超聲波提取法制備翻白草全草工藝研究

超聲波提取法制備翻白草全草工藝研究

換句話(huà)說(shuō)，反向白草是薔薇科植物，主要分布在北半球的溫帶和冷帶，以及一些分布在北半球的植物。在中國(guó)有88種,其中24種為中國(guó)特有,主產(chǎn)于山東、遼寧、安徽、河北、河南、內(nèi)蒙古、湖北、江蘇、廣西、福建等地。翻白草味苦性平,應(yīng)用歷史悠久,多種醫(yī)藥典籍中均有記載。由于翻白草的提取物具有特殊藥理學(xué)活性,人們對(duì)翻白草的化學(xué)成分開(kāi)展了大量的研究,其主要化學(xué)成分有:萜類(lèi)、甾體、黃酮類(lèi)和多酚類(lèi)等。翻白草的降血糖等活性多與黃酮類(lèi)化合物有關(guān),民間多用翻白草的水提液即水煎液治療糖尿病,國(guó)內(nèi)外的大部分研究都是以水為溶劑,對(duì)翻白草進(jìn)行提取。本實(shí)驗(yàn)用70%乙醇對(duì)翻白草全草粉末進(jìn)行超聲波環(huán)流提取,得到粗提液,以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三種不同有機(jī)溶劑依次對(duì)翻白草粗提液進(jìn)行萃取,為翻白草藥效實(shí)驗(yàn)提供材料和參考數(shù)據(jù)。1材料和方法1.1樣品的提取和測(cè)試翻白草樣品2004年10月采自湖南省溆浦縣西南山坡地,采集后移栽至懷化學(xué)院生物園種植,2006年7月取鮮樣;石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇均為國(guó)產(chǎn)分析純。TXNW-10B超聲波循環(huán)提取機(jī)北京弘祥生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海亞榮生化儀器廠(chǎng);微波真空干燥箱貴州新奇微波工業(yè)有限責(zé)任公司;UV-752紫外分光光度計(jì)上海光譜儀器有限公司。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1超聲波提取法稱(chēng)取翻白草全草適量,50～60℃干燥8h,粉碎,稱(chēng)取300g放入超聲波環(huán)流提取機(jī),加入3L70%的乙醇,要確保超聲波變幅桿末端潛入液面的深度大于30mm。設(shè)置超聲波功率、時(shí)間、工作間隙,40℃超聲波循環(huán)提取40min,工作頻率40kHz。將乙醇提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀35℃減壓濃縮到較小體積,再放入真空干燥箱干燥,直至得到浸膏。1.2.2殘液萃取后的萃取用適量30℃去離子水回收浸膏,將溶液轉(zhuǎn)移至500mL分液漏斗,首先用石油醚萃取,將萃取液裝入2L的廣口瓶,標(biāo)號(hào)1。萃取后的上層殘液再以乙酸乙酯萃取,萃取液裝入2L的廣口瓶,標(biāo)號(hào)2。萃取后的上層殘液再以正丁醇萃取,萃取液裝入2L廣口瓶,標(biāo)號(hào)3。將不同溶劑的萃取液分別合并,將萃取完的最后殘液裝入2L廣口瓶,標(biāo)號(hào)4。萃取過(guò)程中,兩液層由于乳化而形成界面不清時(shí),可將分液漏斗在水平方向上緩慢地旋轉(zhuǎn)搖動(dòng),消除界面處的“泡沫”,促進(jìn)分層。1.2.3制備白草乙酸乙酯及正丁醇萃取液將翻白草石油醚萃取液分批裝入圓底燒瓶,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮,溫度60℃,直至冷凝管中不再有溶劑下流,回收石油醚;將翻白草乙酸乙酯萃取液分批裝入圓底燒瓶,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,溫度75℃,直至冷凝管中不再有溶劑下流,回收乙酸乙酯;將翻白草正丁醇萃取液分批裝入圓底燒瓶,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,溫度80℃,直至冷凝管中不再有溶劑下流,回收正丁醇;將殘留液分批裝入圓底燒瓶,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,溫度80℃,直至冷凝管中不再有溶劑下流。將以上3種濃縮物在70～80℃烘箱中烘干稱(chēng)重。1.2.4黃酮總含量的測(cè)定1.2.4.標(biāo)準(zhǔn)品貯備液稱(chēng)取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品10mg,置于50mL的容量瓶中,加95%的乙醇30mL,置于水浴上微熱使溶解,放冷,加乙醇稀釋至刻度,搖勻,使之成為濃度為0.2mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液,作為貯備液備用。精密量取已制備的對(duì)照品溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL,分別置于10mL帶塞試管中,加1.0mL亞硝酸鈉(1∶20)溶液,混勻,放置6min,加0.5mL硝酸鋁(1∶10)溶液,混勻,放置6min,加1mol/L的氫氧化鈉4mL,再加水至刻度,搖勻,放置15min,用分光光度法在λ=500nm處測(cè)定吸光度,用最小二乘法作線(xiàn)性回歸得蘆丁濃度(Y)與吸光度(X)的關(guān)系曲線(xiàn)的回歸方程式:Y=0.8577X-0.0005,R2=0.9992.1.2.4.總黃酮含量的測(cè)定每種萃取產(chǎn)物精密量取1g樣品,加超純水5mL,裝入25mL的容量瓶,加5%亞硝酸鈉1mL,混勻,放置6min,加5%的硝酸鋁1mL,混勻,放置6min,加1mol/L的氫氧化鈉10mL,再加水至刻度,搖勻,放置15min,用分光光度法在λ=510nm處測(cè)定吸光度,根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮含量。2結(jié)果與分析采用三種不同溶劑對(duì)翻白草粗提液進(jìn)行萃取,得到的萃取產(chǎn)物測(cè)定見(jiàn)表1,產(chǎn)物總黃酮含量的測(cè)定見(jiàn)表2。3提取溶劑的篩選萃取溶劑應(yīng)具備如下一些條件:選擇性強(qiáng),使原組分間的相對(duì)揮發(fā)度能顯著增大,溶解度、沸點(diǎn)適當(dāng);除以上條件外,還應(yīng)滿(mǎn)足其它一些條件,如熱穩(wěn)定、不易燃易爆、來(lái)源方便、價(jià)格低廉等。石油醚、乙酸乙酯、正丁醇是天然產(chǎn)物提取研究中常用的三種有機(jī)溶劑,它們不(微)溶于水,可用做萃取劑。本實(shí)驗(yàn)選取這三種溶劑作為萃取溶劑。在萃取過(guò)程中按照石油醚、乙酸乙酯、正丁醇的順序是由這三種溶劑的極性所決定的,從石油醚到正丁醇極性逐漸減小,可以分別萃取出翻白草粗提液中極性不同的成分。石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三種有機(jī)溶劑都具有一定的毒性。在用于藥用成分提取時(shí),若在產(chǎn)物中有萃取溶劑殘留將直接對(duì)受試動(dòng)物產(chǎn)生毒害作用,因此在提取藥用成分時(shí),必須考慮溶劑在產(chǎn)物中的殘留問(wèn)題。石油醚的沸點(diǎn)為40～80℃,性質(zhì)穩(wěn)定;乙酸乙酯沸點(diǎn)為77.2℃,易揮發(fā);正丁醇沸點(diǎn)為117.7℃,難揮發(fā)。減壓濃縮過(guò)程中正丁醇萃取液耗時(shí)最長(zhǎng),乙酸乙酯萃取液耗時(shí)最短,石油醚萃取液居中。綜合考慮以上三種溶劑的毒性大小以及揮發(fā)的難易程度,選取乙酸乙酯做為萃取劑,但乙酸乙酯在循環(huán)使用中可水解產(chǎn)生乙酸,會(huì)影響到產(chǎn)品的得率和質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,乙酸乙酯萃取物的總黃酮含量較石油醚、正丁醇萃取物的總黃酮含量高。黃酮類(lèi)成分都有一定程度的消除超氧陰離子O-2·等自由基的作用,這種抗氧化能力來(lái)自于其酚性羥基等供氫或供電子