生物技術(shù)制藥復(fù)習(xí)題含答案

生物技術(shù)制藥復(fù)習(xí)一、名詞解釋?zhuān)?、生物藥品：是指運(yùn)用多個(gè)生物材料，綜合采用多個(gè)生物技術(shù)的原理和辦法制造的一類(lèi)用于防止、治療和診療的制品。2、抗生素：由微生物產(chǎn)生，在低濃度下能殺滅和克制病原體，但對(duì)宿主不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用的物質(zhì)，或使用化學(xué)辦法半合成的衍生物和全合成的仿制品。廣義的抗生素還涉及某些抗腫瘤藥、殺蟲(chóng)劑和除草劑。3、補(bǔ)料分批發(fā)酵：是指將種子接入發(fā)酵反映器進(jìn)行培養(yǎng)，通過(guò)一段時(shí)間之后，間歇式地、或者持續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基，使菌體進(jìn)一步生長(zhǎng)的辦法。4、限制性?xún)?nèi)切酶：生物體內(nèi)能識(shí)別并切割特異的雙鏈DNA序列的一種。它是能夠?qū)⑼鈦?lái)的DNA切斷的酶，即能夠限制異源DNA的侵入并使之失去活力，但對(duì)自己的DNA卻無(wú)損害作用，這樣能夠保護(hù)細(xì)胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進(jìn)行的，故名限制性?xún)?nèi)切酶。5、載體：將外源目的DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞，并能自我復(fù)制和增殖的工具。6、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系：正常細(xì)胞通過(guò)某個(gè)轉(zhuǎn)化過(guò)程，失去正常細(xì)胞的特點(diǎn)而獲得無(wú)限增殖能力的細(xì)胞系。7、微載體培養(yǎng)：將細(xì)胞吸附于微載體表面，再在培養(yǎng)液中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，使細(xì)胞在微載體表面生長(zhǎng)成單層的辦法稱(chēng)為微載體培養(yǎng)法。8、毛狀根：受到發(fā)根農(nóng)桿菌感染后形成的根組織，易于培養(yǎng)，變化了植物的次生代謝。毛狀根生長(zhǎng)快速和次級(jí)代謝產(chǎn)物含量高，特別合用于從木本植物和難于培養(yǎng)的植物中得到較高含量的次級(jí)代謝產(chǎn)物。9、氣升式反映器：沒(méi)有攪拌，氣體通過(guò)噴管進(jìn)入剪切力更小，重要用于懸浮細(xì)胞的分批式培養(yǎng)，近年開(kāi)發(fā)用于貼壁細(xì)胞的微載體培養(yǎng)，并進(jìn)行半持續(xù)、持續(xù)和灌流式培養(yǎng)。10.酶固定化：指經(jīng)物理或化學(xué)辦法解決，使酶（細(xì)胞）限制或固定于特定空間位置，使之不僅能持續(xù)發(fā)揮催化作用，并且反映后酶又能夠重復(fù)運(yùn)用的技術(shù)。11.抗體酶：又稱(chēng)催化抗體，是指通過(guò)一系列化學(xué)與生物技術(shù)辦法制備出的含有催化活性的抗體，它除了含有對(duì)應(yīng)免疫學(xué)特性，還類(lèi)似于酶，能催化某種反映。12.微生物轉(zhuǎn)化：是通過(guò)微生物細(xì)胞將復(fù)雜的底物進(jìn)行構(gòu)造修飾,也就是運(yùn)用微生物謝過(guò)程中產(chǎn)生的某個(gè)或某一系列的酶對(duì)底物特定部位(基團(tuán))進(jìn)行的一種或幾個(gè)化學(xué)催化反映，使其轉(zhuǎn)化成構(gòu)造相似的更有價(jià)值的新化合物。13.多克隆抗體：給動(dòng)物接種天然抗原所獲得的免疫血清或抗血清，是多個(gè)抗體的混合物,它是由多個(gè)抗原決定簇刺激多株B細(xì)胞增殖分化所產(chǎn)生的,稱(chēng)為多克隆抗體。14.單克隆抗體：通過(guò)B細(xì)胞雜交瘤技術(shù),獲得特異性針對(duì)某一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆，產(chǎn)生均一性的抗體。15.基因工程抗體：基因工程抗體：將抗體的基因按不同需要進(jìn)行改造和重組，然后導(dǎo)入適宜的受體細(xì)胞中進(jìn)行體現(xiàn)，便產(chǎn)生了第三代抗體－基因工程抗體。16.基因工程多肽疫苗：運(yùn)用基因工程技術(shù)制備抗原成分的亞單位的疫苗稱(chēng)為基因工程多肽疫苗。17.DNA疫苗：DNA疫苗又稱(chēng)核酸疫苗、基因疫苗，是通過(guò)基因重組技術(shù)把編碼抗原蛋白的基因序列克隆到質(zhì)粒，并在基因的上游加上細(xì)胞能夠識(shí)別的啟動(dòng)子，形成一種體現(xiàn)載體，將這個(gè)體現(xiàn)載體DNA直接導(dǎo)入宿主細(xì)胞，由細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯系統(tǒng)直接合成抗原蛋白，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白的免疫應(yīng)答，達(dá)成防病治病目的。18.基因治療：廣義上來(lái)講是指將某種遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到患者細(xì)胞內(nèi)，使其在體內(nèi)發(fā)揮作用，以達(dá)成治療疾病目的的辦法。19.細(xì)胞治療技術(shù)：將患者本身細(xì)胞在體外進(jìn)行解決后回輸體內(nèi)進(jìn)行治療的辦法。20.生化藥品：所謂生化藥品是指以天然的動(dòng)物、植物、微生物等生物體組織和器官為原料，通過(guò)化學(xué)辦法進(jìn)行提取、精制或者用化工合成辦法制成的內(nèi)源性生理生化物質(zhì)，用于防止、治療、診療疾病。涉及由上述這些已知藥品加以構(gòu)造改造或人工合成發(fā)明出的自然界所沒(méi)有的新藥品。二、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述生物藥品新藥的研發(fā)流程。答：新藥研究和開(kāi)發(fā)的重要過(guò)程：擬定研究計(jì)劃；(2)準(zhǔn)備候選菌株；(3)選擇適宜藥理模型初篩（搖瓶）、復(fù)篩（小型發(fā)酵）體外實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)；(4)提純有效成分進(jìn)行化學(xué)分析；(5)精制樣品（中型發(fā)酵）；(6)臨床前Ⅱ期(PreclinicalⅡ)；(7)Ⅰ期臨床(PreclinicalI)；(8)Ⅱ期臨床(PreclinicalⅡ)；(9)Ⅲ期臨床(PreclinicalⅢ)；(10)注冊(cè)申請(qǐng)上市、試生產(chǎn)；(11)售后監(jiān)測(cè)(Post－marketingsurveillance)。簡(jiǎn)述生物藥品的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。答：生物藥品是指運(yùn)用多個(gè)生物材料，綜合采用多個(gè)生物技術(shù)的原理和辦法制造的一類(lèi)用于防止、治療和診療的制品。優(yōu)點(diǎn)：用量少，藥理活性高；（2）特異性強(qiáng)，治療的生理生化機(jī)制合理，療效可靠；毒副作用小、價(jià)值高；缺點(diǎn)：（1）成分復(fù)雜：大多數(shù)是混合物；（2）不穩(wěn)定：易變性，易失活，易降解。（3）提取純化工藝復(fù)雜、生產(chǎn)技術(shù)難度高；（4）生理副作用常有發(fā)生。3.給出下列生物藥品的中文名稱(chēng):IFN；TNF；IL；G-CSF；EPO；GM-CSF；r-SK；r-SAK；GH；EGF；bFGF；rhTPO；t-PA；SRM答：IFN（人α-干擾素）；TNF（腫瘤壞死因子）；IL（白細(xì)胞介素）；G-CSF（粒細(xì)胞集落刺激因子）；EPO（促紅細(xì)胞生成素）；GM-CSF（粒細(xì)胞／巨噬細(xì)胞集落刺激因子）；r-SK（重組鏈激酶）；r-SAK（重組葡激酶）；GH（生長(zhǎng)激素）；EGF（表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子）；bFGF（堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子）；rhTPO（重組人血小板生成素）；t-PA（組織纖溶酶激活劑）；SRM（生長(zhǎng)激素釋放克制素）。4.簡(jiǎn)述微生物發(fā)酵制藥的基本流程。答：微生物發(fā)酵制藥基本流程：菌種選育（自然界選種、誘變育種、基因工程、細(xì)胞工程）培養(yǎng)基配制（根據(jù)培養(yǎng)基的配制原則制備，實(shí)踐中需多次實(shí)驗(yàn)配方）滅菌（殺滅雜菌（胞體、孢子及芽孢）擴(kuò)大培養(yǎng)和接種發(fā)酵過(guò)程（檢測(cè)進(jìn)程，滿(mǎn)足營(yíng)養(yǎng)需要；嚴(yán)格控制溫度、pH、溶氧、轉(zhuǎn)速等）分離純化（菌體：過(guò)濾、沉淀；代謝產(chǎn)物：蒸餾、萃取、離子交換）簡(jiǎn)述基因工程操作流程答：基因工程的操作流程：（1）分：分離目的基因；（2）切：對(duì)目的基因和載體適宜切割；（3）接：目的基因與載體連接；（4）轉(zhuǎn)：重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞；（5）篩：篩選出含有重組體的受體細(xì)胞；（6）表：目的基因在受體細(xì)胞中體現(xiàn)，受體細(xì)胞成長(zhǎng)為基因改造生物。6.簡(jiǎn)述化學(xué)修飾藥用酶的新特性。答：藥用酶修飾后所含有的新特性：（1）對(duì)熱的穩(wěn)定性有所提高。（2）含有對(duì)抗各類(lèi)失活因子的能力。（3）抗原性消除。（4）體內(nèi)的半衰期有所延長(zhǎng)。（5）最適PH值發(fā)生變化。（6）酶反映特性發(fā)生變化。（7）在人體組織中的分布能力發(fā)生變化，有助于被靶器官選擇性的吸取。7.簡(jiǎn)述固定化酶生產(chǎn)藥品的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。答：固定化酶生產(chǎn)藥品的優(yōu)點(diǎn)：（1）能夠多次使用，酶的穩(wěn)定性提高；（2）反映后，酶與底物和產(chǎn)物易于分開(kāi)，產(chǎn)物中無(wú)殘留酶，易于純化；（3）反映條件易于控制，可實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化反映的持續(xù)化和自動(dòng)控制；（4）酶的運(yùn)用率高，單位酶催化的底物量增加，用酶量少。缺點(diǎn)：（1）固定化過(guò)程中，可能會(huì)引發(fā)酶活性喪失；（2）只合用于催化可溶性小分子底物的酶促反映，對(duì)大分子底物不適合；（3）普通不合用于多酶反映，特別是需要輔助因子參加的反映。8.簡(jiǎn)述單克隆抗體制備的過(guò)程。答：?jiǎn)慰寺】贵w的制備：用抗原免疫小鼠骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)免疫脾細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞在PEG作用下合成雜交瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基（融合的細(xì)胞死亡，雜交瘤細(xì)胞存活）陽(yáng)性克隆的篩選機(jī)克隆化克隆擴(kuò)增及大量制備McAb簡(jiǎn)述轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)藥品的優(yōu)缺點(diǎn)。答：優(yōu)點(diǎn)：（1）價(jià)格便宜，易形成產(chǎn)業(yè)化規(guī)模；（2）安全，使用方便；（3）植物含有完整的真核細(xì)胞體現(xiàn)系統(tǒng)。缺點(diǎn)：體現(xiàn)量偏低；（2）免疫效果較差；（3）糖基化不可靠性、生物安全性和公眾接受性以及工業(yè)化技術(shù)問(wèn)題；（4）現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因植物普遍存在基因沉默或不穩(wěn)定體現(xiàn)的現(xiàn)象。簡(jiǎn)述動(dòng)物乳腺生物反映器優(yōu)點(diǎn)及制作過(guò)程。答：哺乳動(dòng)物乳腺反映器優(yōu)點(diǎn)：（1）通過(guò)乳汁獲得藥品，能夠獲得較高的產(chǎn)量，同時(shí)也容易提純。（2）乳腺是一種外分泌器官，乳汁不會(huì)參加體內(nèi)循環(huán)，也不會(huì)影響轉(zhuǎn)基因動(dòng)物本身的生理代謝過(guò)程。（3）乳汁所體現(xiàn)的蛋白質(zhì)通過(guò)修飾加工之后，含有穩(wěn)定的生物活性。（4）對(duì)于牛、羊這些大量分泌乳汁的動(dòng)物來(lái)說(shuō)，動(dòng)物本身就相稱(chēng)于一座大型的藥品工廠(chǎng)。動(dòng)物乳腺反映器制作：藥用蛋白基因體現(xiàn)細(xì)胞株細(xì)胞核供體動(dòng)物受精卵無(wú)核受精卵組裝的核細(xì)胞胚胎藥用蛋白乳汁雌性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物動(dòng)物幼崽假孕動(dòng)物受體動(dòng)物三、設(shè)計(jì)題請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一種基因工程藥品的生產(chǎn)工藝流程（應(yīng)涉及工程菌構(gòu)建、擴(kuò)大培養(yǎng)辦法、產(chǎn)物分離純化、質(zhì)量檢測(cè)等環(huán)節(jié)）。答：干擾素a-2b的制備干擾素（INF）是人體細(xì)胞分泌的一種活性蛋白質(zhì)，含有廣泛的抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等等作用,是人體防御系統(tǒng)的重要構(gòu)成部分,干擾素（INF）最早被用于誘導(dǎo)人體產(chǎn)生白細(xì)胞?；蚬こ叹慕M建誘生的白細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞提取核酸↓通過(guò)寡dT-纖維素柱提取mRNApBR322質(zhì)?！?%-23%蔗糖密度梯度離心提取12S-mRNAPstI內(nèi)切酶切割↓↓由mRNA轉(zhuǎn)錄成cDNA切割段位于β內(nèi)酰胺基酶基因內(nèi)↓成果造成內(nèi)酰胺基酶失活，不抗青霉素雙鏈cDNA用末端PstI酶切割↓ 再用DNA轉(zhuǎn)移酶接上dT或者dG在pBR322質(zhì)粒DNA的切割段加上dA或者dC++++++++++++++++退火獲得雜交質(zhì)粒

↓

轉(zhuǎn)化大腸桿菌K-12擴(kuò)增雜交質(zhì)粒

↓篩選能夠抗四環(huán)素、但是對(duì)氨芐青霉素敏感的細(xì)菌克隆株↓采用雜交翻譯法挑選含有干擾素cDNA的克隆

↓

將干擾素cDNA克隆進(jìn)體現(xiàn)載體

↓

在大腸桿菌中進(jìn)行高效體現(xiàn)↓（進(jìn)入下游工藝）基因工程菌的發(fā)酵生產(chǎn)人干擾素a-2b的基因工程菌為SW-IFNa-2b/E.coli—DH5a。

質(zhì)粒使用PL啟動(dòng)子，含有四環(huán)素抗性基因。

種子培養(yǎng)液含1%蛋白胨、0.5%酵母提取物、0.5%NaCl↓

基因工程菌接種到4個(gè)1000ml三角燒瓶之中，每個(gè)燒瓶?jī)?nèi)裝有250ml種子培養(yǎng)基，30℃搖床培養(yǎng)10小時(shí)，作為發(fā)酵罐的種子↓

用15L發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵，裝發(fā)酵培養(yǎng)基10L

↓

攪拌轉(zhuǎn)速500r/min、通氣量為1：1v/v*min、溶氧量為50%

30℃發(fā)酵8小時(shí)，42℃誘導(dǎo)2-3小時(shí)↓

鑒控手段：每隔不同時(shí)間，取2毫升發(fā)酵液，10000r/min離心除去上清液，稱(chēng)量菌體濕重。干擾素的制備發(fā)酵物質(zhì)4000r/min離心30min，除去上清液，得濕菌，從其中取100g。懸浮于20mmol/L磷酸緩沖液（PH=7.0）500ml之中，冰浴條件下進(jìn)行超聲破碎。

↓

4000r/min離心30min，除去上清液。沉淀部分用100ml提取液在室溫條件下，進(jìn)行攪拌抽提2小時(shí)↓

提取液15000r/min離心30min，下層不溶棄去。取上清液，用20mmol/L磷酸緩沖液（PH=7.0）稀釋至尿素濃度0.5mol/L

↓

加入0.1mmol/L二巰基蘇糖醇，4℃攪拌15小時(shí)。15000r/min離心30min，除去不溶物。上清液用截流量=10000相對(duì)分子質(zhì)量的中空纖維超濾器濃縮

↓

濃縮液采用SephadexG50層析柱分離，層析柱2cm*100cm、先用20mmol/L磷酸緩沖液（PH=7.0）平衡固定相，上柱之后，用同一緩沖液洗脫分離

↓

收集人干擾素a-2b部分，用SDS檢查。再經(jīng)DE-52柱進(jìn)行純化

層析柱2cm*50cm、上柱之后，分別采用含有0.05mol/L、0.10mol/L、0.15mol/L的NaCl的20mmol/L磷酸緩沖液（PH=7.0）洗滌。

↓

收集含有收集人干擾素a-2b部分。分裝→凍干→成品鑒定→成品包裝。質(zhì)量控制原則和具體規(guī)定半成品檢定--13項(xiàng)指標(biāo)干擾素效價(jià)測(cè)定；2、蛋白質(zhì)含量測(cè)定；3、比活性測(cè)定；4、純度測(cè)定；5、相對(duì)分子量測(cè)定；6、殘存外源性DNA含量測(cè)定；7、殘存抗生素活性測(cè)定；8、紫外光譜掃描；9、肽圖測(cè)定；10、等電點(diǎn)測(cè)定；11、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)；12、熱原質(zhì)實(shí)驗(yàn)。（2）成品檢定--7項(xiàng)指標(biāo)1、物理性狀；2、鑒別實(shí)驗(yàn)；3、水分測(cè)定；4、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)；5、熱原質(zhì)實(shí)驗(yàn)；6、干擾素效價(jià)測(cè)定；7、安全實(shí)驗(yàn)。四、敘述題查閱資料，結(jié)合你的專(zhuān)業(yè)和愛(ài)好，請(qǐng)談?wù)勀撤N生物藥品生產(chǎn)工藝國(guó)內(nèi)外發(fā)呈現(xiàn)狀，你認(rèn)為存在哪些技術(shù)問(wèn)題，請(qǐng)?zhí)峁?duì)應(yīng)的解決方案。答：青霉素的生產(chǎn)工藝國(guó)內(nèi)外發(fā)呈現(xiàn)狀：青霉素屬于β-內(nèi)酯類(lèi)抗生素,能破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁，可從