鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液仿制藥研究技術指導原則

鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液仿制藥研究技術指導原則（試行）一、概述鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液是將鹽酸多柔比星包裹于脂質(zhì)體內(nèi)形成的特殊注射劑。本指導原則根據(jù)采用硫酸銨梯度法制備的鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液的制劑特點，提出仿制藥開發(fā)過程中藥學研究、非臨床研究和生物等效性研究的技術規(guī)定，旨在為該仿制藥的研發(fā)提供技術指導。本指導原則僅代表藥品監(jiān)管部門現(xiàn)在對于本品的觀點和認識。在符合現(xiàn)行法規(guī)的規(guī)定下，可采用替代的研究辦法，建議提供具體的研究資料或與監(jiān)管機構進行溝通。二、整體研究思路作為仿制藥，應當按照國家局公布的《化學仿制藥參比制劑遴選與擬定程序》選擇參比制劑。鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液為經(jīng)靜脈注射給藥的脂質(zhì)體制劑，應基于產(chǎn)品特性，采用逐步遞進的對比研究方略，首先進行仿制藥與參比制劑藥學和非臨床的全方面對比研究；然后進行人體生物等效性研究；必要時進行臨床研究。若藥學研究和（或）非臨床研究成果提示仿制藥與參比制劑不一致，申請人應考慮對受試制劑處方工藝進一步優(yōu)化后重新開展研究1。作為注射劑仿制藥，除滿足仿制藥注冊申報的規(guī)定外，還應符合《化學藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價技術規(guī)定》、《化學藥品注射劑仿制藥（特殊注射劑）質(zhì)量和療效一致性評價技術規(guī)定》等。三、技術規(guī)定（一）藥學研究1.處方仿制藥的輔料種類和用量普通應與參比制劑（RLD）相似。輔料的用量相似是指仿制藥輔料用量為參比制劑對應輔料用量的95%—105%2。氫化大豆磷脂酰膽堿（HSPC）、膽固醇、培化磷脂酰乙醇胺（MPEG-DSPE）是本品的核心成分，應按有關規(guī)定進行登記和關聯(lián)，或由制劑注冊申請人一并提供研究資料3。仿制藥應與參比制劑選擇相似來源（天然的或合成的）的脂質(zhì)輔料，制訂嚴格的內(nèi)控原則，并提供研究資料證明仿制藥所采用的脂質(zhì)輔料與參比制劑中的脂質(zhì)輔料相似（如，各組分比例）。2.制備工藝采用硫酸銨梯度法制備的重要環(huán)節(jié)涉及：1）空白脂質(zhì)體的制備，2）硫酸銨梯度的形成，3）活性藥品的裝載。活性藥品的裝載是多柔比星在脂質(zhì)體內(nèi)外相的硫酸銨濃度梯度驅(qū)動下擴散到空白脂質(zhì)體內(nèi)完畢的4。本品工藝較為復雜，應提供具體的生產(chǎn)工藝開發(fā)研究資料和工藝驗證資料（涉及無菌工藝驗證資料）。建議制訂合理的生產(chǎn)過程控制方略，如核心環(huán)節(jié)的生產(chǎn)時限、核心中間體的質(zhì)量控制原則和保持時限等。應特別關注生產(chǎn)工藝和批量對產(chǎn)品質(zhì)量可控性的影響，注冊批和商業(yè)批的生產(chǎn)工藝及批量原則上應保持一致5。3.質(zhì)量研究仿制藥應通過體外表征證明其與參比制劑核心質(zhì)量屬性（CQAs）一致，除注射劑普通質(zhì)量屬性外，還應關注下列CQAs9：（1）脂質(zhì)體構成：涉及磷脂含量、游離的和包封的藥品含量、總硫酸根和NH4+濃度、內(nèi)相中硫酸根和NH4+濃度、組氨酸濃度和蔗糖濃度，應選擇適宜的辦法進行研究并計算藥脂比。仿制藥各項指標應與參比制劑一致。（2）包封藥品的狀態(tài)：藥品重要以多柔比星硫酸鹽沉淀的形式存在于脂質(zhì)體內(nèi)，應選擇適宜的辦法進行研究（如，電鏡法和X射線衍射法等），仿制藥應與參比制劑一致。（3）脂質(zhì)體內(nèi)環(huán)境：涉及內(nèi)相體積、內(nèi)外相pH梯度差、內(nèi)相中硫酸根和NH4+濃度，應選擇適宜的辦法進行研究，仿制藥各項指標應與參比制劑一致。（4）體外釋放度：體外釋放度是本品的重要質(zhì)控指標，應選擇適宜的條件和辦法進行研究（如，F(xiàn)DA溶出度數(shù)據(jù)庫辦法）6，仿制藥應與參比制劑一致。（5）脂質(zhì)體形態(tài)和脂膜層數(shù)：脂質(zhì)體的載藥量和釋放度可能受脂質(zhì)體形態(tài)和脂膜層數(shù)的影響，應選擇適宜的辦法進行研究（如，電鏡法等），仿制藥應與參比制劑一致。（6）脂膜的相變溫度：脂膜的相變溫度影響脂質(zhì)體雙層膜的穩(wěn)定性，應選擇適宜的辦法進行研究（如，差示掃描量熱法等），仿制藥應與參比制劑一致。（7）粒度和粒度分布：粒度和粒度分布是本品的重要質(zhì)控指標。應選擇適宜的辦法進行研究，仿制藥的粒度分布（D10、D50、D90）應與參比制劑一致；建議基于D50和SPAN[(D90-D10)/D50]或多分散系數(shù)，采用群體生物等效性研究的分析辦法進行粒度和粒度分布的對比（仿制藥和參比制劑各選三批，每批不少于10瓶，每瓶平行測定不少于3次），仿制藥與參比制劑應等效。（8）PEG厚度（脂質(zhì)體表面PEG密度）：采用甲氧基聚乙二醇（MPEG）對磷脂酰乙醇胺（DSPE）進行修飾，首先可增加脂膜的機械強度；另首先可避免脂質(zhì)體被單核吞噬細胞系統(tǒng)（MPS）去除，以增加其在血液中的循環(huán)時間。應選擇適宜的辦法進行研究，仿制藥應與參比制劑一致。（9）Zeta電位：表面電荷可維持脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，同時影響脂質(zhì)體的組織分布、細胞攝取和去除，應選擇適宜的辦法和介質(zhì)進行研究，仿制藥應與參比制劑一致。（10）多個條件下的體外泄漏：為確保腫瘤細胞的等效藥品傳遞，應模擬體內(nèi)環(huán)境條件進行藥品泄漏的研究，推薦的實驗條件見下表：體外藥品泄漏條件目的建議理由在37攝氏度、50%人血漿中24小時評價血液循環(huán)中脂質(zhì)體的穩(wěn)定性血漿可模擬血液狀況在37攝氏度，pH值5.5、6.5和7.5緩沖液中24小時模擬正常組織、癌細胞周邊或癌細胞內(nèi)藥品的釋放正常組織：pH值7.3癌組織：pH值6.6癌細胞內(nèi)部（內(nèi)涵體和溶酶體）：pH5-6（內(nèi)涵體和溶酶體可能參加腫瘤細胞攝取脂質(zhì)體和誘導藥品釋放）在一定溫度范疇內(nèi)（43、47、52、57攝氏度），在pH6.5的緩沖液中12小時，或直至完全釋放評價的脂膜完整性脂膜的相變溫度（Tm）由脂質(zhì)雙層性質(zhì)決定（如，剛性、剛度和化學構成等）。不同溫度（低于或高于Tm）下藥品釋放的差別將反映脂質(zhì)雙層性質(zhì)的細微差別。在37攝氏度低頻（20kHz）超聲2小時或直至完全釋放評價脂質(zhì)體中藥品的包封狀態(tài)低頻超聲（20kHz）通過短暫引入孔狀缺點破壞脂質(zhì)雙分子層，使脂質(zhì)體內(nèi)的多柔比星硫酸鹽沉淀溶解釋放多柔比星。應提供各項對比研究所采用的分析辦法和必要的辦法學驗證資料，明確評價指標、原則及擬定根據(jù)。建議采用最少三批商業(yè)化規(guī)模工藝生產(chǎn)的仿制品與多批參比制劑進行體外對比研究。4.穩(wěn)定性研究應進行常規(guī)穩(wěn)定性考察，并結(jié)合產(chǎn)品闡明書開展使用中產(chǎn)品穩(wěn)定性研究。穩(wěn)定性考察指標除普通注射劑CQAs外，還應涉及微粒制劑有關的CQAs（如，包封藥品的狀態(tài)、體外釋放度、脂質(zhì)體形態(tài)、粒度和粒度分布、Zeta電位等）。應結(jié)合產(chǎn)品特點、穩(wěn)定性、包材相容性和容器密封性等研究成果證明包材選擇合理。包材相容性應參考有關指導原則進行。（二）非臨床研究1.鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液是一種特殊注射劑，進入體內(nèi)后存在釋藥的過程和體液成分的吸附等，因此仿制藥與參比制劑處方和工藝的差別可能造成藥品體內(nèi)藥代動力學行為發(fā)生變化，從而帶來有效性和安全性的變化，建議在臨床實驗前開展仿制藥與參比制劑比較的藥代動力學研究，充足提示仿制藥與參比制劑在藥代動力學行為的一致性。普通選擇非嚙齒類動物進行藥代動力學比較研究。采用擬定臨床劑量和給藥途徑，設立參比制劑組，測定血漿中總多柔比星含量和游離的多柔比星濃度，獲得t1/2、Cmax、AUC、Vz、Cl、MRT等重要藥代參數(shù)的比較研究成果。鑒于普通只有釋放藥品才干在體內(nèi)發(fā)揮活性，在進行血藥濃度測定時需分別考察結(jié)合型藥品和釋放藥品的暴露量。2.采用荷瘤動物開展組織分布的比較研究，劑量普通設立為有效劑量，最少測定給藥后血液、腫瘤組織、心臟和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較為豐富的組織（如肝、腎）的藥品濃度，比較正常組織和腫瘤組織與血液中的多柔比星藥品暴露量及其比值的差別，同時設立參比制劑組，比較仿制藥與參比制劑在體內(nèi)重要組織分布的差別。3.開展制劑安全性實驗，并與參比制劑比較。（三）人體生物等效性研究1,7,8,9,10研究類型：以藥代動力學（PK）為終點的生物等效性研究，空腹實驗。如果病人的健康狀況不允許禁食，申辦者可在研究期間提供非高脂餐，或可在原則（非高脂餐）早餐2小時后開始治療。研究設計：普通推薦采用單次給藥、隨機、交叉研究設計。受試者：適合本品單藥治療的腫瘤患者。注意事項：應使用商業(yè)批的樣品進行核心的生物等效性研究。該研究將在安排患者接受常規(guī)治療的兩天內(nèi)進行，兩個研究周期不得變化治療方案。由于本品的心臟毒性，應在基線時統(tǒng)計患者的心臟狀態(tài)。在研究過程中，患者的體重變化造成給藥劑量變化達成±5%者，必須停止該患者的研究，并且該受試者的數(shù)據(jù)不納入最后BES進行生物等效性分析。在仿制藥生物等效性研究的兩個周期中，合并用藥應盡量保持一致。若因不良事件的治療需要，確需用藥造成兩周期間合并用藥不一致，應提供充足證據(jù)證明合并用藥對研究制劑藥代動力學行為不產(chǎn)生影響，否則該周期數(shù)據(jù)不納入最后BES進行生物等效性分析。排除原則：通過4個療程多柔比星治療的患者，多柔比星總暴露達成550mg/m2或更多。肝功效明顯受損的患者。對鹽酸多柔比星處方成分或RLD處方成分有過敏史的患者。妊娠期和哺乳期的女性患者。年紀不大于18歲或不不大于75周歲的患者。含有需要全身用藥的持續(xù)或活動性感染者。有嚴重的心臟、肝臟或腎臟疾病的患者。檢測物質(zhì)：在適宜的生物體液中游離的（非包封的）多柔比星和脂質(zhì)體包封的多柔比星。生物等效性評價指標：重要評價指標應提供涉及受試制劑和參比制劑游離的和脂質(zhì)體包封的多柔比星的AUC0-t、AUC0-∞、Cmax，需提供對應幾何均值、幾何均值比值及其90%置信區(qū)間。建議增加脂質(zhì)體包封的多柔比星的部分暴露量指標（如AUC0-48h和AUC48h-last）作為次要評價指標，同樣進行90%置信區(qū)間考察。生物等效的接受原則（90%CI）：游離的和脂質(zhì)體包封的多柔比星的AUC0-t、AUC0-∞、Cmax幾何均值比值的90%置信區(qū)間數(shù)值應不低于80.00%，且不超出125.00%。對于脂質(zhì)體包封的多柔比星的部分暴露量指標（如AUC0-48h和AUC48h-last），若等效性結(jié)論與重要評價指標的不一致，需充足分析因素以及對臨床用藥安全有效性的影響。其它：注冊申報時，除了上述藥代動力學參數(shù)之外，還需提供其它全方面的藥代動力學參數(shù)的個體和平均值，涉及但不限于達峰時間、消除半衰期、去除率、表觀分布容積等。四、參考文獻1.國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心.《化學藥品注射劑（特殊注射劑）仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價技術規(guī)定》（5月）2.國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心.《化學藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價技術規(guī)定》（5月）3.《國家藥監(jiān)局有關進一步完善藥品關聯(lián)審評審批和監(jiān)管工作有關事宜的公示》（第56號）4.A.Gabizon,H.Sheemda,Y.Barenholz.Pharmacokineticsofpegylatedliposomedoxorubicin:reviewofanimalandhumanstudies.ClinPharmcokinet42(5):419-436()5.國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心.《化學仿制藥注冊批生產(chǎn)規(guī)模的普通性規(guī)定（試行）》（6月）6.FDA-RecommendedDissolutionMethodsWebsite,7.（原）國家食品藥品監(jiān)督管理總局.《以藥動學參數(shù)為終點評價指標的化學藥品仿制藥人體生物等效性研究技術指導原則》（第61號通告）8.國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心.《生物等效性研究的統(tǒng)計學指導原則》（10月）9.FoodandDrugAdministration.DraftGuidanceonDoxoru