動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子的研究進(jìn)展

動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子的研究進(jìn)展

轉(zhuǎn)移因素（t）是存在于淋巴結(jié)和白細(xì)胞中的一種小分子物質(zhì)。它可以將供體中的細(xì)胞免疫功能轉(zhuǎn)移到受體，從而提高受體的免疫功能。TF屬多肽類物質(zhì),含多種氨基酸,相對(duì)分子質(zhì)量低,無熱原,無抗原性,無毒副作用且無種屬差異,是一種新型而又安全的免疫制劑。1949年由Lawrence首次發(fā)現(xiàn)。Lawrence發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌素陽(yáng)性供者的活淋巴細(xì)胞能使皮試陰性者轉(zhuǎn)變?yōu)槠ぴ囮?yáng)性。以此為依據(jù),Lawrence等1953年將其對(duì)應(yīng)的白細(xì)胞可透析物質(zhì)(DLE)重復(fù)實(shí)驗(yàn)后,發(fā)現(xiàn)DLE具備活淋巴細(xì)胞同樣的功能,并把引起這種效應(yīng)的物質(zhì)稱之為“轉(zhuǎn)移因子”。20世紀(jì)70、80年代以來,隨著細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展,人們對(duì)轉(zhuǎn)移因子的研究逐步深入,對(duì)動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子的應(yīng)用也進(jìn)行了廣泛的探索。目前,已了解了轉(zhuǎn)移因子的基本成分、種屬差異、特異性,建立了部分體內(nèi)外檢測(cè)方法,并正在積極探索將動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子用于醫(yī)學(xué)臨床試驗(yàn)。美國(guó)已有部分品種的轉(zhuǎn)移因子獲準(zhǔn)生產(chǎn)并用于動(dòng)物疫病治療。目前,用人、豬、牛、羊的白細(xì)胞、脾臟和淋巴結(jié)制備轉(zhuǎn)移因子并用于臨床的報(bào)道已經(jīng)很多。本文就雞轉(zhuǎn)移因子的研制及其臨床應(yīng)用進(jìn)行回顧和論述。1.制備方法和材料1.1超濾、純化、分離雞轉(zhuǎn)移因子的制備方法主要采用透析-過柱法、超濾-過柱法或單純透析法。曾仕廉等報(bào)道,將細(xì)胞置于-50℃凍結(jié),再置于37℃水浴融化,如此反復(fù)凍融6次,4000r/min低溫冷凍離心,上清液經(jīng)中空纖維超濾器超濾,截留相對(duì)分子質(zhì)量5000的超濾液,再采用SephadexG-25柱層析進(jìn)行洗脫純化。李富桂等報(bào)道,將組織置于組織搗碎機(jī)中粉碎勻漿后,用超聲波裂解組織細(xì)胞,再于4000r/min離心20min。棄去沉淀,將上清液裝入透析袋,攪拌透析48h,收集透析外液,蛋白質(zhì)檢測(cè)為陰性,再將透析外液用SephadexG-25柱層析進(jìn)行洗脫純化。江青艷等、日穆德瑪?shù)群婉R鳳龍等報(bào)道,用無菌鹽水洗凈組織,在無菌條件下攪碎、稱重,加1.5倍雙蒸餾水制成勻漿,凍融9次,3000r/min離心30min,取上清液用透析袋進(jìn)行透析,溫度為4℃,磁力攪拌透析48h。1.2雞臟器的原料雞轉(zhuǎn)移因子的制備材料以脾臟為主,也有報(bào)道用雞胚細(xì)胞的。用雞脾臟為原料的有粵黃雞、烏雞、來亨雞、AA肉仔和AA成雞脾臟;雞胚細(xì)胞系采用雞胚白細(xì)胞為原料制備雞轉(zhuǎn)移因子。2.雞胚tf成分雞轉(zhuǎn)移因子透析液是呈無色或微黃的透明液體,而層析液為無色透明液體,略帶腥膻氣味。其pH值為6.7左右,用磺基水楊酸鈉檢測(cè)蛋白反應(yīng)為陰性。雞轉(zhuǎn)移因子熱原質(zhì)檢驗(yàn)和毒性檢驗(yàn)均為陰性,對(duì)紅細(xì)胞也沒有任何毒害作用。A260/A280≥2.0。聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳結(jié)果雞胚白細(xì)胞TF得到5條譜帶。薄層色譜掃描雞胚白細(xì)胞TF含有5個(gè)組分。雞胚TF的紅外吸收波數(shù)為3310cm-1、2974cm-1、1656cm-1、1544cm-1、1400cm-1和1083cm-1,雞胚TF氨基酸組分為谷氨酸、天門冬氨酸、甘氨酸等16種氨基酸;醋酸纖維素薄層電泳檢測(cè)顯示雞胚TF含有RNA組分?；淈S雞脾TF經(jīng)SephadexG-25層析得到3個(gè)組分,紫外-可見光掃描光譜分析表明,透析外液及各組分的最大吸收峰值各不相同,與透析外液相比,組分Ⅰ和組分Ⅱ峰值右移,組分Ⅲ峰值左移,透析外液及各組分的A260/A280值也不相同,以組分Ⅲ最高,為10.05,組分Ⅱ次之,為5.25,透析外液為2.99,組分Ⅰ最低,為1.23,表明透析外液及各組分中核酸與多肽含量的比值:組分Ⅲ>組分Ⅱ>提取液>組分Ⅰ。氨基酸組分含有甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸等17種氨基酸。李富桂等在研究AA肉雞TF時(shí)報(bào)道,無論在260nm或是在280nm處均出現(xiàn)2個(gè)吸收峰。第1峰低且窄,第2峰高且寬,在勻漿時(shí)使用不同的溶液對(duì)波形具有一定的影響,這主要表現(xiàn)在第2峰到達(dá)頂峰的速度或是緩慢或是急速,從而波形陡峭或平緩。通過對(duì)層析各組分的紫外分析,TF完全集中在第2峰中。根據(jù)260nm和280nm處的吸收比值,對(duì)照層析所記錄的波形分析,TF主要存在于峰值部分,且近似于正態(tài)分布曲線,即隨著波形的上升,比值增大,到達(dá)頂峰后,波形下降比值也隨之減少。勻漿時(shí)使用不同的溶液對(duì)TF在波形中的位置有影響,即偏于峰前或偏于峰后有所不同。多肽含量為0.1mg/ml。日穆德瑪?shù)葓?bào)道,烏雞脾轉(zhuǎn)移因子多肽含量500μg/ml,核糖16.88μg/ml;來亨雞脾轉(zhuǎn)移因子多肽含量454μg/ml,核糖16.38μg/ml。烏雞脾轉(zhuǎn)移因子最高吸收峰值在波長(zhǎng)250.5nm處。烏雞脾轉(zhuǎn)移因子經(jīng)SepherdexG-25層析,分離得到6個(gè)組分,其中4、5峰較高,其A260/A280比值分別為2.14和2.83。用高效液相色譜進(jìn)行核糖分析,在254nm處出現(xiàn)4個(gè)吸收峰,其中有2個(gè)峰值較高。3.tf對(duì)b細(xì)胞免疫作用轉(zhuǎn)移因子具有很強(qiáng)的生物學(xué)活性。日穆德瑪?shù)群屠钕喟驳炔捎忙?乙酸萘酯染色法觀察T、B淋巴細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)烏雞TF可使烏雞的T淋巴細(xì)胞明顯增多(對(duì)照組和試驗(yàn)組的xˉ±sxˉ±s分別為14.70±5.65和23.55±9.47)。表明正常雞體注射烏雞TF后,對(duì)其細(xì)胞免疫功能具有明顯增強(qiáng)作用,用3H-TdR摻入法抽測(cè)TF-H(正常人轉(zhuǎn)移因子)和TF-BC(烏雞脾細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子)對(duì)機(jī)體細(xì)胞免疫活性的影響,發(fā)現(xiàn)對(duì)照組和試驗(yàn)組差異有非常顯著意義(F=14.935,P<0.01)。馬鳳龍等在雞新城疫(ND)I系疫苗與TF聯(lián)合應(yīng)用的5次檢測(cè)中,試驗(yàn)組的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均高于對(duì)照組,差異有非常顯著意義(P<0.01)。TF與ND-Lasota疫苗和法氏囊病(IBD)疫苗聯(lián)合應(yīng)用,明顯提高體液免疫的效果,試驗(yàn)組的效價(jià)均高于對(duì)照組,兩者差異有顯著(P<0.05)或非常顯著意義(P<0.01)。李富桂等用淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)法,以雞喉氣管炎(LT)病毒為刺激原檢測(cè)雞TF對(duì)T細(xì)胞的影響,發(fā)現(xiàn)48、72和96h后試驗(yàn)組的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均高于對(duì)照組,差異有非常顯著意義(P<0.01),說明雞TF對(duì)細(xì)胞免疫效果具有增強(qiáng)作用。用血凝抑制實(shí)驗(yàn)法,以雞減蛋綜合征(EDS-76)病毒為刺激原檢測(cè)雞TF對(duì)B細(xì)胞的免疫效果,發(fā)現(xiàn)對(duì)照組與試驗(yàn)組的平均血凝抑制效價(jià)(log2χ)相差0.7個(gè)滴度,最高時(shí)相差1個(gè)滴度,數(shù)理統(tǒng)計(jì)結(jié)果差異有顯著意義(P<0.05)。李相安等和江青艷等還證明雞TF可促進(jìn)免疫器官的發(fā)育,與對(duì)照組相比,口服雞胚TF組免疫器官脾及法氏囊平均相對(duì)濕重(‰)分別高出0.114和0.046,差異有顯著意義(P<0.01);注射給藥組脾和法氏囊的相對(duì)濕重(‰)也分別高于對(duì)照組。王忠等證實(shí)雞TF對(duì)小白鼠體重增長(zhǎng)有促進(jìn)作用。王建文等報(bào)道TF試驗(yàn)組與對(duì)照組相比,試驗(yàn)組雞體重顯著增加(12日齡時(shí)P<0.05,16日齡時(shí)P<0.01)。江青艷等用雞TF給粵黃雞注射,表明高、中濃度的TF對(duì)粵黃雞的增重有明顯的促進(jìn)作用,同時(shí)可促進(jìn)粵黃雞的甲狀腺素(T4)和生長(zhǎng)激素(GH)分泌。4.在實(shí)踐中的應(yīng)用4.1tf的臨床療效和感染及對(duì)馬立克氏病的療效轉(zhuǎn)移因子已廣泛用于人及動(dòng)物疾病的治療,雞TF在禽病的治療方面也有不少報(bào)道。李富桂等報(bào)道TF對(duì)法氏囊病(IBD)具有治療作用,試驗(yàn)組的治愈率為60%,卵抗治療組為80%,對(duì)照組的存活率為20%;特別是當(dāng)?shù)诙胃腥綢BD時(shí),試驗(yàn)組表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)。實(shí)驗(yàn)全部結(jié)束時(shí),TF試驗(yàn)組的存活率為60%,卵抗治療組為20%,對(duì)照組的存活率為20%,TF具有良好的療效。對(duì)馬立克氏病(MD)也表現(xiàn)出一定的療效,在連續(xù)使用雞轉(zhuǎn)移因子8d后,癱瘓雞全部站立,恢復(fù)行走,但第10天又重復(fù)發(fā)作。盡管還并不十分了解TF對(duì)MD的整個(gè)病理組織學(xué)的形態(tài)變化,但臨床表現(xiàn)說明雞TF對(duì)MD具有明顯的抑制作用。王建文等報(bào)道雞轉(zhuǎn)移因子在一定程度上抑制和緩解急性實(shí)驗(yàn)性球蟲病的臨床癥狀,阻礙球蟲病的發(fā)生和發(fā)展。黃建文等還報(bào)道,雞TF對(duì)人工感染禽流感的雛雞,能明顯改善臨床癥狀,減少死亡,縮短病程,可用于禽流感的早期治療。4.2tf對(duì)雞凝抑制作用TF不但可以用于疾病的治療,而且可以用于疾病的預(yù)防,主要是與疫苗聯(lián)合使用,加強(qiáng)疫苗的免疫作用。用雞TF與雞減蛋綜合征疫苗聯(lián)合使用,可明顯提高其抗體效價(jià),還可以使人工感染流感病毒的雛雞較早產(chǎn)生血凝抑制抗體,且能快速達(dá)到較高水平。馬鳳龍等報(bào)道,雞脾TF對(duì)新城疫IV系疫苗(ND-Lasota系)和傳染性法氏囊病(IBD)疫苗的初免試驗(yàn)具有協(xié)同作用。試驗(yàn)組與對(duì)照組比較,其瓊脂雙擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)(AGP)的平均效價(jià)均高于對(duì)照組,差異有顯著(P<0.05)或非常顯著意義(P<0.01)。同時(shí),試驗(yàn)組新城疫血凝抑制(ND-HI)的抗體效價(jià)也均高于對(duì)照組,差異有非常顯著意義(P<0.01)。在ND-I系疫苗的加強(qiáng)免疫試驗(yàn)中,雞脾TF無論是用作疫苗肌注,還是口服,對(duì)雞ND-I系苗的免疫均有加強(qiáng)作用。試驗(yàn)組HI效價(jià)均高于對(duì)照組,差異有顯著(P<0.05)或非常顯著意義(P<0.01),但肌注組和口服組之間的HI效價(jià)差異無顯著意義。在EDS-76滅活疫苗免疫試驗(yàn)中,雞脾TF對(duì)雞油乳劑滅活疫苗的免疫同樣具有增強(qiáng)作用。試驗(yàn)組的HI效價(jià)均高于對(duì)照組,差異有顯著意義(P<0.05)或非常顯著意義(P<0.01)。日穆得瑪?shù)葓?bào)道,烏雞轉(zhuǎn)移因子與雞新城疫I系和雞傳染性支氣管炎H120二聯(lián)活疫苗聯(lián)合使用時(shí),對(duì)艾維茵肉仔雞沒有任何毒性作用,對(duì)細(xì)胞免疫具有活化作用,對(duì)血清γ-球蛋白無明顯作用,但對(duì)艾維茵肉仔雞生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用。日穆得瑪?shù)冗€報(bào)道,用烏雞轉(zhuǎn)移因子配合雞新城疫疫苗不僅可以提高抗體效價(jià),而且使疫苗抗體提前出現(xiàn)較高的水平,并能維持較長(zhǎng)的時(shí)間。邵兵等的研究也得到了相同的結(jié)果。無論是預(yù)防或治療,TF的主要使用途徑有注射和口服兩種,均表現(xiàn)出較好的效果。李富桂等證明,TF口服組作用快,