埃博拉出血熱病毒的樣本采集、運送和實驗室檢測

埃博拉出血熱病毒的樣本采集、運送和實驗室檢測浙江省CDC盧亦愚2014年8月主要內(nèi)容標本采集標本包裝與運送實驗室檢測（一）標本采集標本采集人員的防護按照2014年8月19日發(fā)布的《中國疾病預防控制中心關于埃博拉出血熱個人防護技術方案指南（第一版）（試行）》的要求，采樣人員應穿戴防護用品包括:一次性工作帽一次性防滲漏防護服防水靴（或者密閉式、防穿刺防水的鞋加穿一次性鞋套）防護眼罩或防護面屏醫(yī)用防護口罩（N95及以上）或全面型自吸過濾式呼吸器雙層一次性乳膠手套標本采集人員的防護穿戴順序：步驟1：手衛(wèi)生步驟2：一次性工作帽（如需要）步驟3：醫(yī)用防護口罩（N95及以上）或全面型自吸過濾式呼吸器步驟4：防護眼罩或防護面屏，如選擇全面型自吸過濾式呼吸器時無需佩戴步驟5：里層一次性乳膠手套步驟6：一次性防滲漏防護服（必要時，可加穿防水圍裙）步驟7：外層一次性乳膠手套步驟8：防水靴或防水靴套（或者密閉式、防穿刺防水的鞋加穿一次性鞋套）標本采集人員的防護脫摘順序：步驟1：外層一次性乳膠手套步驟2：防水靴或防水靴套（或者密閉式、防穿刺防水的鞋加穿一次性鞋套）步驟3：內(nèi)層手套消毒步驟4：一次性防滲漏防護服（需要時，先脫防水圍裙）步驟5：內(nèi)層手套消毒步驟6：防護眼罩或防護面屏步驟7：醫(yī)用防護口罩（N95及以上）或全面型自吸過濾式呼吸器步驟8：一次性工作帽（如需要）步驟9：里層一次性乳膠手套步驟10：手衛(wèi)生標本采集按照《埃博拉出血熱防控方案（第二版）》規(guī)定，定點醫(yī)院負責病例的標本采集工作根據(jù)流行病學史、癥狀等判別結(jié)果，采集留觀病例、疑似病例和確診病例的標本目前僅需采集血液標本，大小便、唾液和組織也可用于檢測標本采集用分離膠無菌真空促凝管采集靜脈血，每管3mL，標記后4℃保存，填寫標本采集登記表留觀病例、疑似病例采集4管，其中2管盡快送省疾控中心實驗室，2管保存于樣本采集單位，待排除埃博拉病毒感染后用于其它病原體的篩查（二）標本包裝與運送標本包裝、運送按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》要求運輸至具有從事埃博拉病毒相關實驗活動資質(zhì)的實驗室標本應當置于符合國際民航組織規(guī)定的A類包裝運輸材料之中低溫冷藏運輸，避免反復凍融標本包裝、運送A類包裝，符合UN2814要求，按照三重包裝系統(tǒng)包裝：第一層包裝（可密封樣本袋、50mL離心管等）；第二層安全殼容器（防水、防漏）；外層運輸包裝組成樣本袋放入防水防漏的第二層安全殼容器中，為降低破碎或泄漏的風險，用吸水紙等填充物固定標本袋。安全殼容器和外包裝之間放冰袋不要打開采集管或分裝樣本不要離心分離血清標本包裝、運送（三）實驗室檢測實驗室檢測的生物安全要求實驗室病原學和血清學檢測相關活動嚴格按照《人間傳染的病原微生物名錄》的要求，在相應的生物安全級別實驗室開展。病毒培養(yǎng)在BSL-4實驗室動物感染實驗在ABSL-4實驗室未經(jīng)培養(yǎng)的感染材料的操作在BSL-3實驗室滅活材料的操作在BSL-2實驗室無感染性材料的操作在BSL-1實驗室中進行實驗人員個人防護口罩、帽子、防滲漏防護服、乳膠手套、高筒鞋套、防護面罩（正壓頭盔）等；注：手套、防護服大小要合適，檢查有無破漏；手套的量要充足，滿足隨時更換。所有涉及感染性材料的操作均應在BSL-3實驗室二級生物安全柜內(nèi)進行；方便取用的消毒劑（0.5%次氯酸鈉溶液、75%酒精等），空間噴霧消毒設備（使用過氧乙酸，過氧化氫等）。埃博拉出血熱病毒實驗室檢測實驗室檢測（1）病毒抗原陽性（2）血清特異性IgM抗體陽性（3）恢復期血清特異性IgG抗體滴度比急性期有4倍以上升高（4）從患者標本中檢出埃博拉病毒RNA（5）從患者標本中分離到埃博拉病毒診斷

疑似病例基礎上具備診斷依據(jù)中實驗室檢查任一項檢測陽性者檢測內(nèi)容目前省疾控中心實驗室報送審批的檢測項目包括：埃博拉病毒核酸檢測抗埃博拉病毒IgM、IgG抗體檢測標本處理與保存省疾控中心在BSL-3實驗室盡快分離血清，離心時使用有密封蓋的離心桶或轉(zhuǎn)頭進行標本離心，應在生物安全柜內(nèi)打開離心轉(zhuǎn)頭放入或取出裝有標本的離心管分離的血清標本長期保存應置于-70℃以下，保存不超過1周可置-20℃實驗操作的生物安全要求核酸提取時，加入核酸提取裂解液后，可在BS