薏苡仁中甘油三油酸酯的含量測(cè)定

薏苡仁中甘油三油酸酯的含量測(cè)定

椰子仁是中國的藥店2000年版的一部分，具有健脾除濕、除關(guān)節(jié)疼痛、清熱排膿的功效?，F(xiàn)代藥理研究表明,薏苡仁中的薏苡仁油具有抗腫瘤的作用,其抗腫瘤的活性成分為甘油三酯類組分,其中有甘油三油酸酯,甘油三亞油酸酯,1,2-油酸-3-亞油酸-甘油三酯,1,2-亞油酸-3-油酸-甘油三酯等,中國藥典2000年版一部中未收載薏苡仁的含量測(cè)定方法,而且目前沒有關(guān)于薏苡仁中活性成分含量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道。為更好地控制藥材的質(zhì)量,本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了甘油三酯類組分中的甘油三油酸酯用于控制本品的質(zhì)量。方法提取簡單,重復(fù)性好,可作為薏苡仁藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)。1蒸發(fā)光散射分離器Agilent1100系列液相色譜儀(美國安捷倫公司),AlltechELSD-2000型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(美國奧泰公司)。乙腈、二氯甲烷均為色譜純。甘油三油酸酯對(duì)照品(Fluka公司,批號(hào)2045347,標(biāo)示純度99.0%以上)。10批薏苡仁均為市售品(表2)。2方法和結(jié)果2.1高效液相色譜法的確定因本品主要成分為甘油三酯,其極性較小,而分子量較大,如采用氣相色譜分離,則需經(jīng)皂化及甲脂化后才能實(shí)現(xiàn),為能檢測(cè)樣品中所含實(shí)際成分的量,故選用常用的,分離效果好的高效液相色譜法。因甘油三酯在紫外區(qū)基本無吸收,曾采用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)(用203nm作為檢測(cè)波長),結(jié)果因響應(yīng)值太小,基線噪音大,故未采用,后改為通用型檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果較為理想。2.2乙腈-二氯甲烷法色譜柱為Discovery●C18(250mm×4.6mm,5μm),流動(dòng)相為乙腈-二氯甲烷(59∶41),流速為0.5mL·min-1,柱溫為25℃;ELSD參數(shù):漂移管溫度70℃,氮?dú)饬魉?.2L·min-1。2.3對(duì)照溶液的制備精密稱取甘油三油酸酯對(duì)照品適量,加流動(dòng)相制成每1mL含0.14mg的溶液,即得。2.4流動(dòng)相與續(xù)濾劑的制備取本品粉末(過三號(hào)篩)0.6g,精密稱定,精密加入流動(dòng)相50mL,稱定重量,浸泡2h,超聲處理30min,取出,放冷,稱重,用流動(dòng)相補(bǔ)足損失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液,即得。2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立在上述條件色譜下,精密量取甘油三油酸酯對(duì)照品溶液(0.1378mg/mL)2,3,5,7,10,15,20,25μL注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,以進(jìn)樣量(μg)的對(duì)數(shù)(X)為橫坐標(biāo),峰面積的對(duì)數(shù)(Y)為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線,并以最小二乘法計(jì)算得回歸方程:Y=1.6278X+3.4128,r=0.9989,結(jié)果顯示進(jìn)樣量在0.276～3.446μg內(nèi)有良好的線性關(guān)系。2.6精密度測(cè)試取同一供試品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積積分值,其平均值為2778.03,RSD為0.9%。2.7重復(fù)試驗(yàn)取供試品溶液6份,按樣品含量測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定,其平均含量為7.8647mg·g-1,RSD為0.7%。2.8方法的線性范圍、方法取同一份供試品溶液,在制備后每隔一定時(shí)間按上述色譜條件進(jìn)樣分析,測(cè)定其峰面積積分值,結(jié)果本品在室溫下放置41h內(nèi)基本穩(wěn)定,其RSD為1.2%(n=6)。2.9加樣回收及標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備精密稱取已知含量樣品9份,精密加入甘油三油酸酯對(duì)照品適量,按供試品溶液的制備法制備,測(cè)定峰面積并計(jì)算含量,平均回收率為101.83%,RSD=1.1%,見表1。2.10樣品的質(zhì)量分析按上述方法測(cè)定不同來源的薏苡仁藥材共10批樣品,結(jié)果見表2。3色譜柱的選擇3.1分離模式及流動(dòng)相的選擇曾采用硅膠柱,用正相色譜模式進(jìn)行分離,當(dāng)使用極性已很小的正己烷、正己烷-異丙醇(95∶5)洗脫時(shí),所需測(cè)定成分出峰仍很快,不能得到很好分離,故未采用,經(jīng)查閱有關(guān)文獻(xiàn),分離甘油三酯類成分現(xiàn)常采用非水反相色譜模式,經(jīng)比較幾種文獻(xiàn)報(bào)道分離效果較好的流動(dòng)相系統(tǒng)(乙腈-四氫呋喃;丙酮-乙腈;乙腈-二氯甲烷等)后,以乙腈-二氯甲烷系統(tǒng)分離效果最好。3.2不同色譜柱的比較比較了C18,C8,苯基柱等,結(jié)果以C18的分離效果最好,又比較了4種不同填料的C18色譜柱,結(jié)果均能得到較好的分離,本實(shí)驗(yàn)中選用Discovery●C18色譜柱。3.3實(shí)驗(yàn)中比較了丙酮、正己烷、石油醚(60～90℃)和流動(dòng)相提取對(duì)本品指紋譜的影響,并