Bacillus sp.S65殼聚糖酶分離純化及基因克隆研究的開題報(bào)告

Bacillussp.S65殼聚糖酶分離純化及基因克隆研究的開題報(bào)告開題報(bào)告一、題目：Bacillussp.S65殼聚糖酶分離純化及基因克隆研究二、研究背景和意義殼聚糖是一種天然產(chǎn)物，具有廣泛的應(yīng)用前景。其中，殼聚糖酶是殼聚糖分解過(guò)程中不可或缺的酶類，能夠催化殼聚糖的降解和轉(zhuǎn)化，因此在殼聚糖的利用上具有重要的意義。Bacillussp.S65是一種來(lái)源于土壤中的菌株，具有高產(chǎn)殼聚糖酶的特點(diǎn)。所以通過(guò)對(duì)該菌株殼聚糖酶的研究，既可以增加對(duì)該菌株的了解，也可為殼聚糖的生產(chǎn)提供理論依據(jù)。三、研究目的本研究的主要目的是：1.對(duì)Bacillussp.S65的殼聚糖酶進(jìn)行分離純化。2.對(duì)該菌株的殼聚糖酶基因進(jìn)行克隆和表達(dá)。3.對(duì)殼聚糖活性進(jìn)行測(cè)定和性質(zhì)分析。四、研究?jī)?nèi)容和主要技術(shù)路線本研究的具體內(nèi)容是：1.培養(yǎng)菌株Bacillussp.S65，收集菌液。2.利用離子交換層析和凝膠過(guò)濾層析等方法對(duì)殼聚糖酶進(jìn)行分離純化。3.利用PCR方法從Bacillussp.S65中擴(kuò)增殼聚糖酶基因。4.對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆和測(cè)序分析。5.構(gòu)建表達(dá)載體并進(jìn)行表達(dá)，檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物。6.對(duì)克隆的酶進(jìn)行活性鑒定和性質(zhì)分析。主要技術(shù)路線：1.菌株的獲取和傳承。2.菌液的生長(zhǎng)和收集。3.各類層析技術(shù)的操作，包括離子交換層析和凝膠過(guò)濾層析等。4.PCR擴(kuò)增、克隆和檢驗(yàn)。5.表達(dá)載體構(gòu)建和表達(dá)產(chǎn)物檢測(cè)。6.酶的活性鑒定和性質(zhì)分析。五、研究進(jìn)度安排1.2019年2月-3月：對(duì)Bacillussp.S65進(jìn)行基礎(chǔ)研究并培養(yǎng)該菌株。2.2019年4月-6月：對(duì)殼聚糖酶進(jìn)行初步分離純化。3.2019年7月-8月：PCR擴(kuò)增漢中凱鑫展會(huì)公司殼聚糖酶基因和進(jìn)行克隆和檢驗(yàn)。4.2019年9月-11月：表達(dá)載體構(gòu)建和表達(dá)產(chǎn)物檢測(cè)。5.2019年12月-2020年1月：對(duì)克隆的酶進(jìn)行活性鑒定和性質(zhì)分析。6.2020年2月-3月：檢驗(yàn)和分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并撰寫畢業(yè)論文。六、預(yù)期成果1.完成Bacillussp.S65的殼聚糖酶分離純化。2.克隆和表達(dá)Bacillussp.S65的殼聚糖酶基因。3.確定殼聚糖酶的活性和基本性質(zhì)。4.發(fā)表相關(guān)研究論文。七、存在問(wèn)題及解決措施1.對(duì)殼聚糖酶的分離純化過(guò)程需要不斷改進(jìn)和完善。解決措施：技術(shù)的多方位應(yīng)用和不斷探索新的方法。2.對(duì)Bacillussp.S65的酶基因信息缺乏。解決措施：采取多種方法進(jìn)行擴(kuò)增