植物類物質(zhì)提取與氣相色譜-質(zhì)譜分析技術(shù)的研究進(jìn)展

植物類物質(zhì)提取與氣相色譜-質(zhì)譜分析技術(shù)的研究進(jìn)展

這種化合物是植物的自然產(chǎn)物，含有4萬多種物質(zhì)。萜類化合物的合成途徑可產(chǎn)生初生代謝物和次生代謝物。初生代謝物包括植物激素(赤霉酸、脫落酸和細(xì)胞分裂素),參與光合作用的類胡蘿卜素、葉綠素和質(zhì)體醌,用于呼吸作用的泛醌,以及影響膜結(jié)構(gòu)的甾醇。次生代謝物包括單萜、倍半萜、雙萜和三萜等,是以異戊二烯為單位的烴類及其含氧衍生物。在植物次生代謝物中,萜類化合物是種類最多、結(jié)構(gòu)最復(fù)雜的一類。許多萜類化合物在商業(yè)、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)和生態(tài)上具有重要的價(jià)值。萜類化合物可以作為調(diào)料、香料用于食品和化妝品;萜類化合物還決定果實(shí)的品質(zhì)和花的香味,從而影響農(nóng)產(chǎn)品的價(jià)值。此外,許多萜類化合物具有抗癌(他克唑和紫蘇醇)、抗瘧(青蒿素)、抗?jié)?、抗肝炎、抗菌和利?甘草素)等功效。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,植物萜類化合物既可直接防御病原物或害蟲,也可通過吸引天敵間接防御農(nóng)業(yè)害蟲。因此,從植物中提取的萜類化合物可直接作為農(nóng)藥使用,還可通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)改變植物萜類化合物的水平以防治害蟲。有趣的是,植物與植物之間能夠以萜類化合物作為化學(xué)通訊信號(hào)互相“交流”,共同抵御病蟲害。然而,迄今為止,人們只研究了少量萜類化合物的功能,對(duì)大部分萜類化合物的功能知之甚少。并且,即使結(jié)構(gòu)相似的萜類化合物,其生物活性差異也很大。鑒于萜類化合物的多樣性和重要性,要有效利用這類物質(zhì)、研究其生態(tài)功能,需要準(zhǔn)確地提取和分析植物萜類化合物。萜類化合物種類眾多,結(jié)構(gòu)多樣,化學(xué)性質(zhì)差異較大。通常,低分子量的單萜和倍半萜多具有揮發(fā)性,而高分子量的雙萜及其以上的化合物一般不具有揮發(fā)性。另外,植物萜類化合物表達(dá)水平具有時(shí)空性,即在不同的組織器官或不同的發(fā)育階段表達(dá)水平有所差異。因此,要根據(jù)特定的研究,采用合理的方法測(cè)定萜類化合物。鑒于此,本文綜述了植物萜類化合物提取和分析方法的研究進(jìn)展,希望能夠促進(jìn)萜類化合物的研究和利用。13材料提取技術(shù)1.1粗提物的提取溶劑提取法是利用溶劑與溶質(zhì)之間的親和性,直接借助溶劑萃取技術(shù),從植物組織或器官中分離出萜類物質(zhì),是運(yùn)用比較廣泛的方法之一。通常先通過分離、切碎、干燥、破碎和致冷碾磨等方法對(duì)植物材料進(jìn)行預(yù)處理。隨后加入溶劑浸提一段時(shí)間,接著對(duì)浸提液進(jìn)行過濾、濃縮,得到粗提物。粗提物經(jīng)蒸發(fā)濃縮后便得到最終樣品。有時(shí)還可直接通過溶劑淋洗植物葉片獲得粗提物。溶劑提取效果受植物樣品的預(yù)處理方法、提取劑的種類和濃度、浸提時(shí)間和溫度等影響,因此試驗(yàn)過程中最好對(duì)這些條件進(jìn)行優(yōu)化。常用的提取劑有甲醇、乙醇、正乙烷、乙醚、氯仿、苯等。該方法操作簡(jiǎn)單,回收率較高,適合大量樣品的提取,但溶劑消耗量大,所用的有機(jī)溶劑往往對(duì)人體有害,且只能對(duì)離體植株進(jìn)行提取,無法實(shí)現(xiàn)揮發(fā)性和非揮發(fā)性組分的分離。近年來,在傳統(tǒng)的溶劑提取方法基礎(chǔ)上,出現(xiàn)了許多新的溶劑提取技術(shù)。例如,自動(dòng)索氏提取(AutomatedSoxhletextraction)、微波輔助提取(Microwave-assistedextraction)、超聲波輔助提取(Ultrasonic-assistedextraction)和加速溶劑提取(Acceleratedsolventextraction)等新方法已用于植物萜類化合物的提取。在煙草上的研究顯示,自動(dòng)索氏提取法得到的樣品產(chǎn)量高,而加速溶劑提取法提取效率高,溶劑消耗少,適于提取大量的植物樣品。加速溶劑提取法有望取代經(jīng)典的溶劑提取方法。1.2蒸餾法超聲法水蒸氣蒸餾法(Steamdistillation,SD)的主要步驟是首先使水相和有機(jī)相充分接觸溶解,然后通過蒸汽將水相中夾帶的植物萜類成分提取轉(zhuǎn)移至有機(jī)相中,最后對(duì)有機(jī)提取液進(jìn)行脫水和濃縮。常用的有機(jī)溶劑有乙醚、二氯甲烷、氯仿等。該方法比較適合提取大部分低揮發(fā)性的萜類化合物。水蒸氣蒸餾法包括減壓水蒸汽蒸餾法(Vacuumsteamdistillation,VSD)和同步蒸餾萃取法(Simultaneousdistillationextraction,SDE)等。其中同步蒸餾萃取法是目前最常用的水蒸氣蒸餾提取法。同步蒸餾萃取法是將含有樣品組分的水蒸汽和萃取溶劑蒸汽在一定的裝置中充分混合冷凝后,兩相充分接觸實(shí)現(xiàn)組分的相轉(zhuǎn)移,且在反復(fù)循環(huán)中實(shí)現(xiàn)高效萃取。相對(duì)水蒸汽蒸餾而言,同步蒸餾萃取集提取、蒸餾、萃取為一體,極大地簡(jiǎn)化了整個(gè)樣品預(yù)處理的操作過程,縮短了預(yù)處理時(shí)間。研究表明,同步蒸餾萃取法比其他水蒸氣蒸餾法提取到的物質(zhì)成分更多。水蒸氣蒸餾法屬于氣態(tài)萃取技術(shù),相比于溶劑提取等液態(tài)技術(shù),氣態(tài)技術(shù)能更好地穿過預(yù)處理的材料,并且小分子化合物在氣態(tài)中的擴(kuò)散能力比液態(tài)高。水蒸氣蒸餾法的主要缺點(diǎn)是高溫蒸餾過程中一些熱敏性萜類物質(zhì)易被分解,與水相溶的物質(zhì)無法提取出來。另外,水蒸氣蒸餾法與溶劑提取法一樣只能從離體的植物材料中提取萜類物質(zhì)。1.3低表面活性劑分離法物質(zhì)的氣、液相存在溫度和壓力的平衡點(diǎn),當(dāng)溫度和壓力同時(shí)超過了臨界點(diǎn),物質(zhì)氣、液相界面消失,物質(zhì)就處于超臨界狀態(tài),即超臨界流體(Supercriticalfluid)。超臨界流體萃取技術(shù)(Supercriticalfluidextraction,SFE)是利用超臨界流體作為萃取劑,從液體或固體中萃取特定成分,以達(dá)到分離目的產(chǎn)物的一種新型分離技術(shù)。該技術(shù)綜合了溶劑提取和水蒸氣蒸餾兩種方法的功能和特點(diǎn),在超臨界狀態(tài)下,將超臨界流體和夾帶劑混合物與待分離的物質(zhì)接觸,這樣能夠有選擇性地按物質(zhì)的極性大小、沸點(diǎn)高低和分子量大小依次萃取出來,再借助減壓、升溫的方法使超臨界流體變成普通氣體,被萃取的物質(zhì)便被分離出來。常見的夾帶劑有甲醇、乙醇、丙酮、苯和氯仿等。該法優(yōu)點(diǎn)是:溶劑(常用二氧化碳超臨界流體)易于和產(chǎn)物分離、安全無毒、不造成環(huán)境污染、操作條件溫和、不易破壞有效成分等。但該技術(shù)對(duì)設(shè)備要求較高,無法在野外應(yīng)用。1.4赤字分析1.4.1spme萃取頭的選擇靜態(tài)頂空技術(shù)指將整株植物或部分器官置于味源缸內(nèi),揮發(fā)性萜類物質(zhì)通過吸附劑吸附。所謂“靜態(tài)”是指味源缸內(nèi)的植物周圍空氣不流動(dòng)。因此,萜類物質(zhì)可富集在吸附柱上,能夠避免流動(dòng)空氣中的雜質(zhì)對(duì)含量低的萜類物質(zhì)檢測(cè)的干擾。這種方法更適于收集低揮發(fā)性的萜類物質(zhì)。頂空固相微萃取(Solid-phasemicroextraction,SPME)屬于靜態(tài)頂空分析,是一項(xiàng)新穎的樣品前處理和富集技術(shù),它利用SPME萃取頭置于樣品的頂空位置進(jìn)行萃取。萃取過程包括樣品分析物揮發(fā)至頂空,再擴(kuò)散至萃取涂層,最后在萃取涂層中擴(kuò)散從而實(shí)現(xiàn)萃取。分析物本身的性質(zhì)以及萃取涂層對(duì)分析物的萃取能力是影響SPME萃取效果的主要因素。因此,可根據(jù)萜類化合物的極性和揮發(fā)性選擇不同極性和涂層厚度的萃取頭。該法的主要優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單、迅速、可自動(dòng)取樣分析,而且樣品用量較少,可以測(cè)活體植物材料。該技術(shù)已應(yīng)用于整株植物和部分枝條萜類化合物的分析。但是該法的裝置成本高,提取的樣品必須立即分析,不能長(zhǎng)時(shí)間保存。提取物質(zhì)只能用于化學(xué)分析,不適于生物測(cè)定。盡管近年來固相微萃取技術(shù)有了一定的發(fā)展,但靜態(tài)頂空收集技術(shù)仍顯不足。首先,空氣不流動(dòng)會(huì)提高空氣濕度,積累熱量,從而干擾植物正常的生理過程,最終影響萜類物質(zhì)的釋放。此外,一次收集只能獲得部分釋放的萜類,無法確定一段時(shí)間內(nèi)植物釋放的萜類化合物的動(dòng)態(tài)變化?？傊?靜態(tài)頂空技術(shù)適于揮發(fā)性萜類物質(zhì)的定性分析,可用于檢測(cè)某一時(shí)間點(diǎn)不同植物種或品種萜類物質(zhì)的釋放情況,尚不能定量檢測(cè)萜類物質(zhì)釋放的變化情況。1.4.2頂空動(dòng)態(tài)分析法頂空動(dòng)態(tài)分析法(Dynamicheadspacetrapping,DHT)是目前收集植物揮發(fā)性萜類化合物最常用的方法,其原理是通過動(dòng)力泵抽氣或吹氣將植物在自然條件下釋放的揮發(fā)物經(jīng)潔凈氣流攜帶流經(jīng)特定的吸附劑,揮發(fā)物分子結(jié)合在吸附劑上,使用有機(jī)溶劑將所吸附的揮發(fā)物洗脫下來,從而得到揮發(fā)物的提取液。頂空動(dòng)態(tài)分析法分為封閉式系統(tǒng)(Closed-loopstripping)、“抽氣”系統(tǒng)(Pullsystem)、“吹氣”系統(tǒng)(Pushsystem)以及“吹抽氣”系統(tǒng)(Push-pullsystem)[37,38,39,40,41,42]。封閉式系統(tǒng)中的氣流僅在味源缸內(nèi)循環(huán),其他系統(tǒng)的氣流則來自味源缸外。頂空動(dòng)態(tài)吸附裝置一般包括5個(gè)部分:動(dòng)力泵、空氣凈化柱、空氣流量計(jì)、樣品味源室及揮發(fā)物吸附柱,各部分之間用Teflon管連接。該技術(shù)的關(guān)鍵是吸附劑和洗脫溶劑的選擇以及氣體的流速。常用的吸附劑有活性炭、Super-Q、Porapak-Q和Tenax等;常用的洗脫溶劑有正己烷、乙醚、二氯甲烷等。如果吸附材料耐高溫,還可通過熱解析的方法,將揮發(fā)性萜類物質(zhì)從吸附劑中釋放出來,直接進(jìn)行氣相色譜(Gaschromatography,GC)分析。與溶劑洗脫相比,熱解析可以提高解吸附效率及分析靈敏度,減少樣品處理時(shí)間和雜質(zhì)污染,但熱解析也可能會(huì)造成某些熱不穩(wěn)定物質(zhì)的降解。頂空動(dòng)態(tài)分析法的主要優(yōu)點(diǎn)是能夠提取自然狀態(tài)下或不同處理下整株或某個(gè)器官產(chǎn)生的揮發(fā)性萜類物質(zhì),相比溶劑提取法和水蒸氣蒸餾法,所得組分能夠較為真實(shí)地反應(yīng)植株在自然狀態(tài)下釋放揮發(fā)物的情況,而且該方法具有富集作用,適于痕量分析。但該方法耗時(shí)較長(zhǎng),提取過程中可能會(huì)引入雜質(zhì)從而影響結(jié)果的可靠性。另外,每種吸附劑不能吸附到所有的萜類物質(zhì),要提高吸附效果需要多個(gè)吸附劑的結(jié)合使用。一般而言,對(duì)于非揮發(fā)或低揮發(fā)性的萜類物質(zhì)可以采用溶劑提取法、水蒸氣蒸餾萃取法或超臨界流體提取法。而對(duì)于高揮發(fā)性的萜類物質(zhì)最好采用頂空分析法,或者結(jié)合使用這幾種方法。例如,在收集高揮發(fā)性的番茄(Solanumlycopersicum)萜類物質(zhì)時(shí),頂空固相微萃取比同步蒸餾萃取和頂空動(dòng)態(tài)分析效率更高;而在收集低揮發(fā)性的番茄萜類物質(zhì)時(shí),同步蒸餾萃取比頂空固相微萃取和頂空動(dòng)態(tài)分析更有效。并且與頂空固相微萃取和頂空動(dòng)態(tài)分析相比,同步蒸餾萃取得到的番茄萜類物質(zhì)成分更多。多種方法的結(jié)合使用可取長(zhǎng)補(bǔ)短,有利于提高植物萜類物質(zhì)提取和分析的效果。23材料分析2.1質(zhì)譜條件的選擇植物萜類化合物的分離常使用GC技術(shù)。通過溶劑提取的樣品以分流或不分流的方式進(jìn)樣;通過吸附劑吸附的樣品則可直接在250～300℃下通過熱解析的方式釋放出來進(jìn)樣。進(jìn)樣后,樣品可借助不同的固定相在熔凝硅石毛細(xì)管色譜柱上分離。常用的固定相包括非極性的二甲基聚硅氧烷(DB-1,DB-5和CPSil5)以及極性的聚乙二醇(Carbowax20M,DB-Wax和HP-20M)。樣品在色譜柱上分離后,化合物可通過不同的檢測(cè)器進(jìn)行分析鑒定。定性分析時(shí),質(zhì)譜檢測(cè)器(Massspectrometer,MS)是最常用的檢測(cè)器。以標(biāo)準(zhǔn)的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Gaschromatograph-massspectrometer,GC-MS)為例,從GC色譜柱中出來的化合物在質(zhì)譜的高真空中受熱氣化后,受到50～100eV的電子轟擊產(chǎn)生各種陽離子,然后按質(zhì)量與電荷之比(簡(jiǎn)稱質(zhì)荷比,m/e)分別收集這些陽離子便得到質(zhì)譜。根據(jù)總離子色譜圖,便可獲得每個(gè)化合物的保留時(shí)間及特征離子質(zhì)譜。通常根據(jù)氣-質(zhì)聯(lián)用儀的分析結(jié)果,先比對(duì)質(zhì)譜庫(Wiley或NIST)中標(biāo)準(zhǔn)化合物的質(zhì)譜峰,對(duì)不同組分進(jìn)行初步的物質(zhì)鑒定。然后再購買標(biāo)準(zhǔn)品,稀釋成一定濃度后,按照與樣品相同的升溫程序和質(zhì)譜條件,在氣-質(zhì)聯(lián)用儀中進(jìn)樣,將標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、質(zhì)譜圖和結(jié)構(gòu)與樣品中相應(yīng)峰的保留時(shí)間、質(zhì)譜圖及結(jié)構(gòu)進(jìn)行比對(duì),從而確定其組分。定量分析時(shí),氫火焰離子化檢測(cè)器(Flameionizationdetector,FID)適用范圍廣,穩(wěn)定性好,敏感性高,應(yīng)用廣泛。但相比之下,光化電離檢測(cè)器(Photoionizationdetector,PID)更適于定量分析揮發(fā)性的萜類物質(zhì)。對(duì)樣品進(jìn)行定量分析時(shí),可選用歸一化法、內(nèi)標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法等方法。除了鑒定萜類物質(zhì)的基本結(jié)構(gòu),有時(shí)還需要確定某些成分的手性或異構(gòu)體。目前,一些毛細(xì)管柱具有不同的手性相,具備分析不同手性萜類物質(zhì)的能力。通常,具有酰化環(huán)式糊精衍生物的手性相適于分離極性物質(zhì),而具有烷化環(huán)式糊精衍生物的手性相適于分離非極性物質(zhì)。由于植物萜類化合物是由多種物質(zhì)或同分異構(gòu)體組成,一次GC-MS分析不足以鑒定所有物質(zhì)。串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(Tandemmassspectrometry,MS-MS)能夠準(zhǔn)確分析復(fù)雜的GC峰所對(duì)應(yīng)的多種物質(zhì)。此外,氣相色譜-傅里葉變換紅外光譜技術(shù)(CapillaryGC-Fouriertransforminfraredspectroscopy,GC-FT-IR)可用于區(qū)分具有相似電子質(zhì)譜圖的不同異構(gòu)體。GC-FT-IR能夠提供完整的分子結(jié)構(gòu)信息,并可獲得每個(gè)異構(gòu)體特有的紅外譜圖,但是其在定量方面的缺陷使得該技術(shù)的應(yīng)用受到了限制。為了提高分析的精確度和效率,GC技術(shù)有了新的發(fā)展。通常,一個(gè)毛細(xì)管色譜柱不可能分離所有的化合物,二維毛細(xì)管氣相色譜可以解決這一問題。這項(xiàng)技術(shù)使用了兩個(gè)不同極性的毛細(xì)管柱,可明顯提高萜類物質(zhì)定性定量分析的精確度,已在藥草植物揮發(fā)性萜類物質(zhì)分析中得到了很好的應(yīng)用。此外,快速GC技術(shù)可顯著提高分析效率,能夠?qū)祁愇镔|(zhì)進(jìn)行高通量分析。為了有效鑒定化合物,這兩項(xiàng)技術(shù)使用了飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)器(Time-of-flight-MS,TOF-MS)。與傳統(tǒng)的四極桿質(zhì)譜相比,飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)器可提高質(zhì)譜數(shù)據(jù)獲取的速度,并能鑒定重疊峰。盡管這些技術(shù)尚需進(jìn)一步完善和發(fā)展,新的氣相色譜技術(shù)無疑提高了物質(zhì)的分離效率,縮短了分析時(shí)間。2.2ptr-ms質(zhì)譜分析方法此外,一些不基于GC的技術(shù)也用于分析植物萜類物質(zhì)。例如高效液相色譜(Highperformanceliquidchromatography,HPLC)用于煙草雙萜類物質(zhì)的分析。液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS-MS)用于銳尖山香圓葉中的三萜類成分研究。新發(fā)展的質(zhì)子轉(zhuǎn)移反應(yīng)質(zhì)譜(Protontransferreaction-massspectrometry,PTR-MS)是一種化學(xué)電離源質(zhì)譜技術(shù),此技術(shù)利用H3O+作為化學(xué)電離源離子與作為質(zhì)子接受體的植物揮發(fā)物發(fā)生質(zhì)子轉(zhuǎn)移反應(yīng)。大氣中的O2、N2、CO2等主要成分由于其質(zhì)子親和勢(shì)低于H2O,而不與H3O+發(fā)生質(zhì)子轉(zhuǎn)移反應(yīng),因此可在大氣環(huán)境中檢測(cè)痕量植物揮發(fā)物的含量,而不受空氣組分的影響。與常規(guī)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)相比,PTR-MS具有測(cè)量速度快、靈敏度高、絕對(duì)量測(cè)量不需要定標(biāo)、無需復(fù)雜的樣品前處理等優(yōu)點(diǎn),近年來在萜類物質(zhì)實(shí)時(shí)分析領(lǐng)域應(yīng)用較多。傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜技術(shù)(Fouriertransformioncyclotronmassspectrometry,FT-ICR/MS)采用多種離子化方法,并使用回旋共振的方式同時(shí)記錄所有離子信號(hào),最大程度上削弱了由于離子分離不徹底帶來的相互干擾,具有極高的分辨率和精確度。與常規(guī)質(zhì)譜分析技術(shù)比,該法能夠更準(zhǔn)確地獲得分子量信息,并且不需要前期的色譜分離步驟,目前已開始用于馬樹脂等萜類物質(zhì)的分析。另外,對(duì)于未知化合物結(jié)構(gòu)的鑒定,可以通過核磁共振技術(shù)(Nuclearmagneticresonance,NMR)實(shí)現(xiàn),但是要求化合物預(yù)先經(jīng)過分離和純化。3植物類物質(zhì)代謝及生態(tài)功能許多研究需要連續(xù)監(jiān)測(cè)植物萜類物質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化,或者收集短時(shí)間內(nèi)植物釋放的萜類物質(zhì)。這對(duì)于揭示不同生理?xiàng)l件下植物萜類物質(zhì)的代謝及其生態(tài)功能具有重要意義。傳統(tǒng)的離線GC分析顯然無法滿足這種需求,在線與實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)技術(shù)得到了很大發(fā)展。3.1氣調(diào)與氣色譜分析動(dòng)態(tài)頂空收集結(jié)合在線熱解析技術(shù)(Dynamicheadspacesamplingwithon-linethermaldesorption)將自動(dòng)動(dòng)態(tài)頂空樣品采集系統(tǒng)與在線熱解析裝置偶聯(lián),可直接進(jìn)行氣相色譜分析。從而實(shí)現(xiàn)植物揮發(fā)性萜類物質(zhì)收集的自動(dòng)化,以及樣品收集與熱解析之間的自動(dòng)轉(zhuǎn)換。該技術(shù)成功地用于轉(zhuǎn)基因擬南芥揮發(fā)性萜類物質(zhì)的分析。3.2電子鼻的基本原理新發(fā)展的微型GC裝置——電子鼻(zNoseTM),使用了高度敏感的表面聲波檢測(cè)器(Surfaceacousticwave,SAW),將快速的萜類物質(zhì)收集與快速的在線GC分析結(jié)合起來。其主要工作原理是氣流攜帶的揮發(fā)性萜類物質(zhì)通過吸附柱,所吸附的物質(zhì)同時(shí)進(jìn)行熱解析,并完成進(jìn)樣,最后通過表面聲波檢測(cè)器進(jìn)行分析。電子鼻將采樣與樣品分析集于一身,極大地減化了操作流程,并提高了分析效率和靈敏度,可用于已知萜類物質(zhì)的快速定量分析和高通量檢測(cè)。由于電子鼻裝置便于攜帶并配有蓄電池,因此有望用于田間植物揮發(fā)性萜類物質(zhì)的監(jiān)測(cè)。其缺點(diǎn)是,毛細(xì)管柱短,不利于具有相似保留時(shí)間的萜類物質(zhì)的分離;由于不能像GC-MS那樣通過質(zhì)譜圖和保留時(shí)間的配合進(jìn)行定性分析,因此無法直接對(duì)未知樣品進(jìn)行定性分析。目前電子鼻已用于檢測(cè)茶樹葉受茶尺蠖及機(jī)械損傷后揮發(fā)物的規(guī)律,仙人掌(Rebutiafabrisii)開花時(shí)晝夜釋放的揮發(fā)物的變化、棉豆(Phaseoluslunatus)葉片受刺激劑處理后以及辣椒(Capsicumannuum)受到害蟲危害后釋放的揮發(fā)物的動(dòng)態(tài)變化。3.3光聲譜和質(zhì)譜條件可選用具有降低能量的方法前處理特點(diǎn),可連續(xù)使用,以提高自植物揮發(fā)性萜類物質(zhì)的實(shí)時(shí)檢測(cè)技術(shù)包括基于激光器的光聲光譜技術(shù)(Laser-basedinfraredphotoacousticspectroscopy)以及質(zhì)子轉(zhuǎn)移反應(yīng)質(zhì)譜技術(shù)。光聲光譜法使用一束特定波長(zhǎng)的調(diào)制光照射置于光聲池內(nèi)的氣體樣品,氣體分子吸收了特定波長(zhǎng)的光的能量,通過分子間碰撞以熱的形式釋放能量。因?yàn)檎{(diào)制光具有周期性,氣體的溫度隨之發(fā)生周期性變化,致使壓力也周期性變化,這樣就能產(chǎn)生疏密波(聲波),用靈敏的麥克風(fēng)探測(cè)到,其產(chǎn)