解酒護肝片對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用

解酒護肝片對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用

肝臟是人體的五臟之一。它是動物身體中以代謝功能為主的器官，它在身體中扮演著去除氧化、儲存肝臟糖和合成蛋白質(zhì)的角色。但是,近年來我國酒精性肝病亦有上升趨勢。酒精性肝病是由長期大量飲酒導致的肝臟疾病,初期通常表現(xiàn)為脂肪肝,進而可發(fā)展成酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化;嚴重酗酒時可以誘發(fā)廣泛的肝細胞壞死或急性肝功能衰減。因此,酒精性肝病的防治迫在眉睫。當前市場上解酒護肝的產(chǎn)品大都是以分解酒精濃度為主,而且部分產(chǎn)品中添加了利尿劑、興奮劑、激素等,這些物質(zhì)服用后,短時間內(nèi)會感到清醒、亢奮、食欲大開,但其副作用較大,長期服用將傷及身體;同時,其功效有限,僅能緩解酒精濃度夠高造成的頭暈、嘔吐等癥狀,對肝的保護作用不大。本研究采用中醫(yī)藥理論為基礎(chǔ),充分利用藥食兩用中藥材中的靈芝、葛根、枳椇子、枸杞子為主要原料,在量的調(diào)配上令各味中藥之間的藥效相輔相成,相得益彰。因此,本研究旨在通過動物實驗,觀察預防性給予解酒護肝片對實驗性酒精性肝病的保護作用。1.材料和方法1.1實驗動物動物昆明種小鼠,雄性,體重20～24g,安徽醫(yī)科大學實驗動物中心提供,準字號:皖實動第03號。1.2釀酒集團有限公司本實驗所用中藥材購于東莞市國藥藥業(yè)連鎖有限公司;衡水老白干酒(河北衡水老白干釀酒(集團)有限公司);丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒、還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒均購自南京建成生物制劑公司。1.3u3000儀器UV-265紫外分光光度計(日本島津);電熱恒溫干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司)202-3AB型;電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)DK-98-1A;真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)RE52-99;抽濾機(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)SHB-B95型;離心沉淀機(上海醫(yī)用分析儀器廠)LXT-II;分析天平(德國賽多利斯)。1.4酒護肝片的制備1.4.1肝臟保護片的制備工藝圖1.4.2制備浸膏的方法A.提取:將靈芝、葛根、枳椇子、枸杞子,分別稱取相應的量后一起放入紗布袋中;再將裝有藥材的紗布袋置于提取罐中,加9～12倍藥材量的水在85℃提取2.5h,過濾,得提取液。重復一次,合并,得到提取液;B.提取、濃縮:濃縮、過濾:將上述提取液在真空條件下進行濃縮,當濃縮液密度在1.05～1.16時,過濾,得到濃縮浸膏;C.噴霧干燥:將步驟B中濃縮得到的浸膏進行噴霧干燥,制得成浸膏干粉;D.混合、過篩:將步驟C中所制得的浸膏干粉先過40～70目篩,然后加入磷酸氫鈣、淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉,經(jīng)混合機混合均勻,制得原料輔料混合物;E.制粒、干燥:取步驟D制得的原料輔料混合物投入到高速混合制粒機中,先干混120～360秒,然后加10%淀粉漿,攪拌制粒50～150s,出粒,制得濕顆粒;將濕顆粒投入到高效沸騰干燥機中進行干燥,干燥溫度為35℃～65℃,干燥時間為1～3小時,取出干顆粒,冷卻至常溫;F.壓片:將步驟E中的顆粒與硬脂酸鎂于混合機中混合5～30分鐘,壓片,制得成品。1.5高、中、低劑量回血藥濃度設(shè)計參照李東良和何福金等造模方法并加以改進。小鼠50只,隨機分為5組,正常對照組、造模組、高、中、低劑量3個劑量組。實驗室適應性飼養(yǎng)7天后,衡水老白干酒灌胃0.5ml/只。高、中、低劑量給藥組分別給藥折合成生藥2.50、1.25和0.25g/(kg·d),灌胃;正常對照組和模型對照組等體積生理鹽水灌胃,1次/d,2.0ml/只,連續(xù)30d。1.6觀察指標1.6.1一般情況下觀察實驗過程中各組動物的一般情況,包括精神、活動、飲食、排便、皮毛、體重。1.6.2血清分離血動物禁食12h后,稱重,以7.0%水合氯醛5.0ml/kg腹腔注射麻醉小鼠,斷頭取血,靜止2h后,以3500r/min離心5min,分離血清,儲存?zhèn)溆?。血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)、還原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)檢測按試劑盒的說明書操作進行。1.7數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析統(tǒng)計學處理應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析,實驗數(shù)據(jù)用xˉ±sxˉ±s表示,多組間比較采用方差分析,各組間兩兩比較采用q檢驗。P<0.01為有顯著性差異,P<0.05為有差異。2.結(jié)果2.1實驗大鼠實驗實驗過程中正常對照組大鼠精神狀態(tài)較好,體質(zhì)量持續(xù)增加,無異常狀況。造模組大鼠實驗初期,均出現(xiàn)精神萎靡、食欲減退、嗜睡、小便黃、大便干等現(xiàn)象。而給予高劑量解酒護肝片后,該組的精神狀態(tài)和飲食、大便情況均較模型組好轉(zhuǎn)。2.2對血清ast、alt水平的影響模型組血清AST、ALT水平明顯高于正常組;而解酒護肝片干預處理后各組血清的AST、ALT水平較模型組均明顯降低(P<0.05),其中高劑量組的血清AST、ALT水平較低、中劑量組低(P<0.05),并且低于陽性對照組(P<0.05)。見表1。2.3對血清tg、mda水平的影響由表2可見,模型組的MDA、TG含量顯著高于空白對照組(p<0.01),說明乙醇對肝臟造成損傷。而解酒護肝片干預處理后各組血清的TG、MDA水平較模型組均明顯降低(P<0.05),其中高劑量組的血清TG、MDA水平較低、中劑量組低(P<0.05),并且低于陽性對照組(P<0.05),說明解酒護肝片的護肝效果比解毒降脂片的效果好。該結(jié)果表明灌胃本解酒護肝片對于小鼠的肝臟抵抗乙醇的脂質(zhì)過氧化損傷有很好的輔助作用。2.4肝臟保護作用由表3可見,模型對照組的SOD、GSH含量顯著高于空白對照組(p<0.01),說明解酒護肝片對肝臟起到保護作用。并且解酒護肝片干預處理后各組血清的SOD、GSH水平較模型組均明顯升高(P<0.05),其中高劑量組的血清SOD、GSH水平最高、中劑量組較高(P<0.05),但都高于陽性對照組(P<0.05),說明灌胃本解酒護肝片對于小鼠的肝臟抵抗乙醇的脂質(zhì)過氧化損傷有很好的輔助作用。3.解酒護肝片對肝損傷小鼠肝功能指標的影響中醫(yī)學認為酒性溫味辛,過量飲用傷及脾胃,臨床上患者主要表現(xiàn)為眩暈、脘腹脹滿、納呆、脅痛等癥。酒精進入機體后,約90%在肝臟內(nèi)氧化,體內(nèi)少量乙醇可在ADH和ALDH作用下代謝生成CO2和H2O排出體外。一次性大量或長期慢性攝入酒精,血中乙醇濃度過高,超過肝臟正常生理代謝的解毒能力,產(chǎn)生大量自由基。過量的自由基可引起肝細胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應,使細胞膜和細胞器結(jié)構(gòu)破壞,膜流動性失常,大量肝內(nèi)酶(AST、ALT)釋放入血,并可使清除自由基酶(如SOD)耗竭,肝細胞損傷進一步加重,肝功能異常,脂肪代謝紊亂,肝組織細胞脂肪樣和空泡樣變性,最終導致肝細胞廣泛壞死,細胞腫脹死亡,從而引起酒精性肝病。本實驗中,小鼠經(jīng)酒精損傷后肝功能指標(ALT、AST)明顯升高,同時出現(xiàn)不同程度的病理改變,而本解酒護肝片可以降低肝損傷小鼠血清中AST、ALT,增強肝臟中SOD和GSP活性,降低MDA、TG含量。說明本研究中所復制的模型是成功的。解酒護肝片是由靈芝、葛根、枳椇子、枸杞子組成。靈芝在中國藥典和醫(yī)學名著中,被稱之為:不老草、還魂草。因為靈芝有其獨特的解毒功效此外,靈芝又被稱之為解酒草(醒酒草),具有解