淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合hcg黃體酮治療不明免疫性流產(chǎn)50例

淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合hcg黃體酮治療不明免疫性流產(chǎn)50例

不確定的正常生殖器官解剖異常、生殖器官解剖異常、生殖系統(tǒng)感染和自身免疫性疾病是指排除遺傳、內(nèi)涵、生殖器官解剖異常、生殖器官僚主義感染和自身免疫性疾病的連續(xù)三次自然流產(chǎn)。淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫療法治療UHA已取得較好的療效,引起了人們極大的關(guān)注。2003年7月至2005年7月,我中心收治UHA患者50例,經(jīng)淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合人絨毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin,hCG)/黃體酮(progesterone)治療后取得良好的效果。數(shù)據(jù)和方法一、免疫抗體系統(tǒng)2003年7月至2005年7月在本生殖醫(yī)學(xué)中心門診確診的UHA患者50例,年齡23～36歲、平均(30.1±2.96)歲,自然流產(chǎn)3～7次、平均(3.76±1.10)次。均具備以下條件:(1)連續(xù)≥3次早期自然流產(chǎn),既往無活產(chǎn)、死產(chǎn)、死胎史,最近1次流產(chǎn)發(fā)生在半年以內(nèi);(2)無生殖系統(tǒng)畸形;(3)無生殖系統(tǒng)感染;(4)無黃體功能不足等內(nèi)分泌異常;(5)抗心磷脂抗體、抗核抗體、抗可抽提核抗原抗體(ENA)、狼瘡抗凝物篩查等自身免疫抗體均陰性;(7)男方精液常規(guī)正常,肝炎標(biāo)志物(乙、丙、戊型)、梅毒、艾滋病檢查均無異常;(8)夫妻雙方染色體核型分析正常;(9)微量淋巴細(xì)胞毒檢測封閉抗體陰性;(10)夫妻雙方對淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫療法有充分的了解,并簽署知情同意書。二、陽性對照淋巴細(xì)胞分離液(上海試劑二廠),環(huán)胞素(1∶8)或正常男性AB型血清作為陽性對照,兔補(bǔ)體,Terasaka微量板(OneLambda,美國)。三、方法1.外周血活檢的稀釋抽取丈夫肝素鈉抗凝靜脈血25ml,生理鹽水等量稀釋。15ml離心管中加入淋巴細(xì)胞分離液約6ml,將稀釋的外周血小心加在淋巴細(xì)胞分離液面上,2,500r/min離心20min,吸取淋巴細(xì)胞分離液與稀釋血漿界面之間的白膜層,生理鹽水洗滌2或3次,1,000～1,500r/min,每次離心10min。最后將細(xì)胞溶于生理鹽水,細(xì)胞濃度調(diào)至1.7～2.5×107/ml,總體積1ml。2.注射方法參照文獻(xiàn),將上述制成的淋巴細(xì)胞懸液1ml于患者上臂三角肌處作皮內(nèi)放射狀3～5點(diǎn)注射。3.妊娠合并妊娠后注射妊娠主動(dòng)免疫治療程序采用文獻(xiàn)的兩次療法,即患者于孕前注射2次,每次間隔3周,兩次注射后鼓勵(lì)懷孕,早孕后再注射2次,同時(shí)加用hCG或黃體酮保胎治療。注射后3個(gè)月內(nèi)仍未孕,則每3個(gè)月加強(qiáng)一次,直至妊娠。成功受孕后有先兆流產(chǎn)癥狀者,增強(qiáng)治療1～2次。4.hcg2,0u/3d不同時(shí)停藥的患者(1)主動(dòng)免疫聯(lián)合hCG療法:在免疫治療的基礎(chǔ)上,妊娠后(停經(jīng)35～40d,妊娠試驗(yàn)陽性者)肌注hCG2,000U/3d,60d后減為每周1次,孕10～12周停藥。接受該療法的患者共16例。(2)主動(dòng)免疫聯(lián)合黃體酮療法:在免疫治療的基礎(chǔ)上,妊娠后肌注黃體酮40mg/d,孕10～12周停藥。接受該療法的患者共13例。5.病例對照和待測標(biāo)本收集女方靜脈血3ml,分離血清;男方枸櫞酸鈉抗凝靜脈血3ml,分離淋巴細(xì)胞,于Terasaka微量板中依次加入陰性對照(丈夫淋巴細(xì)胞、0.9%生理鹽水、補(bǔ)體各1μl)、陽性對照(丈夫淋巴細(xì)胞、環(huán)胞素、補(bǔ)體各1μl)和待測標(biāo)本(丈夫淋巴細(xì)胞、女方血清、補(bǔ)體各1μl),室溫孵育1h。每孔加5μl染料,于倒置熒光顯微鏡下觀察,紅染細(xì)胞≥60%～80%為陽性,綠染細(xì)胞≥60%～80%為陰性。6.凝靜脈血和女非抗凝靜脈血聯(lián)合免疫組化檢測淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療后,于孕前分別采集男方抗凝靜脈血和女方非抗凝靜脈血各3ml,采用微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)檢測女方血清中封閉抗體(blockingantibody)的產(chǎn)生情況。7.治療效果標(biāo)準(zhǔn)以妊娠超過12周為治療后妊娠成功標(biāo)準(zhǔn)。四、統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn),P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果一、主動(dòng)免疫后患者的臨床表現(xiàn)患者在注射淋巴細(xì)胞后,局部皮膚均出現(xiàn)紅、癢等癥狀,多數(shù)于3～5d好轉(zhuǎn),隨著治療次數(shù)的增加,癥狀逐漸減輕。二、妊娠成功率50例患者經(jīng)治療后,目前有29例妊娠,其中21例已分娩,2例處于孕晚期,2例處于孕中期,4例再次流產(chǎn),妊娠成功率86%(25/29)。主動(dòng)免疫聯(lián)合hCG療法妊娠成功率88%(14/16),主動(dòng)免疫聯(lián)合黃體酮療法妊娠成功率85%(11/13),兩者比較療效無顯著差異(P>0.05)。三、妊娠和妊娠成功率29例妊娠患者中,微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)檢測封閉抗體陽性3例,其中2例正常分娩,1例再次流產(chǎn);陰性26例中23例妊娠成功、3例流產(chǎn),妊娠成功率89%(23/26)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,封閉抗體陽性與陰性兩者的妊娠成功率無顯著差異。封閉抗體th3淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療自上世紀(jì)80年代中期開展以來,對UHA的療效已得到多數(shù)臨床工作者的認(rèn)可,本中心采用淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合hCG/黃體酮的方法,使患者的妊娠成功率達(dá)86%,與文獻(xiàn)報(bào)道相符(84%～94%)。認(rèn)為淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合hCG/黃體酮治療UHA,簡單方便、經(jīng)濟(jì)實(shí)用、免疫反應(yīng)強(qiáng),易被患者接受,具有較可靠的臨床效果及應(yīng)用價(jià)值。妊娠是一種成功的半同種移植過程,在母體免疫功能正常時(shí),既保護(hù)母體不受外來微生物的侵犯,又對宮內(nèi)胚胎移植物不發(fā)生免疫排斥反應(yīng),并維持妊娠的繼續(xù)。胚胎只有被母體的免疫機(jī)制識別,才會被接納,妊娠才得以維持。UHA被認(rèn)為與孕期母體對胎兒父系抗原呈低識別和(或)低反應(yīng)有關(guān),由于患者對胚胎同種異體抗原無法產(chǎn)生足夠的保護(hù)性抗體,缺乏抗體的調(diào)節(jié)作用,使母體免疫系統(tǒng)對胎兒發(fā)生免疫攻擊,導(dǎo)致流產(chǎn)發(fā)生。封閉抗體即屬于此種保護(hù)性抗體,此抗體缺乏與UHA的發(fā)病有關(guān),但經(jīng)免疫治療后封閉抗體產(chǎn)生與否、與妊娠結(jié)局之間有無相關(guān)性,不同中心、不同學(xué)者觀點(diǎn)各異。Jablonowska等采用靜脈輸注免疫球蛋白(被動(dòng)免疫治療)的方法,對41例UHA患者進(jìn)行治療,分別于孕前和孕后檢測封閉抗體,結(jié)果顯示,治療后封閉抗體的產(chǎn)生與妊娠結(jié)局無相關(guān)性,認(rèn)為免疫治療后封閉抗體產(chǎn)生對UHA患者的妊娠結(jié)局無預(yù)測價(jià)值。而Pandey等認(rèn)為封閉抗體產(chǎn)生與否可作為判斷妊娠結(jié)局的重要因素。本中心于治療后檢測患者的封閉抗體,25例妊娠成功的患者中,僅2例抗體轉(zhuǎn)為陽性,其余均為陰性。因此認(rèn)為,封閉抗體產(chǎn)生與否對妊娠結(jié)局無預(yù)測價(jià)值,治療后并非所有患者的封閉抗體都轉(zhuǎn)為陽性,而封閉抗體陰性的患者也并不意味著治療的失敗,這也許與缺乏靈敏的檢測手段有關(guān),可能免疫治療還涉及其他方面的免疫機(jī)制。另外,免疫治療后封閉抗體仍多為陰性,可能與治療所用的淋巴細(xì)胞劑量較小有關(guān)(1.7～2.5×107/ml,文獻(xiàn)為2.0～3.0×107/ml)。封閉抗體未轉(zhuǎn)為陽性的患者仍能妊娠成功,可能與淋巴細(xì)胞免疫治療提高2型T輔助細(xì)胞(Th2)細(xì)胞因子及下調(diào)1型T輔助細(xì)胞(Th1)細(xì)胞因子,促使Th1/Th2的平衡而進(jìn)一步誘導(dǎo)免疫耐受有關(guān)。由于治療可能造成母體自身免疫紊亂和胎兒宮內(nèi)生長遲緩等有爭議的不良反應(yīng),因此,采用較小劑量淋巴細(xì)胞進(jìn)行免疫治療,是一種相對安全、優(yōu)越的方法。目前對UHA患者妊娠后除行淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療外,多使用hCG/黃體酮保胎治療,聯(lián)合療