糖的呈色反應

實驗一糖的呈色反響和定性鑒定1精品課件目的要求

學習鑒定糖類及區(qū)分酮糖和醛糖的方法了解鑒定復原糖的方法及其原理2精品課件糖相關(guān)知識單糖中的果糖是酮糖，而葡萄糖是醛糖。所有的單糖都是復原糖；復原性的二糖有乳糖和麥芽糖，蔗糖是非復原性二糖。3精品課件糖的呈色反響和定性鑒定Ⅰ.Molish反響——α-萘酚反響Ⅱ.蒽酮反響Ⅲ.酮糖的Seliwanoff反響Ⅳ.Fehling試驗Ⅴ.Benedict試驗Ⅵ.Barfoed試驗4精品課件I、Molish反響——α-萘酚反響實驗原理:糖在濃硫酸或濃鹽酸的作用下脫水形成糠醛及其衍生物與α-萘酚作用形成紫紅色復合物，在糖液和濃硫酸的液面間形成紫環(huán)，因此又稱紫環(huán)反響。糠醛紫紅色復合物5精品課件Molish反響α-萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比較穩(wěn)定，其靈敏度與α-萘酚一樣。單糖、雙糖、多糖一般都發(fā)生此反響，但氨基糖不發(fā)生此反響。丙酮、甲酸、乳酸、草酸、葡萄糖醛酸、各種醛糖衍生物、甘油醛等均產(chǎn)生近似的顏色反響。因此，陰性反響證明沒有糖類物質(zhì)的存在；而陽性反響，那么說明有糖存在的可能性，需要進一步通過其他糖的定性試驗才能確定有糖的存在。Molish反響非常靈敏，0.001％葡萄糖和0.0001％蔗糖即能呈現(xiàn)陽性反響。因此，不可在樣品中混入紙屑等雜物。當果糖濃度過高時，由于濃硫酸對它的焦化作用，將呈現(xiàn)紅色及褐色而不呈紫色，需稀釋后再做。6精品課件Molish反響操作方法取試管，編號，分別參加各待測糖溶液1mL，然后加兩滴Molish試劑，搖勻。傾斜試管，沿管壁小心參加約1mL濃硫酸，切勿搖動，小心豎直后仔細觀察兩層液面交界處的顏色變化。用水代替糖溶液，重復一遍，觀察結(jié)果。7精品課件II、蒽酮反應

實驗原理:糖經(jīng)濃酸作用后生成的糠醛及其衍生物與蒽酮〔10-酮-9，10-二氫蒽〕作用生成藍綠色復合物。該復合物在630nm有最大的吸收峰，并且在一定范圍內(nèi)，顏色與糖量的多少成正比，該方法可以用于測定幾乎所有碳水化合物的含量，包括戊糖、己糖，多糖等。在測定水溶性碳水化合物含量時切勿將未溶解的沉淀局部混入試劑中，否那么會將細胞壁中的纖維和半纖維素混入樣品，造成所測定值的升高。不同的糖類與蒽酮試劑反響后的顏色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖和甘露糖較淺，五碳糖更淺，故在測定混合糖的含量時會應為混合物中不同糖的比例不同造成誤差。在測定單一糖類的時候可防止此類的誤差。8精品課件蒽酮反應操作方法取試管，編號，均參加1ml蒽酮溶液，再向各管滴加2~3滴待測糖溶液，充分混勻，觀察各管顏色變化并記錄。9精品課件III、酮糖的Seliwanoff反響

〔西列瓦諾夫反響〕實驗原理:酮糖在酸的作用下較醛糖更易生成羥甲基糠醛。后者與間苯二酚作用生成鮮紅色復合物，反響僅需20-30秒。醛糖在濃度較高時或長時間煮沸，才產(chǎn)生微弱的陽性反響。該反響是鑒定酮糖的特殊反響。果糖與Seliwanoff試劑反響非常迅速，呈鮮紅色，而葡萄糖所需時間較長，且只能產(chǎn)生黃色至淡黃色。戊糖亦與Seliwanoff試劑反響，戊糖經(jīng)酸脫水生成糠醛，與間苯二酚縮合，生成綠色至藍色產(chǎn)物。酮根本身沒有復原性，只有在變成烯醇式后，才顯示復原作用。10精品課件酮糖的Seliwanoff反響操作方法取試管，編號，各參加Sediwanoff試劑1mL，再依次分別參加待測糖溶液各4滴，混勻，同時放入沸水浴中，比較各管顏色的變化過程。11精品課件IV、Fehling試驗

實驗原理:費林試劑是含有硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液。硫酸銅與堿溶液混合加熱，那么生成黑色的氧化銅沉淀。假設同時有復原糖存在，那么產(chǎn)生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。由于沉淀的速度不同，而形成的顆粒大小也不同，顆粒大的為紅色，顆粒小的為黃色。為防止銅離子和堿反響生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀，F(xiàn)ehlin試劑中參加酒石酸鉀鈉，它與Cu2＋形成的酒石酸鉀鈉絡合銅離子是可溶性的絡離子，該反響是可逆的。平衡后溶液內(nèi)保持一定濃度的氫氧化銅。費林試劑是一種弱的氧化劑，它不與酮和芳香醛發(fā)生反響。12精品課件將一定量的甲液和乙液等體積混合時，硫酸銅與氫氧化鈉反響，生成氫氧化銅沉淀：2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2+Na2SO4Fehling試驗反響過程在堿性溶液中，所生成的氫氧化銅沉淀與酒石酸鈉反響，生成可溶性的絡合物酒石酸鉀鈉銅：在加熱條件下，用樣液滴定，樣液中的復原糖與酒石酸鉀鈉銅反響，酒石酸鉀鈉銅被復原糖復原，產(chǎn)生紅色氧化亞銅沉淀，其反響如下：糖酸13精品課件Fehling試驗操作方法取試管，編號，各參加Fehlin試劑甲和乙1mL。搖勻后，分別參加4滴待測糖溶液，置沸水浴中加熱2~3min，取出冷卻，觀察沉淀和顏色變化。14精品課件V、Benedict試驗

〔本尼迪特試驗〕實驗原理：Benedict試劑是Fehling試劑的改進。Benedict試劑利用檸檬酸作為Cu2+的絡合劑，其堿性較Fehling試劑弱，靈敏度高，干擾因素少。15精品課件Benedict試驗操作方法取試管，編號，分別參加2mLBenedict試劑和4滴待測糖溶液，沸水浴中加熱5分鐘，取出后冷卻，觀察各管中的顏色變化。16精品課件VI、Barfoed試驗

〔巴弗德氏試劑〕實驗原理：在酸性溶液中，單糖和復原二糖的復原速度有明顯差異。Barfoed試劑為弱酸性。單糖在Barfoed試劑的作用下能將Cu2+復原成磚紅色的氧化亞銅，時間約為3分鐘，而復原二糖那么需20分鐘左右。所以，該反響可用于區(qū)別單糖和復原二糖。當加熱時間過長，非復原性二糖經(jīng)水解后也能呈現(xiàn)陽性反響。復原二糖：麥芽糖、乳糖、纖維二糖17精品課件Barfoed試驗操作方法取試管，編號，分別參加2mLBarfoed試劑和2~3滴待測糖溶液，煮沸2-3分鐘，放置20分鐘以上，比較各管的顏色變化。18精品課件思考題

列表總結(jié)和比較本實驗六種顏色反響的原理和應用。運用本實驗的方法，設計實驗