園林植物育種學(xué)-一二年生花卉育種

一二年生花卉育種BreedingofAnnuals&Biennials本章學(xué)習(xí)內(nèi)容概述一、二年生花卉的應(yīng)用特點(diǎn)與要求一、二年生花卉的育種特色一、二年生花卉育種的現(xiàn)狀與發(fā)展前景矮牽牛（Petuniahybrida）育種三色堇（Violatricolor）育種第一節(jié)一二年生花卉育種概述主要用于花壇株型低矮開花整齊一致、花色艷麗豐富、花量大抗性強(qiáng)、耐粗放管理切花、盆栽、地被、花境、花臺等一二年生花卉的應(yīng)用特點(diǎn)與要求第一節(jié)一二年生花卉育種概述幼年期與生活周期短一般采用種子繁殖育種周期相對較短雜種優(yōu)勢利用為主一二年生花卉的育種特色第一節(jié)一二年生花卉育種概述國外發(fā)展早而快、育種水平高美國PanAmerican、Goldsmith、Bodger,德國Benary，日本Sakata、Takii、Murakami,荷蘭SG、Kieft,英國Floranova等國內(nèi)起步晚、相對落后我國草花種子基本依賴進(jìn)口市場潛力大、效益可觀2011年浙江虹越進(jìn)口花種價格表一二年生花卉育種的現(xiàn)狀與發(fā)展前景PanAmericanSeeds（簡稱PAs）

泛美種子公司/是美國最大、最著名的種子公司之一。在全美乃至世界園藝界都享有極高聲譽(yù)。最具權(quán)威性的全美選種組織（AAS）自本世紀(jì)30年代開始至今，共推薦了61類（植物品種）、324個（商業(yè)）品種的種子，其中，PAS就占20多類、100多個品種，占全部獲獎（商業(yè)）品種的1／3強(qiáng)。特別是在矮牽牛、金魚草兩大種類上，獲獎之多更是令人刮目相看。有人開玩笑說AAs幾成PAs，似乎并不為過。泛美的成長歷程

--豐富的良種來源

五十年代初，由于二次大戰(zhàn)中斷了供應(yīng)，美國市場上這種矮牽牛極為緊俏。查利在科羅拉多培育矮牽牛品種；克勞德?霍普在哥斯達(dá)黎加生產(chǎn)矮牽牛良種供應(yīng)美國本土的市場需求。經(jīng)過努力，1946年首批矮牽牛種子問世。公司一躍成為具有相當(dāng)實(shí)力的育種公司。

在這時喬治?波爾公司開始銷售代理查利和克勞德的新重瓣矮牽牛以及后來受人歡迎的F1代單瓣矮牽牛。

其后1962年兩個公司決定正式合并，泛美種子公司誕生。專業(yè)技術(shù)人員開始調(diào)動調(diào)整，開發(fā)力量得到了加強(qiáng)。以此為

契機(jī)，公司步入了它的“黃金時代“。F1代速生金魚草、彩虹錦紫蘇、F1代鳳仙、F1代雜交矮牽午等品種相繼問世，受到了廣大用戶的肯定和贊譽(yù)。泛美的成長歷程

--氣候條件優(yōu)異的生產(chǎn)基地和多元化的經(jīng)營策略1968年，遷至佛羅里達(dá)州靠近布萊登頓的灣岸。此地位就是人們常說的"陽光地帶"，適于培育矮牽牛、馬鞭草、觀賞辣椒、金魚草，F(xiàn)1代雜種秋海棠。泛美公司積極推行國際化方針（1）與許多著名種子公司建立了合作關(guān)系。美國著名的飛燕草育種家比爾?羅克為泛美種子公司提供優(yōu)質(zhì)種子（2）從那不勒斯到巴黎，從班加羅爾到加利福尼亞都有許多專業(yè)種子公司為PAS服務(wù)。甚至我國的寶島臺灣也有PAS的生產(chǎn)基地。中國種子公司的成長一方面在引進(jìn)國外的先進(jìn)生產(chǎn)技術(shù)和優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品的基礎(chǔ)上進(jìn)行自主創(chuàng)新及推廣；另一方面對本土資源進(jìn)行開發(fā)利用。以浙江虹越為例一、代理國外草花種子對本土資源進(jìn)行開發(fā)利用虹越已成功選育出上百種中國特色的優(yōu)良觀賞植物品種在華東及更廣泛的地區(qū)推廣，包括鄉(xiāng)土種球、花卉種子、穴盤種苗、地被植物、園林綠化植物、庭院植物、微型盆栽、容器造型苗等。在引進(jìn)國外優(yōu)良品種基礎(chǔ)上，栽培馴化及推廣了黃金錦絡(luò)石、紅葉石楠、花葉女貞、地中海莢蒾、大花六道木、花葉柳等苗木品種。經(jīng)過多年的努力，已成功開發(fā)出本土植物品種濱柃和厚皮香‘火烈鳥’，另外紅楓、玫瑰砧木和睡蓮等植物已成功出口日本、美國及歐洲國家。

一二年花卉育種的進(jìn)展還比較緩慢?。。〉诙?jié)矮牽牛遺傳育種育種資源育種目標(biāo)及其遺傳規(guī)律育種技術(shù)良種繁育簡介Introduction矮牽牛(Petuniahybrida)原產(chǎn)南美，茄科矮牽牛屬。矮牽牛在條件適宜時一年四季都能開花。在美國，種植和消費(fèi)高居草本花卉之首，在日本，矮牽牛也被列為最受歡迎的花卉之一。20世紀(jì)80年代后期，我國沿海地區(qū)分別從美國、日本和荷蘭等國大量引進(jìn)栽培，現(xiàn)在遍布全國各地，作為花壇后起之秀，市場對矮牽牛需求量越來越大。一、育種資源（Geneticresources）1.野生資源矮牽牛屬約有30余種。撞羽矮牽牛（P.violacea）腋花矮牽牛（P.axillaris）膨大矮牽牛（P.integrifolia＝P.inflata）灌木矮牽牛P.exserta：植株高大，灌木狀。膨大矮牽牛（P.integrifolia)x腋花矮牽牛（P.axillaris)

（花小堇紫色，低矮匍匐）（花大白色，粗壯高大）

種間雜種(1840年)

復(fù)瓣品種四倍體大花品種小花極矮化品種重瓣品種F1代雜種

(1849)（1876）(1879)(1925)(1934,Japan)

緋紅色品種(1950年)

撞羽矮牽牛(P.inflata)x400多個品種(1965年)

小花耐雨水品種

目前矮牽牛品種系列豐富多彩矮牽牛的品種起源及演化過程2.品種資源1．依花朵重瓣性分類：

1）單瓣類:大花型(花徑8-12cm)豐花型(花徑6-8cm)多花型(花徑4-6cm)

2）重瓣類

DoubleCascade系列，Duet系列等2．依株型分類：

1）直立型2）垂吊型

Wave系列大花矮牽牛

PETUNIA-GRANDIFLORA虹彩系列(U-IRIS)大花矮牽牛品種，花朵數(shù)量豐富，株型緊湊，花色保持期長，藍(lán)色品種經(jīng)過改良株型更緊湊,本系列各顏色花期整齊一致，盆栽和園林布置表現(xiàn)效果優(yōu)秀。夢幻系列(DREAMS)植株矮小，株型整齊，花大，花徑9～10厘米。生長適溫10～25℃，播種后16～18周開花。耐熱，抗灰霉病，園林效果好?？鋸埾盗?ULTRA)生長適溫10～25℃，播種后14～15周開花，株高30～35厘米，皺邊花，花徑9厘米。中花系列PETUNIA-MULTIFLORA

梅林系列(MERLIN)株高25厘米，株型整齊緊湊，開花一致，花期長，花徑約6厘米。耐風(fēng)雨。海市蜃樓系列(MIRAGE)不僅集花大和花多于一身，而且在種子質(zhì)量、幼苗活力、生長習(xí)性和花期等諸方面，都整齊一致。該品種花色齊全，適應(yīng)性強(qiáng)，分枝多。慶典系列(CELEBRATION)株高25~30厘米，花徑6~7厘米。大花，多花，株型緊湊。開花早，花色豐富，耐濕性強(qiáng)。吊籃矮牽牛PETUNIA-TRAILING美聲系列(OPERASUPREME)

大量的分枝上開滿艷麗的花朵，豐富的花色，以極強(qiáng)的匍匐性適合任何園林布景。也非常適合于吊籃和窗臺花卉裝飾的應(yīng)用。由于美聲系列對日照長度不太敏感，從而決定了其廣泛的適應(yīng)性，在不同緯度地區(qū)進(jìn)行栽培，整體植株表現(xiàn)緊湊而且分枝優(yōu)秀。波浪系列(WAVE)生長適溫10～25℃，播種后9～14周開花，株高15～18厘米，蔓長0.9～1.2米，花徑5～8厘米。適宜懸掛栽培。重瓣矮牽牛PETUNIA-DOUBLE瀑布系列(CASCADE)

與一般的大花重瓣品種相比，株型更緊湊，開花期提前2～4周，而且花朵更大，花徑10～13厘米。DUET系列-大花重瓣

DUO系列二、育種目標(biāo)及其遺傳規(guī)律花色（flowercolor）花徑（flowersize）重瓣性（petalnumber）株型（plantform）抗性（disease

＆stressresistance）類胡蘿卜素Carotenoid類黃酮

Flavonoid花青素Anthocyanidin（花色素苷）植物的花色主要取決于三類色素：各種色素對應(yīng)的花色？1.花色編碼花色素生物合成途徑中關(guān)鍵酶的結(jié)構(gòu)基因控制結(jié)構(gòu)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)基因決定花色素分布的基因影響花色素濃度的基因影響液泡pH值的基因與助色素、金屬離子等有關(guān)的基因影響植物花色的內(nèi)在因素：缺少作用于DHK的DFR酶，故而無天竺葵色素途徑，缺乏橘紅色、磚紅色以及純黃色等品種。不同花色間存在一定的顯隱性關(guān)系一般深色對淺色為顯性趨勢表現(xiàn)出一定的加性效應(yīng)受母性遺傳的影響較大矮牽牛的花色遺傳特點(diǎn)：2.花徑大小屬于數(shù)量性狀，受多基因控制大花F1代自交后代花徑大小發(fā)生分離，且變異是連續(xù)的，F(xiàn)2、F3及F4代大花植株自交后代分離情況基本類似。大花基因?qū)π』ɑ蛴酗@性遺傳趨勢純合大花植株×小花植株，后代為大花。小花性狀與豐花性聯(lián)系一起3.重瓣性矮牽牛的重瓣花由雄蕊和雌蕊瓣化而來，難以結(jié)實(shí)。重瓣基因（有多對基因）相對單瓣基因?yàn)轱@性重瓣性的強(qiáng)弱受環(huán)境的影響較大4.株型植物株型與內(nèi)源激素（如細(xì)胞分裂素、生長素等）的關(guān)系密切依據(jù)用途培育出矮化多分枝、匍匐生長型等品種。垂吊對直立是隱性性狀5.抗性

抗病、抗蟲、抗寒、抗旱、抗熱、耐雨水等三、育種技術(shù)雜交育種（F1品種培育）多倍體育種（結(jié)合雜交育種）生物技術(shù)育種雜交育種—F1品種培育雜交優(yōu)勢育種1933年，日本2010年，英國雜種優(yōu)勢制種的一般程序選育優(yōu)良自交系自交系間配合力測定品種比較試驗(yàn)和區(qū)域試驗(yàn)雜種種子的生產(chǎn)自交系間配組方式的確定一）、選育優(yōu)良自交系

系譜選擇法1．選擇優(yōu)良的品種或雜交種作為自交系的基礎(chǔ)材料2．選擇優(yōu)良單株自交3．逐代系間選擇淘汰一、選育優(yōu)良自交系二）、配合力測定1.概念作為親本雜交后F1表現(xiàn)優(yōu)良與否的能力一般配合力（generalcombiningability,gca）特殊配合力（specificcombiningability,sca）1）gca：指一個自交系在所有雜交組合中雜種表現(xiàn)的平均值

2）sca：指某一特定雜交組合的雜種表現(xiàn)與雙親一般配合力平均數(shù)的差值。

A的一般配合力為:ga＝μa–μ=5.43-5.21=0.22A×G的特殊配合力為（Sij＝Xij–μ-gi-gj）Sag＝5.67?5.21?0.22?（?0.22）＝0.462.配合力分析的意義親本本身的表現(xiàn)預(yù)測F1不準(zhǔn)確gca高、sca低常規(guī)雜交育種gca高、sca高優(yōu)勢育種gca低、sca高優(yōu)勢育種gca低、sca低淘汰3.配合力分析方法粗略分析：測驗(yàn)種×分析材料（頂交法）精確分析：完全雙列雜交（輪配法）正反交＋自交組合n2正交＋自交組合n(n+1)/2正反交組合（全輪配法）n(n-1)正交組合（半輪配法）n(n-1)/2不完全雙列雜交綜合品種G1G2G3G4……

×

GGG1GG2GG3GG4….頂交法示意圖包括自交和正反交，即n個親本配成n2個組合

包括自交和正交，n個親本配成n(n+1)/2個組合

包括正反交，但不包括自交，共有n(n+1)個組合

只包括正交（又叫半輪配法），共有n(n-1)/2個組合輪配法示意圖③三）、自交系間配組方式1.單交種（singlecrosscultivar）2.雙交種（doublecrosscultivar）3.三交種（three-waycrosscultivar）4.綜合品種（syntheticcultivar）1.單交種singlecrosscultivar用兩個自交系雜交配成的雜種一代

優(yōu)點(diǎn)：基因型雜合程度最高，雜種優(yōu)勢強(qiáng)；株間一致性強(qiáng)；制種程序簡單

缺點(diǎn)：種子生產(chǎn)成本高，有時對環(huán)境條件的適應(yīng)力較弱

以繁殖力強(qiáng)、優(yōu)良性狀多、具有苗期隱性性狀者作母本；以花粉量大、花期長者作父本；2.雙交種doublecrosscultivar

由四個自交系先配成兩個單交種，再用兩個單交種雜交配成用于生產(chǎn)的一代雜種

優(yōu)點(diǎn)：降低種子生產(chǎn)成本；適應(yīng)性較強(qiáng)

缺點(diǎn)：制種程序比較復(fù)雜；雜種優(yōu)勢和群體的一致性不如單交種注意交配順序：重要質(zhì)量性狀差異明顯，先選擇質(zhì)量性狀相似的自交系兩兩配對；獲得最高配合力三交種three-waycrosscultivar先用兩個自交系配成單交種，再與另一個自交系雜交得到的一代雜種

三交種適應(yīng)性強(qiáng)，雜種優(yōu)勢較顯著性狀的整齊性不及單交種；種子生產(chǎn)成本較高通常以單交種作母本，以另一自交系作父本4.綜合品種syntheticcultivar多個配合力高的異花授粉或自由授粉植物親本在隔離區(qū)內(nèi)任其自由傳粉所得到的雜種制種簡便；適應(yīng)性強(qiáng)一致性差；生產(chǎn)中表現(xiàn)不穩(wěn)定四）、品種比較試驗(yàn)和生產(chǎn)試驗(yàn)

為了配制出選定組合的雜種種子進(jìn)行品種比較試驗(yàn)生產(chǎn)試驗(yàn)多點(diǎn)試驗(yàn)。綜合觀察各種性狀注意事項(xiàng)：自交時要嚴(yán)格套袋隔離，可人工輔助授粉選育自交系應(yīng)達(dá)到足夠的代數(shù)自交過程中善于發(fā)現(xiàn)優(yōu)良的變異株自交衰退時，加強(qiáng)自交系的栽培管理雜交制種可采用人工去雄法，但應(yīng)嚴(yán)格去雄套袋生物技術(shù)育種花藥培養(yǎng)：快速培養(yǎng)純系體細(xì)胞無性系變異體細(xì)胞雜交基因工程分子標(biāo)記輔助育種體細(xì)胞雜交自20世紀(jì)60年代初酶法分離原生質(zhì)體取得突破后，極大地促進(jìn)了該領(lǐng)域的迅速發(fā)展，成為生物技術(shù)研究中的重要組成部分。脫壁之后的原生質(zhì)體可以用于細(xì)胞融合，即所謂的體細(xì)胞融合。矮牽牛屬自1972年始就用于原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)，是最早進(jìn)行體細(xì)胞培養(yǎng)的植物種類，現(xiàn)已通過體細(xì)胞融合方式獲得了芽和雜種植株等產(chǎn)物，雖無新品種產(chǎn)生的報道，但為體細(xì)胞雜交應(yīng)用于植物育種的可能性開辟了廣闊的前景農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化程序：目的基因的克隆構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌介導(dǎo)目的基因轉(zhuǎn)化植物轉(zhuǎn)化體的篩選及鑒定基因工程矮牽牛的基因工程遺傳改良修飾花色改善株型改變花型延緩衰老提高抗性創(chuàng)造雄性不育Nature,1987,330:667-668Nature,1988,333:860-869AnantisensechalconesynthasegeneintransgenicplantsinhibitsflowerpigmentationVanderkrolAR,LentingRJ,VeenstraJGetal.TheplantJournal1998,13(2):259-266Productionofyellowcolourinflowers:redirectionofflavonoidbiosynthesisinPetuniaKevinM.Davies,StephenJ.Bloor,GayleB.SpillerandSimonC.DerolesPKR(CHR)cDNAfromMedicagosativa（紫苜蓿）Overexpressionofapetuniazinc-fingergenealterscytokininmetabolismandplantformsHitoshiNakagawa,Chang-JieJiang,HitoshiSakakibaraetal.Volume41

Issue4

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-February2005Lateral-shootInducingFactor(LIF)

CK0dTr0dCK3dTr3dTr8dCaMV35S－etr1-1PlantPhysiology2004,136:2900-2912

3dafterethylenetreatment2d(left)and8d(right)afterpollinationCaMV35S+sensePhEIN2CaMV35S+PhEIN2-RNAiPlantPhysiologyPreview

FirstpublishedonSeptember18,2003;10.1104/pp.103.024554Down-Regulatingα-GalactosidaseEnhancesFreezingToleranceinTransgenicPetunia

JoyceC.Pennycooke,MichelleL.Jones,andCecilStushnoff半乳糖苷酶植物遺傳標(biāo)記與DNA標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記含義遺傳標(biāo)記通常是形態(tài)標(biāo)記，生化標(biāo)記及分子標(biāo)記三種標(biāo)記的統(tǒng)稱。遺傳標(biāo)記實(shí)際上指的是標(biāo)記座位（標(biāo)記基因座）（Markerlocus）。標(biāo)記→遺傳標(biāo)記=標(biāo)記座位Marker→Geneticmarker=Markerlocus一個標(biāo)記座位是一個多態(tài)性座位意味著可應(yīng)用于兩個方面：當(dāng)某個個體基因型帶有多態(tài)性座位時，這個標(biāo)記非常適合應(yīng)用于群體遺傳學(xué)研究。當(dāng)一個或多個座位的基因型與一個多態(tài)性座位連鎖時，這個標(biāo)記則可應(yīng)用從圖位克隆到標(biāo)記輔助育種。理想的遺傳標(biāo)記多態(tài)性Polymorphic多等位性Multiallelic共顯性Codominant，雜合體能同時反映出兩個純合親本的性狀，在家系中雜合子能從各個純合子中區(qū)分出來；無上位性Non-epistatic中性Neutral，在一個標(biāo)記座位上進(jìn)行等位替換，不會產(chǎn)生表型或選擇效應(yīng)對環(huán)境不敏感性Insenstitivetoenvironment，從表型就可推斷基因型，無論環(huán)境如何變化。遺傳標(biāo)記分類傳統(tǒng)的分類方法：

1）形態(tài)標(biāo)記Morphologicalmarker2）生化標(biāo)記Biochemicalmarker3）分子標(biāo)記Molecularmarker形態(tài)標(biāo)記形態(tài)標(biāo)記通常無法達(dá)到理想標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)，多態(tài)性不足且常常是顯性的，易受其它性狀及環(huán)境的影響，即使某些物種形態(tài)標(biāo)記數(shù)目也不少（水稻、玉米均有上百個形態(tài)標(biāo)記），但這些標(biāo)記在一個特定的家系中很難有共同的多態(tài)性。生化標(biāo)記生化標(biāo)記和分子標(biāo)記，通常有共同的特性。同工酶標(biāo)記的主要不足是可檢測的座位數(shù)少，如在水稻和玉米的分離群體中一般很難檢測出30～40個同工酶標(biāo)記。而且在不同的器官中并非均存在或都有活性。應(yīng)用雙向電泳檢測多態(tài)性蛋白質(zhì)的數(shù)目可以是很多的，但也取決于特定的器官或生物。DNA標(biāo)記DNA水平的分子標(biāo)記，其數(shù)量幾乎是無窮的，不受分析的時期、器官的影響，因?yàn)镈NA在各種組織器官中都是一樣的。而且DNA標(biāo)記具有一個很好的優(yōu)點(diǎn)，就是能直接應(yīng)用于分子生物學(xué)研究。

DNA標(biāo)記特點(diǎn)

不同類型的DNA標(biāo)記具有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，所以應(yīng)用范圍受其特征的限制。分子標(biāo)記技術(shù)的選用，也要視被研究的物種的背景，像微衛(wèi)星和AFLP標(biāo)記適合于那些多態(tài)性低的物種，而對那些多態(tài)性高，同時也有很多cDNA基因或探針的物種，RFLP、STS是非常適合的。DNA標(biāo)記適用性遺傳指紋技術(shù)適用于以下三種情形：1）多樣性研究：如種間或種內(nèi)群體結(jié)構(gòu)、遺傳距離、聚類等等；2）位置克?。嚎墒鼓繕?biāo)基因所在基因區(qū)域的標(biāo)記密度增加；3）快速飽和遺傳圖譜，尤其針對那些稀有物種PCR標(biāo)記和探針尚未開發(fā)的物種基于技術(shù)的DNA標(biāo)記分類基于DNA-DNA雜交的標(biāo)記

如：RFLP，VNTR（重復(fù)數(shù)可變串聯(lián)重復(fù)標(biāo)記）基于PCR的標(biāo)記 如：RAPD，ISSR，SSR\srap等基于PCR與限制性酶切結(jié)合的標(biāo)記 如：AFLP，CAPs基于單核苷酸多態(tài)性的標(biāo)記 如：SNP基于DNA-DNA雜交的標(biāo)記RFLP即限制性片段長度多態(tài)性。這種多態(tài)性是由于限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)或位點(diǎn)間DNA區(qū)段發(fā)生突變引起的。。RFLP標(biāo)記具有共顯性、信息完整、重復(fù)性和穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。但RFLP技術(shù)的實(shí)驗(yàn)操作過程較復(fù)雜，需要對探針進(jìn)行同位素標(biāo)記，即使應(yīng)用非放射性的Southern雜交技術(shù)，仍然是個耗時費(fèi)力的過程?；赑CR的標(biāo)記一、隨機(jī)引物的PCR標(biāo)記其所用引物的核苷酸序列是隨機(jī)的，其擴(kuò)增的DNA區(qū)段是事先未知的。RAPD、DAF、AP-PCR、ISSR二、特異引物的PCR標(biāo)記具有特定核苷酸序列，引物長度通常為18～24核苷酸.根據(jù)引物序列的來源，主要可分為SSR標(biāo)記、SCAR標(biāo)記、STS標(biāo)記及RGA標(biāo)記等。RAPDRAPD標(biāo)記所用的引物長度通常為9～10個堿基RAPD標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)是，對DNA需要量極少，對DNA質(zhì)量要求不高，操作簡單易行，不需要接觸放射性物質(zhì)，一套引物可用于不同生物的基因組分析，可檢測整個基因組RAPD標(biāo)記的不足之處是，一般表現(xiàn)為顯性遺傳，因而提供的信息量不完整。由于使用了較短的引物，RAPD標(biāo)記的PCR易受實(shí)驗(yàn)條件的影響，結(jié)果的重復(fù)性較差。不過，只要擴(kuò)增到的RAPD片段不是重復(fù)序列，則可將其從凝膠上回收并克隆，轉(zhuǎn)化為RFLP和SCAR標(biāo)記，以進(jìn)一步驗(yàn)證RAPD分析的結(jié)果。ISSR簡單序列重復(fù)間區(qū)DNA標(biāo)記技術(shù)一般在引物的5’或3’端接上2～4個嘌呤或嘧啶堿基，以對具有相同重復(fù)形式的許多SSR座位進(jìn)行篩選，使得最終擴(kuò)增出的ISSR片段不致太多。穩(wěn)定性比RAPD好。ISSR標(biāo)記呈孟德爾式遺傳，具顯性或共顯性特點(diǎn)SSR標(biāo)記SSR微衛(wèi)星簡單重復(fù)序列由于基本單元重復(fù)次數(shù)的不同，而形成SSR座位的多態(tài)性。每個SSR座位兩側(cè)一般是相對保守的單拷貝序列，因此可根據(jù)兩側(cè)序列設(shè)計一對特異引物來擴(kuò)增SSR序列。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳，比較擴(kuò)增帶的遷移距離，就可知不同個體在某個SSR座位上的多態(tài)性。SSR標(biāo)記的最大優(yōu)點(diǎn)是具有大量的等位差異，多態(tài)性十分豐富。但是，SSR標(biāo)記必須依賴測序設(shè)計引物，開發(fā)成本高。不過，目前許多物種已有現(xiàn)成的、商品化的SSR引物，對一般實(shí)驗(yàn)室而言，只需利用現(xiàn)成的SSR引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，即可分析DNA的多態(tài)性。SSR多態(tài)性分析示意圖.基于限制性酶切和PCR的DNA標(biāo)記

以限制性酶切和PCR技術(shù)為基礎(chǔ)、將兩種技術(shù)有機(jī)結(jié)合的DNA標(biāo)記主要有兩種，一種是先將樣品DNA用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，再對其酶切片段有選擇地進(jìn)行擴(kuò)增，然后檢測其多態(tài)性，這種標(biāo)記稱為AFLP標(biāo)記；另一種是先對樣品DNA進(jìn)行?；詳U(kuò)增，再用限制性內(nèi)切酶對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切檢測其多態(tài)性，稱為CAPS標(biāo)記。AFLPAmplifiedFragmentLengthPolymorphism，擴(kuò)增片段長度多態(tài)性用兩個限制性內(nèi)切酶酶切及大約20個堿基的接頭連接后，進(jìn)行基因組DNA的PCR擴(kuò)增。

AFLP擴(kuò)增片段的譜帶數(shù)取決于采用的內(nèi)切酶及引物3’端選擇堿基的種類、數(shù)目和所研究基因組的復(fù)雜性。具有RFLP技術(shù)的可靠性和PCR技術(shù)的高效性基于單個核苷酸多態(tài)性SNP的DNA標(biāo)記

SNP標(biāo)記通過設(shè)計特異的PCR引物擴(kuò)增某個特定區(qū)域的DNA片段，通過測序和遺傳特征的比較，來鑒定該DNA片段是否可以作為SNP標(biāo)記。大規(guī)模的SNP鑒定則要借助于DNA芯片技術(shù)。遺傳標(biāo)記特點(diǎn)比較標(biāo)記類型中性數(shù)量共顯性標(biāo)記特異性多態(tài)性組織特異性技術(shù)難度編碼序列形態(tài)標(biāo)記N有限極少Y低Y低－同工酶Y≤40YY低Y低Y蛋白質(zhì)2D）

Y≤100YY低Y中等YRFLPY近無限YY高N高YorNSSRY成千個YY很高N高NISSRY近無限YorNN很高N低NAFLPY近無限NN很高N中YorNSNPYorN無限YY中N高YorN矮牽牛分子標(biāo)記輔助育種Peltieretal(1994)establishedthefirstRAPDandphenotypicmapinpetunia.Peltier,D.,Farcy,E.,Dulieu,H.,Bervillé,B.,1994.Origin,distributionandmappingofRAPDmarkersfromwildPetuniaspeciesinPetuniahybridaHortlines.Theor.Appl.Genet.88,637-645.Subsequently,restrictionfragmentlengthpolymorphism(RFLP),amplifiedfragmentlengthpolymorphism(AFLP),simplesequencerepeat(SSR)andcleavedamplifiedpolymorphicsequence(CAPS)hav