醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告

醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解細(xì)菌生長的基本營養(yǎng)條件，熟悉培養(yǎng)基的種類，掌握培養(yǎng)基制備的原則和一般方法；2.掌握無菌操作技術(shù)，掌握病原菌的分離與培養(yǎng)方法；3.了解實(shí)驗(yàn)室和醫(yī)院空氣的有菌環(huán)境，加強(qiáng)消毒滅菌的觀念；掌握醫(yī)院病房空氣的細(xì)菌檢測方法；掌握空氣的衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)監(jiān)測指標(biāo)及意義；4.了解人體體表的有菌環(huán)境，加強(qiáng)消毒滅菌的觀念；5.了解單染色法、復(fù)染法、抗酸染色、特殊染色、革蘭染色法等細(xì)菌染色法；掌握革蘭染色法的步驟和涂片的制備。5.掌握油鏡的使用方法，通過油鏡觀察格蘭染色后的膿汁和糞便標(biāo)本涂片中細(xì)菌個(gè)體的形態(tài)特征；6.掌握平板劃線法分離培養(yǎng)細(xì)菌，通過平板分區(qū)劃線法掌握細(xì)菌的分離、純化與培養(yǎng)方法；通過斜面培養(yǎng)基接種法掌握細(xì)菌的純培養(yǎng)方法；通過肉湯培養(yǎng)純菌種；通過斜面培養(yǎng)基接種法掌握細(xì)菌的純培養(yǎng)方法。7.掌握血漿凝固酶試驗(yàn)的原理、方法、結(jié)果觀察及判斷；8掌握抗菌素敏感性試驗(yàn)的種類、原理及應(yīng)用，掌握紙片擴(kuò)散法；9.掌握玻片凝集反應(yīng)試驗(yàn)的原理、方法、結(jié)果觀察及判斷。二、實(shí)驗(yàn)器材（1）培養(yǎng)基的制備：干粉培養(yǎng)基、蒸餾水、稱量皿、天平、藥勺、量筒、錐形瓶、電爐、洗耳球、試管框、移液管、棉塞、牛皮紙、手套、紙繩、石棉網(wǎng)、橡皮筋（2）細(xì)菌的分離培養(yǎng)：膿汁標(biāo)本1支、糞便標(biāo)本1支、碘酒棉球1瓶、酒精棉球1瓶、眼科鑷子2把、伊紅美蘭平板2個(gè)、營養(yǎng)瓊脂平板5個(gè)、接種環(huán)、接種針、酒精燈、打火機(jī)、油性筆（3）細(xì)菌的純培養(yǎng)：接種環(huán)、斜面培養(yǎng)基4支、細(xì)菌分離培養(yǎng)物、酒精燈、打火機(jī)、中性筆（4）細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查：斜面培養(yǎng)物4支、營養(yǎng)肉湯4支、生理鹽水2支、鏡油瓶、吸水紙、拭鏡紙、載玻片4張、顯微鏡、打火機(jī)、中性筆、革蘭染色劑（結(jié)晶紫試劑，盧戈碘液，0.95乙醇，稀釋復(fù)紅染液）（5）細(xì)菌的生化試驗(yàn)：玻片斜面培養(yǎng)物4支、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物（菌液）4支、半固體瓊脂4支、營養(yǎng)瓊脂平板4個(gè)、糖發(fā)酵管1套、抗菌素紙片1套、眼科鑷子2把、接種針、酒精燈、打火機(jī)、中性筆、接種環(huán)、兔血清、生理鹽水(6）細(xì)菌的血清學(xué)試驗(yàn)：玻片、福式志賀菌診斷血清、生理鹽水、酒精燈、接種環(huán)、半固體培養(yǎng)物4支、藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)物4個(gè)、微量發(fā)酵管培養(yǎng)物1套三、實(shí)驗(yàn)過程

圖1試驗(yàn)流程圖（一）培養(yǎng)基的制備1.小組分工組號(hào)培養(yǎng)基稱量水量煮沸分裝備注（44人份）1，11營養(yǎng)瓊脂11.4g300ml--4瓶，500ml瓶，平板2～4營養(yǎng)瓊脂3.0g80ml3次5ml16支×3，中試管，斜面5～7營養(yǎng)肉湯1.1g50ml1次3ml16支×3，小試管，肉湯8～10半固體瓊脂1.9g65ml3次4ml16支×3，小試管，高層表1培養(yǎng)基制備成分2.試驗(yàn)步驟圖2培養(yǎng)基制備實(shí)驗(yàn)步驟3.注意事項(xiàng)（1）培養(yǎng)基煮開，使完全溶解。營養(yǎng)肉湯煮開1次，含瓊脂的培養(yǎng)基煮開3次(煮至剛冒泡,立即放置臺(tái)面，半分鐘后再煮)。注意加熱時(shí),常搖動(dòng)。沸騰時(shí)，不能搖動(dòng)。（2）培養(yǎng)基需趁熱分裝（3）培養(yǎng)基分裝后放置在試管筐內(nèi)，罩上描圖紙牛皮紙，用橡皮筋扎好。（4）做完實(shí)驗(yàn)，收拾器材，放回邊臺(tái)柜內(nèi)，依次擺整齊：量筒罩上紙?zhí)?，扎皮筋；錐形瓶洗干凈后，塞棉塞，罩紙?zhí)祝そ?；干粉培養(yǎng)基蓋好內(nèi)外蓋子，扭緊；藥勺、稱量皿、刻度吸管洗刷干凈，甩去水滴，放回邊臺(tái)抽屜內(nèi)（5）玻璃器材的洗刷無污染器皿:洗滌劑洗刷→流水沖洗10次→晾干。病原菌污染的器材→高壓蒸汽滅菌→趁熱倒出污物→洗滌劑浸泡→瓶子、試管、吸管用毛刷，平皿用紗布，洗刷干凈→流水沖洗10次→晾干。平板儲(chǔ)存待用或做細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，為什么要倒置？防止平板水分蒸發(fā)丟失。防止冷凝水滴落平板表面，影響單菌落形成。（二）空氣的細(xì)菌學(xué)檢查（自然沉降法）1.實(shí)驗(yàn)步驟圖3空氣的細(xì)菌學(xué)檢查步驟2.注意事項(xiàng)（1）嚴(yán)格無菌操作（2）采樣點(diǎn)距離墻壁1m，距離地面0.85-1.5m（三）手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查1.小組分工成員洗手方法平板甲常規(guī)洗手平板1乙標(biāo)準(zhǔn)洗手丙常規(guī)洗手平板2丁標(biāo)準(zhǔn)洗手表2皮膚細(xì)菌檢查分工2.實(shí)驗(yàn)步驟平板面朝下，三個(gè)手指分別在培養(yǎng)基表面觸摸2～3厘米。第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對(duì)照。如圖4。圖4（四）細(xì)菌的分離培養(yǎng)1小組分工小組成員標(biāo)本類型平板類型甲膿汁標(biāo)本營養(yǎng)瓊脂平板乙膿汁標(biāo)本營養(yǎng)瓊脂平板丙糞便標(biāo)本伊紅美藍(lán)平板丁糞便標(biāo)本伊紅美藍(lán)平板表3細(xì)菌分離培養(yǎng)分工2.實(shí)驗(yàn)步驟圖5平板劃線分離細(xì)菌實(shí)驗(yàn)步驟3.注意事項(xiàng)（1）接種環(huán)（白金鉺）燒灼滅菌方法：使用前將白金鉺（白金絲、鎳鉻絲制成）直立火焰中，燒紅滅菌（3～5秒鐘冷卻）。使用后，先在火焰背面將接種環(huán)上標(biāo)本烤干，再燒灼滅菌，以免標(biāo)本汽化，爆裂四濺，污染環(huán)境。金屬桿旋轉(zhuǎn)、通過火焰2～3次，殺滅表面微生物。（2）在酒精燈無菌操作區(qū)操作:火焰周圍10～20cm范圍內(nèi)（3）接種環(huán)取液體標(biāo)本的方法：環(huán)面水平離開液面：快速6μl,慢速2μl環(huán)面垂直離開頁面：快速3μl，慢速1μl（4）無菌取材基本步驟：在火焰旁邊，左手斜持標(biāo)本管下端，右手小指夾住試管棉塞上端，緩慢拔出棉塞并夾持之（棉塞下端不得接觸到管口外任何物體）→管口迅速通過火焰3次→取標(biāo)本→管口通過火焰三次，塞棉塞。（5）平板劃線注意：每區(qū)劃線不少于30條，整個(gè)平板劃線不少于150條線。上下兩條線重疊不影響分離結(jié)果。第一區(qū)劃線不得超過1/5平板（五）細(xì)菌的純培養(yǎng)（斜面接種）1.小組分工成員平板菌落甲普通平板金黃色菌落乙普通平板白色菌落丙EMB平板紫黑色菌落丁EMB平板粉紅色菌落表4細(xì)菌純培養(yǎng)分工2.實(shí)驗(yàn)步驟圖6細(xì)菌純培養(yǎng)步驟3.注意事項(xiàng)接種時(shí)，接種桿連接部不能碰到斜面培養(yǎng)基（六）細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查1.革蘭染色法（1）實(shí)驗(yàn)步驟圖7革蘭染色步驟（2）注意事項(xiàng)①取菌適量,涂片均勻,水洗輕緩,脫色適當(dāng)。②影響革蘭染色的關(guān)鍵步驟是涂片和脫色。③如果浸油內(nèi)有氣泡，會(huì)影響觀察，可稍微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡來回通過1～2次浸油，排除油內(nèi)氣泡。④乙醇和乙醚易爆炸，使用時(shí)務(wù)必確保酒精燈已熄滅。⑤鏡檢過的載玻片不必擦拭，直接投入玻片缸內(nèi)消毒、滅菌。⑥待染色和肉湯接種完畢，桌面收拾干凈，才可鏡檢，以免污染。2.液體培養(yǎng)基接種法（1）分工成員菌落甲金黃，紫黑乙白色，粉紅丙金黃，紫黑丁白色，粉紅表5液體培養(yǎng)基接種分工（2）實(shí)驗(yàn)步驟圖8液體培養(yǎng)基接種步驟（七）細(xì)菌的生化試驗(yàn)1.細(xì)菌的糖發(fā)酵試驗(yàn)（1）分工成員菌落糖甲紫黑葡萄糖乙紫黑乳糖丙粉紅葡萄糖丁粉紅乳糖表6糖發(fā)酵試驗(yàn)分工（2）實(shí)驗(yàn)步驟圖9糖發(fā)酵試驗(yàn)步驟2.抗菌素敏感性試驗(yàn)（1）實(shí)驗(yàn)分工成員菌液甲金黃菌液乙白色菌液丙紫黑菌液丁粉紅菌液表7抗菌素敏感性試驗(yàn)分工（2）實(shí)驗(yàn)步驟圖10抗菌素敏感性試驗(yàn)步驟3.血漿凝固酶試驗(yàn)圖11血漿凝固酶試驗(yàn)步驟注意：來回側(cè)傾載玻片，讓菌液流動(dòng)起來，結(jié)果更明顯。4.半固體接種法（1）分工甲、乙紫黑丙、丁粉紅（2）實(shí)驗(yàn)步驟圖12半固體接種法實(shí)驗(yàn)步驟（八）血清學(xué)試驗(yàn)圖13血清學(xué)試驗(yàn)步驟注意：①研磨成直徑8～10mm的均勻菌液②載玻片來回傾側(cè)，讓菌液充分混勻，凝集速度更快、結(jié)果更清楚。③菌液凝集者記為陽性，菌液均勻混濁記為陰性。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論（一）實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象與結(jié)果討論1.培養(yǎng)基的制備我們小組制備的是半固體培養(yǎng)基，如圖14圖142.空氣的細(xì)菌學(xué)檢查圖15采樣地點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)室窗臺(tái)形成菌落數(shù)：4個(gè)平板直徑：7cmCFU/m3＝50000N÷AT≈86N=3443.手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查圖16（1）洗手前后細(xì)菌的（顏色）種類：洗前細(xì)菌種類多，洗后細(xì)菌種類少，說明洗手能洗掉大多數(shù)暫住菌。（2）常規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)洗手的細(xì)菌數(shù)量：常規(guī)（簡單）洗手，平板上細(xì)菌數(shù)量少。標(biāo)準(zhǔn)洗手，平板上細(xì)菌數(shù)量多。這是因?yàn)槌Ｗ【鷶?shù)量大，牢固附著在皮膚上，常洗不掉，可洗松動(dòng)，經(jīng)摩擦接種、脫落到培養(yǎng)基上，顯示細(xì)菌更多。（3）經(jīng)碘酒和酒精棉球消毒后，甲、乙、丙的沒有細(xì)菌生長，而乙同學(xué)有少量細(xì)菌，可能是因?yàn)橄緯r(shí)范圍太小，而沒有消毒的那部分皮膚觸摸了培養(yǎng)基。（4）空白對(duì)照沒有細(xì)菌生長4.細(xì)菌的分離制備（1）結(jié)果圖17標(biāo)本培養(yǎng)基現(xiàn)象膿汁標(biāo)本普通平板有金黃色、白色兩種菌落。菌落直徑2mm左右、圓形、隆起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、不透明糞便標(biāo)本伊紅美藍(lán)平板有紫黑色、淡粉紅色兩種菌落。紫黑色菌落具有金屬光澤、大而隆起、不透明，直徑2～3mm；粉紅色菌落半透明，直徑1

～2mm表8細(xì)菌分類制備結(jié)果（2）誤差分析①果出現(xiàn)平板劃線分離失敗的現(xiàn)象，可能是因?yàn)槿【刻?。②果出現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)不均勻，可能是因?yàn)閯澗€力度控制不均，劃破了平板。③培養(yǎng)、放置時(shí)間過長或者平板上某個(gè)部位細(xì)菌比較多、菌落比較密集，大腸桿菌菌落顏色可能會(huì)發(fā)生改變。因?yàn)榇竽c桿菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分解大多產(chǎn)生堿性物質(zhì)，中和了乳糖分解時(shí)產(chǎn)生的酸。大腸桿菌菌落可能會(huì)由原來的紫黑色變成粉紅色，或者菌落中心黑色，邊緣粉紅色。5.細(xì)菌的純培養(yǎng)圖18（1）從普通平板上挑取的金黃色或白色菌落接種的斜面，菌苔的顏色，還是原來菌落的顏色，金黃色或白色。（2）從伊紅美藍(lán)平板上挑取的紫黑色或粉紅色菌落接種的斜面，菌苔已沒有原來菌落的顏色。菌苔灰白色、表面濕潤、光滑、不透明或半透明。6.細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果圖19圖20、21圖22、23（1）革蘭染色結(jié)果：白色菌落和金黃色菌落為紫色，提示革蘭染色陽性菌，而粉紅和紫黑色菌落為淺紅色，提示革蘭陰性菌。（2）鏡檢結(jié)果：①黃色、白色兩種菌落在顯微鏡油鏡下均為G+球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，是典型的葡萄球菌。結(jié)合菌落色素，這兩株葡萄球菌可能是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。②用伊紅美藍(lán)平板，從糞便標(biāo)本分離、獲得紫黑色和粉紅色半透明兩種菌落。紫黑色菌落可能是能分解乳糖的非致病菌大腸埃希菌。粉紅色菌落是不能分解乳糖的致病菌。顯微鏡下，均為G-桿菌，散在排列，從形態(tài)上不能鑒別是什么細(xì)菌。（3）誤差分析鏡下看不到單個(gè)的細(xì)菌，可能是因?yàn)闆_洗時(shí)水流太大，將標(biāo)本沖走。鏡下難以分清單個(gè)細(xì)菌的形態(tài)，可能是因?yàn)橥科瑯?biāo)本制備時(shí)涂片過厚。7.生化試驗(yàn)結(jié)果（1）糖發(fā)酵試驗(yàn)圖24糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果管現(xiàn)象是否分解糖是否產(chǎn)酸是否產(chǎn)氣甲紫黑色菌+葡萄糖變黃，有氣泡是是是乙紫黑色菌+乳糖變黃，有氣泡是是是丙粉紅色菌+葡萄糖變黃，無氣泡是是否丁粉紅色菌+乳糖不變黃，無氣泡否否否表9糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果圖25生化反應(yīng)各個(gè)小組結(jié)果實(shí)驗(yàn)室各個(gè)小組實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，故糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果可靠。（2）半固體穿刺試驗(yàn)

圖26動(dòng)力試驗(yàn)甲和乙管紫黑色細(xì)菌擴(kuò)散生長,培基混濁，說明細(xì)菌有鞭毛；丙和丁管粉紅色細(xì)菌沿接種線生長,培基清澈透明，說明細(xì)菌無鞭毛。根據(jù)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室各個(gè)小組實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，故半固體試驗(yàn)結(jié)果可靠。（3）抗生素敏感試驗(yàn)圖27、28圖29、30①本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果：抗菌藥物菌類型青霉素先鋒霉素慶大霉素直徑敏感程度直徑敏感程度直徑敏感程度金黃39mm+36mm+25mm+白色62mm+60mm+60mm+紫黑-23mm+-粉紅--27mm+表10藥敏試驗(yàn)結(jié)果圖31藥敏試驗(yàn)各個(gè)小組結(jié)果②結(jié)合整個(gè)實(shí)驗(yàn)室小組實(shí)驗(yàn)結(jié)果，金黃細(xì)菌和白色細(xì)菌對(duì)青霉素、先鋒霉素、慶大霉素均敏感；紫黑細(xì)菌和粉紅細(xì)菌對(duì)先鋒霉素和慶大霉素敏感，對(duì)青霉素耐藥。③與其他小組不同，本組實(shí)驗(yàn)得出紫黑細(xì)菌對(duì)慶大霉素敏感，粉紅細(xì)菌對(duì)先鋒霉素敏感。由于一點(diǎn)抑菌圈都沒有出現(xiàn)，故較可能是由于細(xì)菌污染。因此出現(xiàn)這種結(jié)果的原因更可能是檢測的這兩張抗生素紙片存在問題或者實(shí)驗(yàn)人員拿錯(cuò)抗菌藥物紙片。④實(shí)驗(yàn)室有兩組結(jié)果中白色細(xì)菌對(duì)青霉素耐藥，出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能為無菌操作不嚴(yán)格，污染雜菌或接種時(shí)未協(xié)調(diào)好，接種錯(cuò)誤。⑤有小組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中抑菌圈太小，這種情況的原因可能是水分蒸發(fā)，抗菌藥物紙片的藥物沒有完全擴(kuò)散或者取菌量太少。（4）凝固酶試驗(yàn)圖32凝固酶試驗(yàn)結(jié)果金黃色菌很快凝固起來，白色菌凝集試驗(yàn)為陰性，故金黃色菌為致病菌8.血清學(xué)試驗(yàn)圖33血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果粉紅色菌福氏志賀菌血清凝集試驗(yàn)為陽性，生理鹽水試驗(yàn)區(qū)為陰性，故粉紅色菌為福氏志賀菌。（二）實(shí)驗(yàn)結(jié)論標(biāo)本菌落形態(tài)血漿凝固酶試驗(yàn)葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)乳糖發(fā)酵試驗(yàn)半固體動(dòng)力試驗(yàn)福痢血清青霉素先鋒霉素

慶大霉素結(jié)論膿汁金黃G+球菌++++金黃色葡萄球菌白色G+球菌-+++白色葡萄球菌糞便紫黑G-桿菌⊕⊕+-++大腸埃希菌粉紅G-桿菌+--+-++福氏志賀菌表表11實(shí)驗(yàn)結(jié)論五、思考題（一）細(xì)菌的分離培養(yǎng)1.人工培養(yǎng)細(xì)菌需要提供的條件是什么?①培養(yǎng)時(shí)應(yīng)根據(jù)細(xì)菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法，培養(yǎng)基，制定培養(yǎng)條件（溫度、pH值、時(shí)間,對(duì)氧的需求與否等）。②培養(yǎng)基是指根據(jù)各種微生物生長繁殖的需要而合成的一種營養(yǎng)制品。pH7.4～7.6。一般細(xì)菌可在有氧條件下，37℃中放18～24小時(shí)生長；厭氧菌則需在無氧環(huán)境中放2～3天后生長；個(gè)別細(xì)菌如結(jié)核菌要培養(yǎng)1個(gè)月之久。③整個(gè)培養(yǎng)過程必須按無菌操作要求進(jìn)行。2.培養(yǎng)基制備的原則是什么?①必須滿足所要培養(yǎng)微生物的營養(yǎng)要求，不同種類的微生物對(duì)各種營養(yǎng)的要求不同②注意各種營養(yǎng)成分的濃度配比，因?yàn)槊糠N微生物生長所需要的最佳碳氮比值不一樣③培養(yǎng)基的酸堿度（PH值）必須適合所要培養(yǎng)微生物的生長。3.怎樣檢查培養(yǎng)基是否合格?①無菌試驗(yàn)：將待檢培養(yǎng)基置于35～37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)，無任何細(xì)菌生長為合格。②效果試驗(yàn)：將已知的標(biāo)準(zhǔn)參考菌株，接種于待檢培養(yǎng)基中，檢查細(xì)菌的生長繁殖狀況和生化反應(yīng)是否與預(yù)期的結(jié)果相符合。4.培養(yǎng)基按物理形狀分哪幾種?各有何用途?①固體培養(yǎng)基：是在培養(yǎng)基中加入凝固劑，有瓊脂、明膠、硅膠等。固體培養(yǎng)基常用于微生物分離、鑒定、計(jì)數(shù)和菌種保存等方面。②液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中不加任何凝固劑。這種培養(yǎng)基的成分均勻，微生物能充分接觸和利用培養(yǎng)基中的養(yǎng)料，適于作生理等研究，由于發(fā)酵率高，操作方便，也常用于發(fā)酵工業(yè)。③半固體培養(yǎng)基：是在液體培養(yǎng)基中加入少量凝固劑而呈半固體狀態(tài)。可用于觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種和測定噬菌體的效價(jià)等方面。5.高壓蒸汽滅菌法的殺菌機(jī)理是什么利用加熱產(chǎn)生蒸氣，隨著蒸氣壓力不斷增加，溫度隨之升高，通常壓力在1.05kg/cm

2時(shí)，器內(nèi)溫度可達(dá)121.3℃，維持15～30min，可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物。（二）空氣和手指皮膚細(xì)菌檢查、細(xì)菌平板劃線接種1.為何取鏈球菌作為空氣的衛(wèi)生指標(biāo)之一?常存在于口腔和鼻腔。2.為什么金黃色葡萄球菌是醫(yī)院內(nèi)感染常見的重要病原菌?金黃色葡萄球菌感染的起因常見感染途徑有經(jīng)輸液治療用的血管內(nèi)裝置如末梢靜脈插管或中心靜脈插管、血行感染等。3.為什么接種環(huán)使用前后必須燒灼滅菌？忽略了有什么危害?使用前燒針是為了防止雜菌污染自己的目標(biāo)菌，使用后燒針是防止自己目標(biāo)菌污染其他物品。4.做細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，平板為什么要倒置?①防止平板水分蒸發(fā)丟失。②防止冷凝水滴落平板表面，影響單菌落形成。5.培養(yǎng)細(xì)菌的常用方法有哪些?一般培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法、厭氧培養(yǎng)法6.從臨床標(biāo)本中分離病原菌，應(yīng)注意哪些事項(xiàng)?標(biāo)本應(yīng)該選擇細(xì)菌可能定植的部位。且需注意恰當(dāng)?shù)牟杉瘯r(shí)間、規(guī)范的采集方法。（三）空氣和手指皮膚細(xì)菌檢查結(jié)果分析、細(xì)菌斜面接種1.在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,怎樣才能避免雜菌的污染?①操作環(huán)境要盡量無菌；操作過程要按照實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行，在酒精燈邊操作。②操作人員有良好的衛(wèi)生習(xí)慣，穿著實(shí)驗(yàn)服或滅菌衣，注意手部清潔及消毒。③實(shí)驗(yàn)結(jié)束后實(shí)驗(yàn)器材必須徹底滅菌。2.空氣的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定如何？撞擊法cfu/m3沉降法個(gè)/皿適用范圍≤1000≤103～5星級(jí)賓館、飯店≤1500≤202星級(jí)以下賓館和非星級(jí)帶空調(diào)賓館、飯店≤2500≤30普通飯店、招待所、酒吧、茶座、咖啡廳、圖書館、博物館、美術(shù)館、飛機(jī)客艙≤4000≤40音樂廳、影劇院、游藝廳、舞廳、理發(fā)店、美容院（店）、游泳館、體育館、醫(yī)院候診室、候機(jī)室、旅客列車車廂、輪船客艙、飯館（餐廳）≤7000≤75展覽館、商場（店）、書店、候車室、候船表12空氣的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)3.你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明了什么問題?按照無菌操作，未出現(xiàn)雜菌污染現(xiàn)象。4.怎樣從醫(yī)務(wù)人員手指上分離和鑒定金黃色葡萄球菌?接觸式培養(yǎng)皿組采用接觸式培養(yǎng)皿法，棉簽擦拭組采用棉簽擦拭法進(jìn)行，分別取樣，培養(yǎng)，菌落計(jì)數(shù)，金黃色葡萄球菌鑒別培養(yǎng)基鑒定該種類菌株數(shù)。5.菌落特征主要描述哪幾方面問題？如何挑選單菌落？菌落的大小、形態(tài)、顏色、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起狀態(tài)、邊緣特征等。用接種環(huán)或接種針輕取培養(yǎng)基上半個(gè)菌落。（四）細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查1.革蘭染色法的關(guān)鍵步驟是什么?為什么?關(guān)鍵步驟是乙醇脫色，因?yàn)槊撋蛔銜?huì)被誤認(rèn)為是陽性菌，脫色過度會(huì)被誤認(rèn)為為陰性菌。2.染色時(shí)為什么通常要用新鮮的細(xì)菌培養(yǎng)物?為了使用處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)菌，在這個(gè)時(shí)期內(nèi)，各種細(xì)菌的生理生化反應(yīng)典型而明顯，這樣通過革蘭染色能獲得正確的結(jié)果。3.如何使用油鏡?10x物鏡找到標(biāo)本→在要觀察的玻片位置上滴一滴香柏油→換100x物鏡→微調(diào)旋鈕至觀察到清晰的物象→關(guān)閉電源→擦鏡紙擦去香柏油→擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚（3：7）混合液擦拭→擦拭紙擦拭油鏡→顯微鏡蓋上罩子，橫放在實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)。（五）細(xì)菌生化試驗(yàn)1.細(xì)菌生化反應(yīng)在感染性疾病診斷中有何重要意義?①感染性疾病的病原學(xué)診斷：由細(xì)菌引起的感染性疾病，最確切、最可靠的診斷依據(jù)(“金標(biāo)準(zhǔn)”)是，從患者標(biāo)本中將病原菌分離培養(yǎng)出來，并鑒定其菌屬、種和型。細(xì)菌的生化反應(yīng)對(duì)菌體形態(tài)、革蘭染色反應(yīng)和菌落特征相同和相似的細(xì)菌的鑒定尤為重要。細(xì)菌藥物敏感試驗(yàn)?zāi)苤笇?dǎo)臨床選用抗菌藥物治療。②生物制品的制備：制備疫苗、類毒素、抗毒素等用于防治，制備菌液、抗血清等用于診斷。2.為什么要在發(fā)酵管液面上方大約2～3cm處切割？如果在發(fā)酵管液面上方偏下處切割，可能由于發(fā)酵管太短從而導(dǎo)致氣泡溢出。3.培養(yǎng)時(shí)，微量糖發(fā)酵管管口不能朝上，為什么？防治氣泡產(chǎn)生時(shí)沿著管口溢出，從而干擾導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差。4.抗菌素敏感性實(shí)驗(yàn)有何實(shí)際意義?可預(yù)測抗菌治療的效果。5.血漿凝固酶試驗(yàn)觀察完畢，應(yīng)將載玻片立即放入消毒缸內(nèi)，為什么?防止細(xì)菌污染實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)操作人員。6.半固體穿刺接種時(shí)，為什么要強(qiáng)調(diào)“原路返回”?如果未原路返回會(huì)有兩條細(xì)菌穿刺生長線，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察。7.為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，你認(rèn)為上述試驗(yàn)應(yīng)還設(shè)立哪些對(duì)照?全部設(shè)置一組空白對(duì)照，檢驗(yàn)是