羊傳染性膿皰皮炎的流行病學(xué)特點(diǎn)及防治

羊傳染性膿皰皮炎的流行病學(xué)特點(diǎn)及防治

綿羊感染（cpdv）是由痘病毒科和副痘病毒科引起的羊感染病毒。它被稱(chēng)為由羊口病毒（cpdv）引起的綿羊、山羊和人類(lèi)的急性、接觸性和嗜上皮性傳染病。它以羊、山羊和其他動(dòng)物的嘴唇、鼻孔周?chē)膫凇⒖谇徽衬ず腿轭^皮膚形成丘、水泡、膿皮和肉皮屑。主要是皮膚和粘膜的增生性疾病。早在1787年就有了對(duì)該病的描述,澳大利亞、新西蘭、南非、希臘、印度、美國(guó)、意大利等多個(gè)養(yǎng)羊國(guó)家均有該病發(fā)生和流行的報(bào)道。我國(guó)有關(guān)該病的文獻(xiàn)記載最早始于1955年,目前該病廣泛分布于世界各養(yǎng)羊國(guó)家和地區(qū)并呈不斷上升趨勢(shì)。該病主要危害羔羊和部分成年羊,羔羊發(fā)病率高達(dá)100%,若繼發(fā)或混合感染其他病原微生物,則病死率較高。該病可以通過(guò)傷口感染飼養(yǎng)人員表現(xiàn)為手背、指間和前臂部皰疹和破潰。因此,羊傳染性膿皰的暴發(fā)和流行不但嚴(yán)重危害養(yǎng)羊業(yè)的健康發(fā)展而且威脅人們的身體健康,是一種危害較為嚴(yán)重的人畜共患傳染病。目前對(duì)于口瘡的診斷主要依靠臨床癥狀,但是往往從癥狀上易和反芻動(dòng)物的其他水泡性疾病以及羊的潰瘍性皮炎相相混淆,據(jù)報(bào)道2001年英國(guó)口蹄疫中有23%為誤診,其中有一部分就是和羊痘和羊口瘡病相混淆。本文就近年來(lái)國(guó)內(nèi)外羊口瘡病臨床診斷、組織病理學(xué)診斷、病原學(xué)和血清學(xué)診斷技術(shù)進(jìn)行概述,以期對(duì)該病的診斷和防控提供參考。1蹄疫病的主要原理根據(jù)ORFV嗜好組織的損傷特征能夠診斷羊口瘡,但在具體的臨床診斷中,應(yīng)該與羊痘、口蹄疫、葡萄球菌引起的皮炎、嗜皮性細(xì)菌病以及潰瘍性皮膚病加以鑒別。在臨床上區(qū)分羊ORFV感染和口蹄疫病毒(Footandmouthdiseasevirus,FMDV)主要依據(jù)是ORFV能夠引起增生性損傷而FMDV不會(huì)引起此種性質(zhì)的病變。潰瘍性皮膚病主要以皮膚、面部、足部及生殖器外部形成潰瘍和結(jié)硬皮痂為特征,這種損傷也不會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)散。與羊口瘡相比,嗜皮性細(xì)菌病的典型特征是在表皮形成連接成簇的極小的膿皰,除非羊過(guò)度疲勞,否則此病也很少引起顯著的皮膚損傷。葡萄球菌引起的皮炎以脫發(fā)為主要特征。另外,羊痘和羊口瘡病毒感染的鑒別主要通過(guò)電子顯微鏡觀察、組織病理學(xué)檢查、免疫組化、血清學(xué)試驗(yàn)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等加以診斷和鑒別。2口腔感染型病羊采食、咀嚼、吞咽困難,流涎、消瘦、衰弱、精神沉郁,食欲減退或廢絕、反芻減少,嘴角、上下唇、鼻鏡和鼻孔邊緣有水皰或膿皰,破潰形成黃色或黑褐色痂塊,口腔黏膜潮紅,齒齦、頰部及軟腭上有水皰或膿瘡,多數(shù)可見(jiàn)鮮紅潰瘍面,口腔內(nèi)膿皰破潰后經(jīng)久不愈,表面有膜狀淡黃色沉積物。病羊經(jīng)剖檢可見(jiàn)面部皮下組織呈膠樣浸潤(rùn),有化膿性壞死,氣管充血,出血,下頜淋巴結(jié)腫大。若有葡萄球菌、壞死桿菌等感染,會(huì)造成病情惡化,導(dǎo)致羔羊死亡。有繼發(fā)感染的情況下可見(jiàn)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),真皮層可見(jiàn)單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn),但該診斷方法只能做輔助性診斷,沒(méi)有針對(duì)性。3羊、羊病害發(fā)病時(shí)間本病自然感染主要由購(gòu)入病羊或帶毒羊而轉(zhuǎn)入健康羊群,引起群發(fā),或是利用受污染的畜舍或草地而感染,潛伏期一般為4d~8d,易在羊引進(jìn)7d~21d發(fā)病,常在15d左右暴發(fā)。綿羊、山羊以3月齡~6月齡羔羊發(fā)病最多,常呈群發(fā)性流行,羔羊發(fā)病率高達(dá)100%,成年羊同樣易感,但發(fā)病較少,多為散發(fā)。本病無(wú)明顯季節(jié)性,但以春夏季發(fā)病較多。病羊和帶毒羊是主要傳染源,特別是病羊的痂皮帶毒時(shí)間較長(zhǎng)。病毒主要通過(guò)接觸感染,健康羊常因皮膚,黏膜擦傷處接觸到病源而感染發(fā)病。4疾病的原始診斷4.1病毒顆粒及表面結(jié)構(gòu)電子顯微鏡下觀察病毒形態(tài)是一種經(jīng)典和快速的羊口瘡診斷方法,在電鏡下可見(jiàn)病毒顆粒長(zhǎng)約220nm~250nm,寬約125nm~200nm,表面結(jié)構(gòu)為管狀條索斜形交叉呈“8”字型纏繞線團(tuán)狀。但是羊口瘡病毒和其他痘病毒大小相近無(wú)法通過(guò)電子顯微鏡鑒別,給確診造成一定困難。4.2副龍病毒形態(tài)鑒定免疫電鏡法是應(yīng)用病毒特異性抗體吸附口瘡病毒,再在電子顯微鏡下觀察副痘病毒形態(tài),這種免疫法和電鏡法相結(jié)合增加了該診斷方法的特異性,目前使用病毒單克隆抗體特異性吸附口瘡病毒進(jìn)行免疫電鏡觀察。4.3細(xì)胞外分離細(xì)胞病毒分離鑒定是羊口瘡診斷的金標(biāo)準(zhǔn),原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞都可用于羊口瘡病毒的分離。在原代細(xì)胞中羔羊睪丸細(xì)胞和腎細(xì)胞是最常用的病毒分離細(xì)胞,除此之外胎牛肌細(xì)胞、胎羊真皮細(xì)胞、牛睪丸細(xì)胞、胎牛肺細(xì)胞、胎羊腎細(xì)胞、胎羊肌細(xì)胞也可用于病毒分離。病毒在細(xì)胞中盲傳1代~2代即可產(chǎn)生細(xì)胞病變,表現(xiàn)為細(xì)胞變圓、退化和脫落,染色后病毒感染的細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)嗜酸性小體。4.4pcr和cpv的比較不同的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)體系都可用于口瘡感染的快速檢測(cè)。一種基于B2L基因的半套式PCR方法能夠檢測(cè)臨床樣本中低拷貝數(shù)量的病毒粒子,基于B2L或VIR基因的PCR診斷方法已經(jīng)廣泛用于診斷副痘病毒屬的感染。PPP4和PPP1的引物組合能擴(kuò)展所有的副痘病毒,而PPP3和PPP4的引物組合則可以擴(kuò)增口瘡病毒特有的基因片段,病毒的細(xì)胞分離和和中和試驗(yàn)與PCR方法的復(fù)合率為85.7%,這說(shuō)明PCR方法的敏感性高于病毒分離鑒定。另外,利用A29基因(413bp)和H3L基因(708bp)的雙重PCR方法被認(rèn)為在鑒別CPV和PRFV方面有相當(dāng)?shù)臐摿?。向智龍等以山羊痘病毒ITR基因和羊口瘡病毒H2L基因?yàn)榛A(chǔ),建立了特異性和敏感新高的雙重PCR診斷方法。4.5real-timepcr診斷方法基于B2L基因擴(kuò)增的real-timePCR技術(shù)已經(jīng)廣泛用于臨床樣本中病毒檢測(cè)和定量。4.6基因分型對(duì)口胞菌基因型的影響基于羊口瘡病毒基因組的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分析是研究副痘病毒分子特征較好的工具,可以從副痘病毒成員中區(qū)分出口瘡病毒,EcoRⅠ、BamHⅠ和HindⅢ是3種常用的限制性?xún)?nèi)切酶,有報(bào)道使用DraⅠ限制性?xún)?nèi)切酶酶更利于口瘡病毒的基因分型。使用酚/氯仿抽提法可以從超速離心純化的病毒和病變結(jié)痂中獲得病毒DNA,研究證明系統(tǒng)進(jìn)化分析可用于副痘病毒的鑒定和不同毒株間的遺傳進(jìn)化關(guān)系分析。4.7lamp方法的擴(kuò)增效果向智龍等以羊口瘡病毒B2L基因保守區(qū)為模板設(shè)計(jì)了4條引物,經(jīng)過(guò)條件摸索,建立了特異性和敏感性較高的羊口瘡環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)技術(shù)。用建立的LAMP方法對(duì)ORFV陽(yáng)性樣品擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳呈特征性梯狀條帶,而綿羊痘病毒、藍(lán)舌病病毒、口蹄疫病毒、絲狀支原體山羊亞種、山羊痘病毒及健康山羊皮膚的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后均無(wú)擴(kuò)增條帶。對(duì)ORFV的最低檢出量為5.3fg,比常規(guī)PCR方法靈敏度高1000倍。5血清學(xué)診斷5.1病毒的中和試驗(yàn)血清中和試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是常用的抗體診斷試驗(yàn),檢測(cè)疑似血清當(dāng)血清中和滴度大于8或者補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)大于20,時(shí)可認(rèn)為口瘡感染陽(yáng)性。5.2配合使用不同動(dòng)物的免疫膠原蛋白使用純化的口瘡病毒作為抗原的間接ELISA方法,再配合使用不同動(dòng)物的免疫球蛋白可以用于檢測(cè)不同種屬動(dòng)物的口瘡病毒抗體,這種方法也被成功地應(yīng)用于駱駝、羊和人的口瘡感染檢測(cè)。5.3其它蛋白反應(yīng)在Westernblot試驗(yàn)中,感染動(dòng)物的血清可以和羊口瘡病毒約40ku的免疫原性蛋白反應(yīng),病毒的其他蛋白如20ku和22ku也可以與感染血清發(fā)生反應(yīng)。使用兔抗羊口瘡病毒多克隆抗體和純化的羊口瘡病毒進(jìn)行Westernblot可見(jiàn)有66、39、22、56、24、25ku的反應(yīng)條帶,39ku和22ku抗原性強(qiáng)的膜蛋白可被免疫系統(tǒng)識(shí)別。6血清學(xué)診斷技術(shù)應(yīng)符合現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)綜上