間隔1.0cm編號(hào).1號(hào)點(diǎn)樣品標(biāo)準(zhǔn)蘆丁,2號(hào)、3號(hào)、4號(hào)、5號(hào)、6號(hào)依次點(diǎn)樣品絡(luò)欣通、金銀木花、枝、葉、果的乙酸乙酯萃取液,自然風(fēng)干,于乙酸乙酯∶乙醇(體積比)=60∶40的系統(tǒng)中層析.待層析前沿至距薄膜0.5cm時(shí)取出晾干,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%氯化鋁染色,紫外分析儀觀察層析結(jié)果.樣品的層析斑點(diǎn)掃描:將不同部的層析斑點(diǎn)剪下用60%乙醇溶解,紫外可見分光光度計(jì)200nm～800nm波長(zhǎng)處掃描.2結(jié)果與討論2.1y、y.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.5.4細(xì)胞系統(tǒng)的線性相關(guān)由1.2.1得到蘆丁濃度-光密度標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程:Y?=0.0517X?0.002?r=0.9998(P＜0.01)Y^=0.0517X-0.002?r=0.9998(Ρ＜0.01),線性相關(guān)極顯著.2.2花3.4g/100g由1.2.1測(cè)定可知,金銀木花、枝、葉、果均含總黃酮,其含量依次為葉10.750g/100g;果7.563g/100g;花3.758g/100g;枝3.340g/100g.說明金銀木的總黃酮主要存在于葉和果中,花和枝中只有葉和果中的1/3～1/2.由此可知金銀木的藥用部位更偏向于葉和果,利用金銀木作為藥用資源既不損害城市植物觀賞,又不浪費(fèi)自然資源.2.3分析結(jié)果表明，結(jié)合環(huán)己?jiǎn)伟⒔疸y木花、枝葉和果實(shí)中黃酮2.3.1號(hào)金銀木果不同部位造成的斑塊由圖1可見,1號(hào)蘆丁只出現(xiàn)一個(gè)斑點(diǎn);2號(hào)絡(luò)欣通層析出3個(gè)斑點(diǎn),分別稱Rf1luo、Rf2luo、Rf3luo,其中與蘆丁位置相近者Rf2luo可能是蘆丁;3號(hào)金銀木果中層析出5個(gè)斑點(diǎn),其中與蘆丁位置相近者也可能是蘆丁,其它斑點(diǎn)顯示含量較低;4號(hào)金銀木葉中出現(xiàn)5個(gè)斑點(diǎn),其中3個(gè)斑點(diǎn)均與終欣通呈現(xiàn)的3個(gè)斑點(diǎn)類似,說明金銀木葉中可能含有與絡(luò)欣通相同的3種黃酮類物質(zhì);5號(hào)金銀木花呈現(xiàn)的斑點(diǎn)顏色與3號(hào)金銀木果中層析斑點(diǎn)類似,顯示含量較低;金銀木枝子沒有層析出任何斑點(diǎn).2.3.2準(zhǔn)品層析結(jié)果蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品層析前后的掃描圖譜:蘆丁在層析前有3個(gè)特征峰(見圖2),即WL-1=276.0nm、Abs=0.510;WL-2=340.0nm、Abs=0.267;WL-3=510.0nm、Abs=0.136.蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品層析后則只有兩個(gè)特征峰,見圖3,即WL-1=251.0nm、Abs=2.474;WL-2=357.0nm、Abs=0.200.說明蘆丁層析染色后其分子結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化,因而其特征峰移向短波方向,峰值由276nm變?yōu)?51nm,而且圖形更陡峭.蘆丁、絡(luò)欣通Rf2luo和金銀木葉、金銀木果的層析掃描圖:將蘆丁和與蘆丁層析斑點(diǎn)部位相同的絡(luò)欣通Rf2luo、金銀木果、金銀木葉的層析斑點(diǎn)掃描圖(見圖4)重疊,發(fā)現(xiàn)它們都在357nm處有特征吸收,坡度較平緩,而在251nm～254nm有非常陡峭特征吸收峰.推測(cè)具有活血止痛,用于冠心病、心膠痛、動(dòng)脈硬化、高血壓、腦血管痙攣的絡(luò)欣通中含有蘆丁;金銀木果、金銀木葉中也含有與絡(luò)欣通相同的黃酮——蘆丁.3rf1luo,rf2luo3種黃酮的表達(dá)綜上所述,金銀木的花、枝、葉、果均含總黃酮,其含量依次為葉>果>花>枝;層析結(jié)果發(fā)現(xiàn)絡(luò)欣通中含Rf