人類常見腫瘤新鮮組織標(biāo)本采集

實用文檔《人類常見腫瘤新鮮組織標(biāo)本采集、處理和保存的技術(shù)規(guī)程》為保護、保存并充分利用人類腫瘤遺傳資源，提高我國腫瘤防治水平，特制定本規(guī)程。本規(guī)程嚴格遵守1998年由國務(wù)院頒布的《人類遺傳資源管理暫行辦法》并以此為基準(zhǔn)。人類常見腫瘤新鮮組織標(biāo)本的采集包括收集來自肺、食管、大腸、乳腺、肝、胃、甲狀腺、腎等臟器腫瘤患者的標(biāo)本，包括其血液或血液成分、各種體液如尿液、痰液或精液等標(biāo)本的采集。（注：血液標(biāo)本的收集附后）全部標(biāo)本貯存于人類常見腫瘤新鮮組織庫（簡稱“組織庫”），該組織庫必需由專人長期負責(zé)。組織庫至少設(shè)立主任一名，負責(zé)組織庫的管理、協(xié)調(diào)及組織標(biāo)本的使用權(quán)限等事務(wù)。其他至少需要固定取材人員一名、信息登記人員一名，材料準(zhǔn)備人員一名。人類常見腫瘤新鮮組織標(biāo)本的取材前準(zhǔn)備工作：所有組織標(biāo)本的取材均需事先向患者及/或家屬詳細解釋，征得患者及/或家屬的同意后簽署《知情同意書》。標(biāo)本采集一般在手術(shù)室、腔鏡室進行，必需得到相關(guān)管理人員的許可，同時爭取得到相關(guān)人員的積極配合以保證標(biāo)本的及時獲得。人類常見腫瘤采集步驟準(zhǔn)備工作：主要設(shè)備包括剪刀2把、鑷子2把、刀片若干、生理鹽水、不同顏色的凍存管、臨時登記本、標(biāo)記筆、標(biāo)簽紙、液氮及便攜式標(biāo)本貯藏罐；-86℃深低溫冰柜；高溫高壓消毒滅菌手術(shù)器械與貯藏管；電動組織勻漿器；低溫高速離心機；紫外分光光度計；制冰機；Trizol試劑盒。標(biāo)本選擇：選取的標(biāo)本包括腫瘤組織、正常組織和(或)癌旁組織。標(biāo)本切取的方法與時機：首先進行大體標(biāo)本的觀察或拍照，確認腫瘤的部位、范圍，注意與周圍組織及壞死組織的鑒別，在標(biāo)本離體后應(yīng)在最短的時間內(nèi)切取標(biāo)本(<30min)，將癌及癌旁組織切取成多塊直徑為0.5cm左右的組織塊，分別裝入已編號的滅菌凍存管中，迅速放入液氮轉(zhuǎn)移罐并做好長期保存準(zhǔn)備。人類常見腫瘤標(biāo)本的保存方法： 盡快將液氮轉(zhuǎn)移罐中的標(biāo)本轉(zhuǎn)移入標(biāo)本盒中，標(biāo)本盒每裝滿一盒，即在盒上注明其內(nèi)存放標(biāo)本的開始與結(jié)束編號。標(biāo)本盒長期存放在-86℃深低溫冰箱中保存。標(biāo)本相關(guān)資料的登記：標(biāo)本存放好后，及時進行標(biāo)本相關(guān)資料的登記工作，標(biāo)本相關(guān)資料的登記內(nèi)容包括標(biāo)本編號、姓名、住院號、腫瘤類型、取材數(shù)量（分別用T和N代表腫瘤及正常，T及N后面的數(shù)字表示取材份數(shù)，如T3代表腫瘤標(biāo)本3份，N2代表遠癌正常標(biāo)本2份）、離體時間(分鐘)、組織質(zhì)量（A＝無明顯壞死、B＝散在壞死、鈣化，C＝大量壞死）。示例：編號姓名住院號腫瘤類型取材數(shù)量離體時間組織質(zhì)量353***123456肺癌T4N425minA人類常見腫瘤新鮮組織庫信息化管理平臺的建立：采用統(tǒng)一設(shè)計的信息管理系統(tǒng)應(yīng)用于腫瘤庫的管理，系統(tǒng)運行平臺為WindowsXP，數(shù)據(jù)庫為EXEL或ACCESS2003。系統(tǒng)功能內(nèi)容包括：患者基本信息：姓名、性別、年齡、職業(yè)、隨訪聯(lián)系方式、住院號、既往史、手術(shù)史、有無放化療、手術(shù)日期、手術(shù)名稱、手術(shù)性質(zhì)、切除部位、病理診斷（包括分化程度及組織學(xué)類型）、TNM分期、手術(shù)并發(fā)癥、有無手術(shù)死亡、最后一次隨訪時間、生存時間、死亡時間、死亡原因及其它。如下圖所示。標(biāo)本信息錄入：包括入庫編號、入庫類別、病變部位、組織部位、保存方式、收集人、入庫時間、離體時間、標(biāo)本質(zhì)量。標(biāo)本存放位置信息：入庫編號、存放設(shè)備、標(biāo)本盒規(guī)格、標(biāo)本數(shù)量、計量單位、存放位置坐標(biāo)等。標(biāo)本使用管理：使用登記：出庫編號、出庫日期、入庫編號、標(biāo)本原始位置、使用單位、使用人、審批單位、審批人、經(jīng)手人等；實驗信息錄入：入庫編號、實驗號、實驗內(nèi)容、實驗結(jié)果、實驗單位、實驗人、實驗日期等。標(biāo)本廢除管理：廢除編號、人庫編號、標(biāo)本原始位置、廢除日期、廢除原因、審批人等。系統(tǒng)管理：包括用戶管理、術(shù)語維護、標(biāo)本盒管理等。標(biāo)本的收集、保存、使用實行專人管理。管理人員嚴格按照腫瘤庫制定的標(biāo)本出入庫及保存質(zhì)量進行標(biāo)準(zhǔn)化管理。定期檢查液氮、冰箱的工作狀態(tài)及性能。發(fā)現(xiàn)問題及時處理。標(biāo)本使用需申請，經(jīng)組織庫負責(zé)人審批后方可使用。隨機取庫存標(biāo)本作光鏡檢查、抽提核酸，了解保存質(zhì)量。組織標(biāo)本的質(zhì)量鑒定 16.1病理組織學(xué)鑒定：利用常規(guī)病理學(xué)檢測方法進行病理組織學(xué)鑒定。 16.2組織總RNA鑒定：參照Trizol試劑盒操作指南進行組織總RNA的提取，紫外分光光度計測定經(jīng)稀釋的RNA提取物的A值，并根據(jù)測定時RNA提取物稀釋比例換算提取物濃度，計算方法為測定濃度×稀釋倍數(shù)或A260測定值×稀釋倍數(shù)×40ug／ml，判斷RNA純度標(biāo)準(zhǔn)為A260／A280，大于1.6；l％瓊脂糖凝膠電泳檢查RNA提取物的完整性，即應(yīng)顯示明顯的28s和18s條帶，而且28s的亮度大約是l8s的2倍。附：常見腫瘤患者血液樣本收集和管理1．樣本收集腫瘤患者入院后，于手術(shù)前1日手術(shù)配血時同時抽取5ml空腹靜脈血，置與EDTAK3抗凝管中，當(dāng)日上午由組織庫專門人員收集，并進行白細胞及血漿分離處理。要求白細胞樣品在取血樣120min內(nèi)完成分離，分離的血漿在液氮中速凍后-86?C冷凍保存。2.材料2.1專用取血管 2.2淋巴細胞分離液 2.3滅菌生理鹽水（普通0.9%生理鹽水滅菌即可） 2.4Trizol試劑3. 流程（以4ml血為例）將4ml抗凝血，以3,500轉(zhuǎn)/分，室溫，離心10分鐘。將會看到血液分為2層，上層是淡黃色的血漿，約占60％↓將上層血漿吸出，分裝成兩管，1ml/管↓液氮中速凍30min后，-80?C冷凍保存↓還剩約2ml血細胞層，在血細胞層中加入1：1體積，即約2ml的滅菌生理鹽水，混勻↓將8ml淋巴細胞分離液（是全血體積的2倍）預(yù)先加入滅菌的離心管中。將與生理鹽水混合的血細胞緩慢加入淋巴細胞分離液液面上，注意盡量不要讓血細胞層摻入到淋巴細胞分離液層去↓以1500轉(zhuǎn)/分，室溫，離心20分鐘(離心機要求水平轉(zhuǎn)頭)↓可以看到液體分為三層，上層是淡黃色的血漿，中間一層乳白色，最下面一層是紅色的血細胞。在中間層和上層交界處是有一層白色的膜，即白細胞層，（同時在明顯的白細胞層下面有較厚的乳白層液體，此層液體中也含有白細胞，但量較少，若血液足夠，可以考慮不要此層，若白細胞層不很明顯而乳白色液體層太厚，可以2500轉(zhuǎn)/分，繼續(xù)離心10分鐘以加強白細胞的分離效果）↓用巴士滴管或移液器收集界面上的白細胞層↓放入滅菌的1.5mlEP離心管中↓以10,000轉(zhuǎn)/分，室溫，離心5分鐘，吸掉上清，可見白色的沉淀，有時白色的沉淀上還混有紅色的血細胞（少量紅細胞無妨）↓-86?C冰箱保存。那是心與心的交匯，是相視的莞爾一笑，是一杯飲了半盞的酒，沉香在喉，甜潤在心。我無所謂成功不成功，但我在乎我自己的成長；我無法掌握別人，但我可以掌握自己。我唯一能把握的，是我會一直盡力走下去，不為了別人，為了給自己一個交代。這個世界上有太多的事情是我們無法掌握的，你不知道誰明天會離開，你不知道意外和你等的人誰先到來。最可怕的是因為怕失去而放棄擁有的權(quán)利。我們都會遇到很多人，會告別很多人，會繼續(xù)往前走，也許還會愛上那么幾個人，弄丟那么幾個人。關(guān)鍵在于，誰愿意為你停下腳步？對于生命中每一個這樣的人，一千一萬個感激。有一些人、一些事是不需要理由的：比如天空的顏色；比如連你自己都不知道為什么會喜歡上的那個人；比如昨天擦肩而過的人變成了你今天的知己。夢想這東西，最美妙的在于你可以制造它，重溫它。看一本書，聽一首歌，去一個地方，夢想就能重新發(fā)芽，那個在你體內(nèi)扎根的與生俱來的夢想。我們唯一能把握的事情是，成為最好的自己，我們可以不成功，但是我們不能不成長，沒有什么比背叛自己更可怕。你唯一能把握的，是變成最好的自