《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱

《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱課程編號(hào)：31590060學(xué)時(shí)56學(xué)分3課程的性質(zhì)和任務(wù)本課程通過(guò)學(xué)習(xí)生物化學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)，使學(xué)生具有初步的科學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)芰皣?yán)格的科學(xué)作風(fēng)，同時(shí)驗(yàn)證生物化學(xué)的某些基本理論知識(shí)，加深感性認(rèn)識(shí)。教學(xué)要求和方法通過(guò)本門(mén)課程的學(xué)習(xí)，要求學(xué)生在掌握生物化學(xué)課程的基本理論和基本知識(shí)的同時(shí)學(xué)習(xí)生物化學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)技能，掌握比色、紙層析、電泳、分子篩柱層析、生化制備等基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。通過(guò)學(xué)生自己動(dòng)手親自參與來(lái)實(shí)現(xiàn)上述教學(xué)要求。教學(xué)內(nèi)容要求教學(xué)目的是使學(xué)生學(xué)會(huì)生化常用的儀器設(shè)備，培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力和解決實(shí)際問(wèn)題的能力。考試方式及方法平時(shí)成績(jī)和考查相結(jié)合。配套的實(shí)驗(yàn)教材或指導(dǎo)書(shū)生化教研組2000年自編?生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)?適用專(zhuān)業(yè)漁業(yè)學(xué)院生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目序號(hào)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)類(lèi)型實(shí)驗(yàn)類(lèi)別實(shí)驗(yàn)要求每組人數(shù)1氨基氮測(cè)定—甲醛滴定法3綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修22蛋白質(zhì)濃度測(cè)定—Folin-酚法，紫外吸收法及其比較6綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修23血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳3綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修24總糖和還原糖測(cè)定—3，5-二硝基水楊酸法4綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修25酶的專(zhuān)一性3驗(yàn)證型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修26蛋白酶的活力測(cè)定4綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修27酵母核糖核酸（RNA）的提取制備4綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修28葡聚糖凝膠層析3綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修29氨基移換反應(yīng)6綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修210蛋白質(zhì)的提取制備和活力測(cè)定10綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修211過(guò)氧化物酶同工酶聚丙烯酰氨凝膠電泳10綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修212底物濃度對(duì)酶活性的影響—蔗糖酶米式常數(shù)的測(cè)定6綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修13氨基酸的分離鑒定—紙層析法3綜合型技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)必修實(shí)驗(yàn)一氨基氮測(cè)定—甲醛滴定法（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆瞻被岬膬尚噪x子性質(zhì)，以次法定量蛋白質(zhì)發(fā)酵食品氨基定氮的含量。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：1．樣品測(cè)定2．計(jì)算樣品氨基氮含量主要儀器設(shè)備及配套數(shù)1.儀器：吸量管5ml，10ml；量杯10ml；三角瓶；酸度計(jì)2.試劑：甲醛溶液；0.01N氫氧化鈉實(shí)驗(yàn)室名稱：生化實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)濃度測(cè)定——Folin一酚法，紫外吸收法及其比較（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)習(xí)Folin－酚法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理和方法。2.進(jìn)一步掌握比色法或分光光度法，確定最大吸收波長(zhǎng)、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線、準(zhǔn)確使用測(cè)定儀器等。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：1.Folin—酚法中標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2.Folin—酚法中樣品液的測(cè)定3.紫外吸收法中標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制4.紫外吸收法中樣品液的測(cè)定（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)：1.儀器：吸量管（0.5、1.05ml）與吸量管架；試管與試管架；分光光度計(jì)；紫外分光光度計(jì)2.試劑：Folin一酚試劑A；Folin一酚試劑B；各蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（400ｕg/ml）；蛋白質(zhì)樣品液（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：生化實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)三血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．掌握醋酸薄膜電泳的原理及操作2．定量測(cè)定血清中各種蛋白質(zhì)的相對(duì)百分含量（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：1．浸泡2．點(diǎn)樣3．電泳4．染色5．漂洗（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)：主要儀器：毛細(xì)管1.5ｍｍ內(nèi)徑，電泳儀，電泳槽實(shí)驗(yàn)室名稱：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)四總糖和還原糖測(cè)定――3.5－二硝基水楊酸法實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.掌握還原糖和總糖的測(cè)定原理2.學(xué)習(xí)用比色法測(cè)定還原糖的方法（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作2.樣品中還氧糖和總糖的測(cè)定（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)：主要儀器：容量瓶，玻璃漏斗,吸管,量筒,721型分光光度計(jì)，電熱恒溫水浴鍋，水浴鍋配套數(shù)：10套（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)五酶的專(zhuān)一性，溫度、PH、激活劑、抑制劑對(duì)酶活性的影響（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．了解酶的特異性2．掌握檢查酶的特異性的方法及其原理3．通過(guò)檢驗(yàn)不同溫度下唾液淀粉酶的活性，了解溫度對(duì)酶活性的影響4．了解pH對(duì)酶活性的影響5．學(xué)習(xí)測(cè)定酶的最適pH的方法6．了解酶促反應(yīng)的激活與抑制7．學(xué)會(huì)檢定激活劑和抑制劑影響酶反應(yīng)的方法和原理（二）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1．溫度對(duì)酶活力的影響2．pH對(duì)酶活力的影響3．活化劑和抑制劑對(duì)唾液淀粉酶的影響4．酶對(duì)底物的專(zhuān)一性（三）主要儀器設(shè)備及其配套數(shù)主要儀器：水浴鍋，吸量管，白瓷瓶，小漏斗，燒杯，量筒，滴管，玻璃漏斗配套數(shù)：10套（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)六蛋白酶的活力測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.了解蛋白水解酶測(cè)定的一般原理和基本方法2.學(xué)習(xí)一種測(cè)定蛋白酶活力的常用方法和操作要點(diǎn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：1.酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作2.蛋白酶活力測(cè)定（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)：主要儀器：試管，吸管，721型分光光度計(jì)，電熱恒溫水浴鍋配套數(shù)：10套（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)七：酵母核糖核酸（RNA）的提取制備（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)和掌握用鹽溶法從動(dòng)物組織提取核酸的原理和操作技術(shù)（二）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：破碎細(xì)胞提取分離沉淀RNA洗滌及抽濾干燥（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)：主要儀器：量筒,三角燒瓶,吸濾瓶,布氏漏斗，表面皿,溫度計(jì),干燥器，離心機(jī)，水浴鍋，烘箱，藥物臺(tái)秤配套數(shù)：10套（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)八葡聚糖凝膠層析（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．學(xué)習(xí)和掌握分子篩凝膠層析法的工作原理和基本操作技術(shù)，包括膨脹、裝柱、加樣、洗脫等。2.通過(guò)實(shí)驗(yàn)，學(xué)習(xí)應(yīng)用該法分離蛋白質(zhì)的一般原理，以及了解葡聚糖凝膠的選用原則。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：1．凝膠容脹2．裝柱3．加樣4．洗脫與收集5．繪制洗脫曲線（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)主要儀器：吸管1m，層析柱,刻度離心筒配套數(shù)：10套（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)九氨基轉(zhuǎn)換反應(yīng)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)代謝作用的一種研究方法——定性測(cè)定組織中氨基酸移換酶活性的方法。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：1.肌肉糜制備2.氨基酸樣品的制備3.紙層析（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)1.儀器：吸管1ml；試管5*15cm；培養(yǎng)皿15cm；毛細(xì)管；2.試劑：0.01M磷酸緩沖液；0.1M丙氨酸；0.1Ma—酮戊二酸；0.1M谷氨酸；0.1%茚三酮丙酮溶液；層析展開(kāi)劑（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：生化實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)十蛋白酶的提取制備和活力測(cè)定（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)蛋白酶活力的測(cè)定方法，深入了解酶的活力和比活力的概念（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：1.蛋白酶的制備（提取、鹽析、透析、純化）2.蛋白酶的活力測(cè)定3.酶蛋白的含量測(cè)定（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)高速組織搗碎機(jī)，離心機(jī)，透析袋，分光光度計(jì)（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：生化實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)十一過(guò)氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理2.學(xué)習(xí)聚丙烯酰胺凝膠電泳的操作技術(shù)（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容1.樣品的制備2.凝膠的制備3.裝槽4.點(diǎn)樣（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)：圓盤(pán)電泳儀，真空泵及抽濾瓶（四）實(shí)驗(yàn)室名稱：生化實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)十二底物濃度對(duì)酶活性的影響—蔗糖米式常數(shù)的測(cè)定（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.了解酶促動(dòng)力學(xué)研究的范圍2.以蔗糖酶為例，掌握測(cè)定米氏常數(shù)（Km值）的原理和方法（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2.根據(jù)活力選擇酶濃度3.底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響—米式常數(shù)的測(cè)定（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)：100ml三角燒瓶；研缽；50ml及100ml容量瓶；離心機(jī)；糖管；恒溫水??；吸量管；停表；分光光度計(jì)(四)實(shí)驗(yàn)室名稱：生化實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)十三氨基酸的分離鑒定——紙層析法（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．學(xué)習(xí)分配層析的原理2．掌握氨基酸紙上層析法的操作技術(shù)（包括點(diǎn)樣、平衡、展層、顯色、鑒定）3．學(xué)習(xí)分析未知樣品的氨基酸成分（水解、層析及鑒定）（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容：1．點(diǎn)樣2．展開(kāi)3．顯色4．計(jì)算各種氨基酸的Rf值（三）主要儀器設(shè)備及配套數(shù)：主要儀器：層