還原糖測定方法的研究

還原糖測定方法的研究

低聚糖和葡萄糖可以通過轉(zhuǎn)化為具有恢復(fù)性的單糖來測定。測定還原糖的3,5-二硝基水楊酸（DNS）光度法測定具有簡便、快速等特點(diǎn)，但不同資料介紹的條件有一定差異，從而影響了測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。筆者對(duì)還原糖的DNS光度法測定條件進(jìn)行了探討，指出了影響分析測定的關(guān)鍵因素，力求操作簡便、快速、準(zhǔn)確、可靠，使測定結(jié)果更具準(zhǔn)確性和可比性。1材料和方法1.1材料表面1.1.1亞硝酸鹽緩沖溶液ds甲液：溶解6.9g結(jié)晶酚于15ml濃度為10%的氫氧化鈉水溶液中，稀釋至70ml，加入6.9g亞硫酸氫鈉。乙液：稱取255g酒石酸鉀鈉，加到300ml濃度為10%氫氧化鈉溶液中，加入880ml濃度為1%的DNS溶液。將甲液與乙液混合即得黃色DNS試劑，貯于棕色瓶中，室溫下放置1周后使用。1.1.2250mg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱取0.1250g分析純葡萄糖（105℃干燥至恒重），用蒸餾水溶解并定容至500ml。1.1.3這些機(jī)器1.2方法1.2.1文化景觀測定吸取含糖待測液3ml于25ml比色管中，加入2.0mlDNS試劑，沸水浴顯色5min，取出冷卻，用水定容至刻度，同時(shí)做空白對(duì)照，用1cm比色皿測定520nm處吸光度。1.2.2ds顯色測定分別吸取250mg/kg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml于7支25ml比色管中，各加入2.0mlDNS試劑（各管均補(bǔ)水至5ml），按“1.2.1”的方法顯色測定。1.2.3吸收光譜和波長的選擇將葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液按“1.2.1”的方法顯色（同時(shí)做試劑空白），在不同波長時(shí)以蒸餾水為對(duì)照測定有色溶液及試劑空白的吸光度，得到吸收光譜。1.2.4ds試劑用量的確定于10支25ml比色管中各加入2ml250mg/kg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，再分別加入0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75、2.00、2.25、2.50、2.75mlDNS試劑，各管均補(bǔ)水至5ml以保證顯色時(shí)溶液體積一致，同時(shí)做試劑空白，以蒸餾水為對(duì)照測定520nm處吸收值。1.2.5ds-ls-ms/ms法取10支25ml比色管，各加入2ml250mg/kg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液及2mlDNS試劑，并補(bǔ)水至5ml，沸水浴中分別顯色0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0min，以蒸餾水為對(duì)照測定其吸光度。1.2.6標(biāo)準(zhǔn)溶液和ds試劑均補(bǔ)水取7支25ml比色管，各加入2ml250mg/kg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和2mlDNS試劑，分別補(bǔ)水0、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、21.0ml，按“1.2.1”的方法顯色，以水為對(duì)照。2結(jié)果與分析2.1有色溶液的吸收光譜試驗(yàn)Y=41.9446X+4.0078，式中Y為溶液中還原糖濃度（mg/kg）,X為溶液的吸光度。2.2有色溶液的吸收光譜試驗(yàn)結(jié)果（圖1）從圖1可以看出：當(dāng)波長大于535nm時(shí)，A0很小，A1-A0幾乎等于A1；波長小于535nm時(shí)，隨著波長的減小，A0增加，A1-A0也逐漸增加，但并無峰值出現(xiàn)。因此，從試劑空白不宜太大及有色溶液的吸收值適宜讀數(shù)考慮，吸收波長選用520nm。2.3ds試劑用量從圖2可知,在DNS試劑用量較低(1.5ml以下)時(shí),A0、A1及A1-A0的變化趨勢基本一致,幾乎是直線上升;增加DNS試劑用量,其吸收值增加緩慢,且無最大值。因此,確定DNS試劑的適宜用量為2.0ml。2.4色溫時(shí)間對(duì)吸收的影響圖3從圖3可知,顯色時(shí)間小于2min時(shí),反應(yīng)不完全,超過2min,其吸收值基本無差異。故顯色時(shí)間最低不能低于2min。2.5顯色液體積的影響從表1可以看出,顯色時(shí)溶液體積不同,其吸收值有很大差異,顯色時(shí)溶液體積越大,顯色后有色溶液的吸收值越小,且差異相當(dāng)大。顯色溶液體積以5ml為宜。2.6顏色溶液的穩(wěn)定性表23lds試劑分光光度計(jì)和測色系統(tǒng)DNS光度法測定還原糖具有快速、簡便的特點(diǎn)，該試驗(yàn)結(jié)果表明，準(zhǔn)確定量加入2.0mlDNS試劑，保持顯色時(shí)顯色液體積一致，沸水浴顯色時(shí)間不低于2