不同產(chǎn)地地骨皮水煎劑對四氧啶糖尿病小鼠降血糖作用

不同產(chǎn)地地骨皮水煎劑對四氧啶糖尿病小鼠降血糖作用

寧夏枸杞是一種常見的補(bǔ)藥方劑，具有抗逆、抗衰老、腫瘤、肝腎、降血脂、增強(qiáng)身體免疫等功能。枸杞的藥用部位主要包括枸杞果實(shí)（枸杞，通常稱為枸杞）、枸杞根（土壤殼）、枸杞果柄（帶刺的果柄）、枸杞葉。北宋詩人蘇左生在他的詩《枸杞》中說：“莖和花都可以收獲。沒有扔掉的東西?！辫坭降母?、莖、花和果實(shí)可以用于治療。王力等人的研究表明，枸杞能顯著降低糖尿病小鼠的血糖值（p0.01），提高血清胰島素水平。中國藥典(1995)收載的地骨皮(Cortexlycii)為茄科植物枸杞(LyciumchineseMill.)或?qū)幭蔫坭降母稍锔?黃小紅等實(shí)地藥源調(diào)查表明,現(xiàn)地骨皮藥材商品,主要來源于枸杞的根皮,寧夏枸杞和北方枸杞(L.chinensevar.potaninii)的根皮在個(gè)別地區(qū)也作為藥用地骨皮.地骨皮為常用中藥,其提取物有降血糖、解熱、降壓、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗生育等作用.黃小紅等用3種地骨皮(枸杞根皮、寧夏枸杞根皮、北方枸杞根皮)原生藥總提取物灌喂小鼠,測定它們對小鼠的降血糖作用,結(jié)果表明,3種枸杞根皮中僅枸杞根皮對四氧嘧啶小鼠有明顯降血糖作用,其余2種地骨皮降血糖作用不甚明顯.但未見有關(guān)寧夏枸杞根皮降血糖的進(jìn)一步研究報(bào)道.枸杞葉俗稱天精草,是一味重要的中藥材,具有補(bǔ)虛益精、清熱止渴、養(yǎng)肝明目之功效,也可作為新鮮蔬菜食用.有學(xué)者關(guān)于枸杞葉活性成分、營養(yǎng)成分和常微量元素的含量明顯優(yōu)于枸杞果實(shí)的報(bào)道,未能引起足夠的重視.枸杞果柄所含的營養(yǎng)成分與枸杞葉相當(dāng),而枸杞果柄的相關(guān)研究則更少.有關(guān)枸杞葉降血糖的研究,國內(nèi)僅見的報(bào)道認(rèn)為枸杞葉蛋白具有降血糖作用.枸杞果柄在內(nèi)蒙古自治區(qū)等地被作為糖尿病人的保健品使用,但未見相關(guān)研究報(bào)道.因此進(jìn)一步開展寧夏枸杞葉、枸杞果柄及枸杞根皮降血糖作用的研究,對于寧夏枸杞傳統(tǒng)非藥用部位的開發(fā)利用具有重要的理論及實(shí)踐意義.1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1枸杞葉茶、地骨皮血糖儀及血糖試條,均為北京怡成生物電子技術(shù)有限公司產(chǎn)品.四氧嘧啶(Alloxan,ALX),美國sigma公司產(chǎn)品.枸杞葉茶,寧夏枸杞研究所園林試驗(yàn)場產(chǎn)品.枸杞果柄,采自內(nèi)蒙古自治區(qū)烏拉特前旗白彥花鎮(zhèn).地骨皮,河北產(chǎn)枸杞根皮,簡稱河北地骨皮,采于河北棗強(qiáng)縣產(chǎn)的枸杞的根皮;甘肅產(chǎn)枸杞根皮,簡稱甘肅地骨皮,采于甘肅慶陽產(chǎn)的枸杞的根皮;寧夏產(chǎn)地骨皮,簡稱寧夏地骨皮,采于寧夏中寧產(chǎn)寧夏枸杞“寧杞1號”的根皮.苯乙雙胍,又名降糖靈,南通制藥廠出品,批號070107.1.1.2枸杞葉茶、枸杞果柄、地骨皮水產(chǎn)權(quán)水社劑的制備將枸杞葉茶50g,加水1000mL煎煮1.5h,過濾;藥渣再加水500mL煎煮1h,過濾.合并濾液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至100mL(生藥質(zhì)量濃度為0.5g/mL).同樣方法制取生藥質(zhì)量濃度為0.5g/mL的枸杞果柄及3種地骨皮水煎劑各100mL.將降糖靈片研碎,以煮沸過的蒸餾水溶解,配制成質(zhì)量濃度為5mg/mL的水溶液.制得的枸杞葉茶、枸杞果柄、地骨皮水煎劑及降糖靈水溶液置于4℃冰箱中備用.1.1.3實(shí)驗(yàn)動物昆明種小鼠(均為雄性)及小鼠飼料均由寧夏醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供.在實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn),初始體質(zhì)量為(22±5)g.1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1氧吡啶糖尿病小鼠血糖含量測定小鼠禁食(不禁水)12h后,尾靜脈注射5%四氧嘧啶溶液(80mg/kg),恢復(fù)進(jìn)食;于48h后再禁食(不禁水)12h,斷尾取血,用血糖儀測定血糖值,測定結(jié)果大于11.1mmol/L的小鼠為合格的四氧嘧啶糖尿病小鼠模型.動物出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀為標(biāo)準(zhǔn),確認(rèn)模型,未達(dá)標(biāo)動物不納于實(shí)驗(yàn).將糖尿病小鼠按空腹血糖水平高低進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組法分組,同時(shí)兼顧各組動物體質(zhì)量均值盡量接近.另設(shè)1組體質(zhì)量相近的非糖尿病小鼠15只,作為以上各組糖尿病小鼠的對照組(正常對照組),同時(shí)測定其血糖值.1.2.2正常組和多次給藥防治小鼠血糖試驗(yàn)選取合格的四氧嘧啶糖尿病小鼠,分為9組(每組15只),分別以生理鹽水、降糖靈(25mg/(kg·d-1)),枸杞葉茶水煎劑分別為5.0g/(kg·d-1)和7.5g/(kg·d-1),枸杞果柄水煎劑分別為5.0g/(kg·d-1)和7.5g/(kg·d-1),寧夏地骨皮水煎劑為5.0g/(kg·d-1),河北地骨皮水煎劑為5.0g/(kg·d-1)和甘肅地骨皮水煎劑為5.0g/(kg·d-1)灌胃.正常對照組小鼠以等量生理鹽水灌胃.各組小鼠每日上午8:00～10:00期間灌胃1次.每天觀察小鼠行為及死亡情況并做好記錄,連續(xù)給藥14d.在末次給藥后禁食12h,斷尾取血,用血糖儀測定血糖值.1.3血糖降低值方差分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用xˉ±sxˉ±s表示,給藥前后血糖值比較采用t檢驗(yàn),P<0.05為差異顯著,P<0.01為差異極顯著.給藥后各組間血糖降低值采用多重比較用最小顯著差數(shù)法(LSD)進(jìn)行方差分析,同一列數(shù)字右側(cè)小寫字母相同者表示差異不顯著(P>0.05),不同者表示差異顯著(P<0.05);同一列數(shù)字右側(cè)大寫字母不同者表示差異極顯著(P<0.01).2結(jié)果2.1各組小鼠的死亡數(shù)給小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶后,由于體內(nèi)代謝紊亂,致使部分小鼠死亡.由表1可知,給藥后降糖靈治療組、枸杞葉茶治療組糖尿病小鼠死亡數(shù)低于模型對照組糖尿病小鼠.說明降糖靈、枸杞葉茶在降血糖的同時(shí)提高了動物的生存率.給藥前期除正常對照組小鼠外,其余各組小鼠均出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿、消瘦、活動減少、精神萎靡等癥狀.到給藥末期,除模型對照組外,降糖靈治療組、枸杞葉茶治療組、枸杞果柄治療組、地骨皮治療組小鼠的“三多”癥狀均有所改善.2.2兩組血糖比較由表2可知,給藥前各四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的血糖均大于11.1mmol/L,為合格的糖尿病小鼠模型.給藥前各組糖尿病小鼠間的血糖差異不顯著,但與正常對照組相比差異極顯著.給藥后高、低劑量枸杞葉茶治療組及降糖靈治療組血糖較給藥前有極顯著降低;高、低劑量枸杞葉茶治療組與降糖靈治療組的差異不顯著,說明此劑量枸杞葉茶與降糖靈降血糖作用等效.給藥后,低、高劑量枸杞果柄治療組除與降糖靈治療組血糖降低值之間無顯著差異外,與模型對照組、正常對照組血糖降低值之間達(dá)到極顯著差異.可見低、高劑量枸杞果柄均有降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用,且與降糖靈有相同的降糖效果.給藥后寧夏地骨皮治療組、河北地骨皮治療組和甘肅地骨皮治療組血糖較給藥前有極顯著降低.實(shí)驗(yàn)表明,3個(gè)產(chǎn)地的地骨皮水煎劑與降糖靈一樣,對四氧嘧啶糖尿病小鼠有明顯的降血糖作用.給藥后降糖靈治療組與寧夏地骨皮治療組、河北地骨皮治療組和甘肅地骨皮治療組的差異不顯著,說明三者的降血糖作用與降糖靈效果相似.3主要降血糖功效成分本實(shí)驗(yàn)中,一定劑量的枸杞葉茶、枸杞果柄及寧夏、甘肅、河北3個(gè)產(chǎn)地的地骨皮均有明顯降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用,且與降糖靈治療組的差異不顯著,表明降糖效果已經(jīng)達(dá)到了目前臨床治療糖尿病所使用的降糖西藥降糖靈的降糖效果.目前發(fā)現(xiàn)的植物天然降血糖成分主要包括黃酮、生物堿、皂甙、鞣質(zhì)、多糖、萜、蛋白質(zhì)與氨基酸、不飽和脂肪酸、硫鍵化合物、苯丙素酚和其他化合物等11大類,但這些成分在不同植物體內(nèi)有著不同的種類.現(xiàn)有較多的研究已經(jīng)認(rèn)為枸杞子、地骨皮可以降血糖,枸杞子降血糖的有效成分主要有枸杞多糖等.周晶等人研究表明地骨皮降低實(shí)驗(yàn)性小鼠血糖的有效部位是水溶性小分子.李康等認(rèn)為地骨皮降血糖的有效組分是酸性組分.楊涓等測定得知枸杞子、地骨皮均含有?；撬?許多研究也證明牛磺酸可以降血糖,但?；撬崾遣皇氰坭阶?、地骨皮降血糖的有效成分之一,至今未見報(bào)道.枸杞子、地骨皮含較豐富的牛磺酸,這在植物藥中很少見.枸杞葉、枸杞果柄作為枸杞子、地骨皮一株同生的一部分,是否也含有?；撬?尚待進(jìn)一步研究.寧夏枸杞葉富含黃酮類化合物、維生素E、維生素C、硒、甜菜堿等營養(yǎng)活性成分.黃酮類主要影響胰島β細(xì)胞功能,作用緩慢而持久.有報(bào)道從芥菜中分離得到黃酮類化合物異鼠李素二葡萄糖苷,其降血糖機(jī)制與異鼠李素二葡萄糖苷的體內(nèi)抗氧化活性有關(guān).蕎麥種子、廣西藤茶、桑葉中的總黃酮都對高血糖小鼠也有明顯的降血糖作用.寧夏枸杞葉黃酮類化合物含量高于其果實(shí).推測黃酮類化合物