AKTA蛋白純化系統(tǒng)操作

AKTA蛋白純化系統(tǒng)操作AKTA蛋白純化系統(tǒng)是現(xiàn)在蛋白純化工作經(jīng)慣用到的一組設(shè)備，自動化程度很高。AKTA系統(tǒng)根據(jù)不同的配備，能夠分為AKTAEXPLORER、 AKTAPILOT、AKTAPURIFIER等多個型號的設(shè)備。下列以AKTAEXPLORER為例簡樸介紹 AKTA蛋白純化系統(tǒng)的普通操作。1、認識AKTA。AKTAexplorer是為辦法開拓及研究應用而設(shè)計的全自動液相色譜系統(tǒng)。該色譜系統(tǒng)的分離裝置有三個重要組件，在底部平臺的左側(cè)整潔堆起（Fig1）。它們是：FIG1、AKTAEXPLORER主機?Pump-900為雙通道高效梯度泵系列。在AKTAexplorer100，流速范疇ml/min，壓力高達10Mpa（泵名為P-901）。在AKTAexplore10，流速范疇ml/min，壓力高達25Mpa（泵名為P-903）。?MonitorUV-900，同時監(jiān)控190－700nm范疇內(nèi)高達3個波長的多波長紫外-可見（UV-Vis）監(jiān)測器。（針對部分AKTAPURIFIER機型，尚有UPC-900監(jiān)測器可供選擇，光源為汞燈光源，一次能夠監(jiān)控一種波長，安裝濾光片后，能夠在選擇的波長范疇內(nèi)進行切換。）?MonitorpH/C-900，在線電導和pH監(jiān)測的組合監(jiān)測器。Fig2、AKTAEXPLORER硬件模式圖！AKTAEXPLORER系統(tǒng)的重要構(gòu)成部件能夠用模式圖表達（Fig2）。構(gòu)成部件，如混合器、柱及不同的閥安裝在右邊部分。打開裝閥的門可全部看到。柱被掛在裝閥的門的外側(cè)。分離裝置由UNICORN軟件控制。軟件安裝于一獨立的電腦主機之中，在電腦與色譜系統(tǒng)之間的通信由數(shù)據(jù)采集裝置CU950進行控制。2、普通操作開機按位于底部平臺前左側(cè)的ON/OFF按鈕，打開色譜系統(tǒng)，然后打開電腦電源。待儀器自檢完畢（CU950上面的3個批示燈完全點亮并不閃爍）。雙擊桌面上UNICORN圖標，進入操作界面。UNICORN的操作界面分為四個窗口（Fig3）Fig3、Unicorn的操作界面準備工作溶液和樣品全部的工作溶液和樣品必須通過μm的濾膜過濾，樣品也可高速離心后取上清備用。當緩沖液中含有有機溶劑（如乙腈、甲醇），需在使用前用低頻超聲脫氣10min?！逑醇肮艿罍蕚涫紫葘泵的進液管道（A1）放入緩沖液或平衡液中，將B泵的進液管道(B1)放入高鹽溶液中，在systemcontrol窗口點擊工具欄內(nèi)的manual，選擇pump→pumpwashexplorer，選中A1,B1管道為ON，execute。泵清洗將自動結(jié)束。(Fig4)Fig4、AKTAExplorer的泵清洗操作安裝層析柱在manual里選擇pump→flowrate，輸入一定的低流速（Fig5），insert；選擇Alarm&mon→alarmpressure，設(shè)立highalarm（輸入填料或?qū)游鲋哪褪軌毫?，以較低者為設(shè)立值，具體可在填料闡明書或?qū)游鲋U明書中查到），insert，execute（Fig6）。待InjectionValve的1號位管道流出水后接入柱子的柱頭，稍微擰緊后將柱下端的堵頭卸掉接入管道連上紫外流動池。Fig5、AKTAExplorer的流速設(shè)定操作Fig6、AKTAExplorer的限壓設(shè)定操作~開始純化：1）在柱子平衡好之后（電導，pH的數(shù)值和變化趨勢穩(wěn)定）即開始上樣了。此時應將紫外調(diào)零（Fig7），選擇Alarm&mon→autozero，exectue。Fig7、AKTAExplorer的紫外調(diào)零操作2）具體上樣方式：AKTA系統(tǒng)的上樣方式比較靈活，能夠根據(jù)具體樣品的條件進行上樣，涉及用樣品環(huán)上樣、用系統(tǒng)泵上樣、用樣品泵上樣等，這里以用系統(tǒng)泵上樣為例簡樸介紹上樣過程。點擊pause，將A1放入樣品中，點擊countine，待樣品上完后，再將A1放入到平衡液中繼續(xù)清洗柱子。3）洗脫：上樣后用緩沖液盡量將穿透峰洗回基線。在manual里選擇pump→gradient，按照自己的工藝選擇targetB（100％）和length（10CV）（Fig8）。Fig8、AKTAExplorer的洗脫條件設(shè)定操作4）設(shè)定收集：選擇Frac→fractionation_900,輸入每管收集體積，exectue（Fig9）。結(jié)束固定體積收集選擇Frac→fractionation_stop_900，exectue（Fig10）。Fig9、AKTAExplorer的組分收集設(shè)定操作？Fig10、AKTAExplorer的組分收集停止設(shè)定操作5）清洗泵及卸下層析柱：將A1和B1入口放入純水中，啟動pumpwashpurifier功效沖洗A泵和B泵及整個管路。然后再將A1和B1入口放入20％乙醇中，同樣操作將乙醇沖滿整個管路保存。再給柱子一種慢流速，設(shè)立系統(tǒng)保護壓力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的時候?qū)⒍骂^擰上，再拆柱子的上端，最后擰上上端的堵頭。整個過程中應避免氣泡進入。6）關(guān)閉電源：從軟件控制系統(tǒng)的第一種窗口unicornmanager點擊退出，其它窗口不能單獨關(guān)閉。然后關(guān)閉AKTA主機電源，關(guān)閉電腦電源。3、程序設(shè)定操作在methodeditor窗口點擊工具欄內(nèi)的methodwizard，彈出窗口界面如Fig11所示，能夠分別在mainselection、column以及columnposition三個下拉菜單中選擇所要用到的層析辦法、所用到的層析柱的參數(shù)以及所安裝的層析柱在柱位選擇閥的位置，選好之后，點擊next按鈕進入下一步波長和溶液進口的設(shè)定（Fig12），在此能夠設(shè)定檢測的波長，針對AKTAEXPLORER能夠一次選擇三個波長共同進行監(jiān)控，并在此設(shè)定A泵和B泵的溶液進口，設(shè)定好之后，點擊next，出現(xiàn)如Fig13所示窗口，能夠在此設(shè)定對層析柱進行平衡的條件。Fig11Fig12'Fig13Fig14完畢之后，點擊next出現(xiàn)Fig14的窗口，在此能夠設(shè)定上樣的條件，可選擇的條件涉及上樣的方式，如上樣環(huán)上樣以及樣品泵上樣，對上樣的體積也要進行設(shè)定。如果運用系統(tǒng)泵上樣，在此無法進行設(shè)立，但是能夠運用A泵和B泵的兩個進口在背面的環(huán)節(jié)中進行設(shè)立。在上步設(shè)立完畢之后，點擊NEXT出現(xiàn)如Fig15所示窗口，這里是針對流穿組分收集所進行某些設(shè)立，針對安裝的不同的收集器，具體內(nèi)容可能有些差別，這里顯示的界面是在安裝了Frac-950收集器之后所出現(xiàn)的界面，設(shè)立完畢點擊NEXT出現(xiàn)如Fig16所示的窗口，設(shè)立目的組分收集的某些參數(shù)，點擊NEXT，出現(xiàn)如Fig17所示的窗口，針對具體的洗脫條件能夠進行設(shè)立。當全部設(shè)立完畢之后，點擊finish，彈出Fig18所示的窗口，能夠再一次對所進行的設(shè)立進行進一步的修改，完畢之后點擊按鈕，完畢程序存盤操作。至此完畢洗脫程序的設(shè)定工作，在應用自動洗脫程序時，可在SYSTEMCONTROL窗口點擊文獻菜單欄中的FILE→Run，在彈出的對話框中選擇目的洗脫程序所在的位置并執(zhí)行，之后會依次彈出某些對話框，重要是再次確認程序的設(shè)立條件，并選擇洗脫成果文獻的保存位置，全部設(shè)立完之后，洗脫將自動進行，成果將自動的保存在設(shè)定的文獻夾中。Fig15Fig16Fig17Fig184、成果的瀏覽與簡樸解決`在純化完畢后，Unicorn軟件會自動的按照預先的設(shè)立保存成果文獻，如果沒有指定，那么成果文獻會保存于一種文獻名以manualN開頭的文獻中，N為系統(tǒng)依次生成的一種1-10之間的數(shù)字。對于成果的瀏覽應在evaluation窗口（Fig19）中進行，打開文獻及對文獻進行普通編輯的菜單如Fig20所示。Fig19Evaluation窗口Fig20純化成果普通編輯菜單這里已經(jīng)選擇了一種純化文獻，打開后，在成果瀏覽窗口點擊鼠標右鍵，選擇properties，能夠彈出如Fig21所示的操作菜單，能夠分別對成果進行編輯，如變化曲線的顏色，設(shè)定橫軸或縱軸的顯示區(qū)間，進行文本文獻的編輯等等。Fig214、AKTA蛋白純化系統(tǒng)的日常維護每天，當實驗完畢系統(tǒng)使用結(jié)束后，應盡量避免保存于緩沖液中過夜，尤以高鹽濃度洗脫緩沖液為甚！如果，不能避免，則切記次日盡早用SystemWashMethod完畢以蒸餾水將系統(tǒng)徹底清洗，再予以保存或再更新使用其它緩沖液，再次投入使用進行實驗操作。用蒸餾水將余下的緩沖液徹底沖洗出系統(tǒng)，這環(huán)節(jié)至關(guān)重要。此舉不僅能夠避免緩沖液對系統(tǒng)造成腐蝕機會，甚或因使用高鹽濃度緩沖液保存過久造成鹽結(jié)晶等的堵塞，對系統(tǒng)構(gòu)