hbsag酶聯(lián)免疫吸附試劑盒二次利用可行性分析

hbsag酶聯(lián)免疫吸附試劑盒二次利用可行性分析

目前，采用酶聯(lián)免疫吸毒儀檢測乙發(fā)育醇酯表面活性劑的首選方法是許多實(shí)驗(yàn)室的首選方法，尤其是在健康體檢方面的大幅劑量。判斷結(jié)果時(shí),通常是用目測法。在有多余酶試劑的情況下,HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試劑盒能否進(jìn)行二次利用?其準(zhǔn)確性、重復(fù)性如何?至今尚未見這方面的報(bào)道。我們針對此課題進(jìn)行了實(shí)驗(yàn),現(xiàn)報(bào)告如下。1材料和方法1.1陰性結(jié)果實(shí)驗(yàn)由英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司生產(chǎn)。經(jīng)首次使用后(目測結(jié)果,未加終止液)挑選陰性結(jié)果的測試孔,用自來水洗4次,拍干水份,置冰箱保存?zhèn)溆?簡稱二次利用板)。1.2樣本來源363份HBsAg陽性及159份HBsAg陰性的血清,由體檢人群中,隨機(jī)抽取。1.3樣品檢測及數(shù)據(jù)判斷按廠家提供的作用說明書操作:加血清50μl于相應(yīng)測試孔中,分別在每孔中加入酶標(biāo)記抗體50μl,輕拍混勻,置37℃暗處25min,室溫平衡5min,在電腦洗板機(jī)中用洗滌液洗滌5次,完后扣干,每孔加底物A、B各50μl,輕拍混勻,置37℃15min。目測或加終止液50μl混勻,上機(jī)用酶標(biāo)分析儀讀數(shù),判斷結(jié)果。臨界值=陰性對照OD均值N×2.1;陰性對照OD均值大于0.1時(shí)應(yīng)重新試驗(yàn),小于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。結(jié)果判斷:樣品OD值S/C.0≥1HBsAg陽性;<1者為HBsAg陰性。1.4x-711酶指數(shù)分析儀上海迅達(dá)醫(yī)療儀器有限公司生產(chǎn);自動酶標(biāo)洗板機(jī):北京拓普分析儀器有限公司生產(chǎn)。2結(jié)果2.1hbsag血清樣本的準(zhǔn)確性的測定對363份HBsAg陽性標(biāo)本及159份陰性標(biāo)本,分別用同一批號的試劑盒及二次利用板測試,占目測結(jié)果,再加終止液上機(jī)測試其結(jié)果見表1。2.2吸收亮度的比較對19份HBsAg陽性血清,分別測其二次利用前、后的吸光度,其結(jié)果見表2。2.3吸收層的精度比較對6份陽性血清,分別進(jìn)行多次二次利用前、后的測試,上機(jī)測其吸光度,見表3。2.4使用第2部分保存時(shí)間和結(jié)果制備好的二次利用板,經(jīng)第1d、第5d、第10d、第15d、第60d各用相同的陽性血清測定1次,其結(jié)果見表4。3次利用的吸光度3.1對363份HBsAg陽性標(biāo)本及159份HBsAg陰性標(biāo)本,用同一批號的HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試劑盒及當(dāng)天制備的二次利用板進(jìn)行測定,結(jié)果經(jīng)過目測判定和酶標(biāo)儀判定:陽性標(biāo)本準(zhǔn)確率為100%,陰性標(biāo)本中有2份標(biāo)本為目測判定弱陽性,酶標(biāo)儀判定為陽性,陰性標(biāo)本準(zhǔn)確率為98.7%(χ2=1.9×10-2,P>0.05),二次利用前、后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異無顯著性的意義;造成假陽性的原因,可能是制備二次利用板時(shí),有部分略顯色的測試孔未去除。提示:首次使用后的HBsAg酶聯(lián)免疫吸附盒,可以進(jìn)行二次回收利用,用于對HBsAg標(biāo)本的測定,但對結(jié)果陽性的標(biāo)本,建議用新的試劑復(fù)查。3.2在對二次利用前、后試劑的吸光度比對試驗(yàn)中,雖然,二次利用前陽性標(biāo)本、空白值、陽性對照的吸光度,均要高于二次利用的吸光度(t=5.25,P<0.01),其吸光度差異具有非常顯著性的意義,但二次利用的吸光度呈整體降低(陰性對照除外,見表2),并不影響目測和酶標(biāo)儀的判斷結(jié)果。因?yàn)槲舛确ㄊ菧y定若干陰性對照標(biāo)本,定出上限,以待測標(biāo)本OD值大于該上限者為陽性;或以陰性標(biāo)本OD均值+2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差作為陰性和陽性的界限。造成吸光度下降的原因,可能是試劑盒測試孔的包被物,經(jīng)多次洗滌后,濃度有所降低。3.3相同的樣本在二次利用前、后,經(jīng)多次測定,二次利用的標(biāo)本吸光度平均值均降低(t=3.97,P<0.01),差異有非常顯著性的意義,但吸光度的精密度(SD)(t=2.41,P>0.05),差異無顯著性的意義。見表3。3.4對制備二次利用測試孔所用洗滌液的比較中,用隨試劑盒所附洗滌液稀釋后(pH=7.4)洗滌5次的檢測效果比用自來水(pH=6.0,游離余氯=0.05mg/L)洗滌5次的效果更差。兩種洗板液所制反應(yīng)板的目測陽性檢出率之間的差異有非常顯著的意義(χ2=9.6,P<0.01);而上機(jī)判斷則差異無顯著性的意義(χ2=2.03,P>0.05)見表4。原因可能是緩沖洗滌液,更易洗脫包被物,使包被物濃度下降,造成檢測結(jié)果的假陰性。建議使用自來水或蒸餾水(pH=6.0,游離余氯<0.05mg/L)來洗滌,且洗滌次數(shù)為4次為宜。3.5對二次利用板保存時(shí)間的觀察中發(fā)現(xiàn):用自來水制備的二次利用板從第1d到第60d的陽性標(biāo)本檢測中,目測和酶標(biāo)儀判定結(jié)果均為陽性,準(zhǔn)確率為100%;而用緩沖液制備的二次利用板,在制備當(dāng)天使用,準(zhǔn)確率為100%;第5d以后的顯色反應(yīng)明顯下降,目測判定為微弱陽性,顯色反應(yīng)越來越差,假陰性也隨之增高(見表4)。3.6我們曾對別的廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品,也做過二次利用試驗(yàn),但以失敗告終。提示不同的廠家,由于質(zhì)量不同,二次利用試驗(yàn)的結(jié)果也不一樣。建議使用質(zhì)量好的名牌產(chǎn)品。3.7HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試劑盒的二次利用,可降