漢坦病毒重組核蛋白的表達(dá)及其應(yīng)用研究的開題報告

漢坦病毒重組核蛋白的表達(dá)及其應(yīng)用研究的開題報告開題報告題目：漢坦病毒重組核蛋白的表達(dá)及其應(yīng)用研究背景:漢坦病毒(hantavirus)是一種屬于Buniaviridae家族的單一鏈負(fù)向RNA病毒。病毒主要分布于全球各地，包括亞洲、歐洲、美洲，是主要的人畜共患病。漢坦病毒感染的臨床癥狀主要包括肺綜合征和出血發(fā)熱綜合征。目前，對漢坦病毒的診斷主要依靠特異性抗體的檢測，但是抗體檢測存在局限性，如需持續(xù)監(jiān)測感染狀況和密切接觸者的特異性診斷等，亟需研發(fā)更為精準(zhǔn)快速的診斷方法。研究內(nèi)容:本研究將構(gòu)建漢坦病毒重組核蛋白，對其表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，并對其應(yīng)用進(jìn)行探究。具體內(nèi)容如下：1.構(gòu)建漢坦病毒核蛋白表達(dá)載體，設(shè)計引物，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增。2.將擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆，構(gòu)建重組核蛋白表達(dá)載體，進(jìn)行測序驗證。3.優(yōu)化重組核蛋白表達(dá)條件，進(jìn)行大規(guī)模重組核蛋白表達(dá)。4.對重組核蛋白進(jìn)行純化及應(yīng)用研究，如其在ELISA檢測和免疫印跡等對漢坦病毒感染的診斷效果進(jìn)行驗證。研究意義:本研究將為漢坦病毒快速、高效、精準(zhǔn)的診斷提供新的思路和方法，實現(xiàn)對該病毒的早期診斷和病毒載量的動態(tài)監(jiān)測，對于防范和控制漢坦病毒的傳播具有重要的意義。研究方法:1.材料:購買上述病毒的實驗樣品，提取病毒核酸，并在受控的條件下進(jìn)行擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增之后，將目的產(chǎn)物克隆到重組質(zhì)粒中，進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞。待表達(dá)后對細(xì)胞進(jìn)行破裂，并以親和純化柱對蛋白進(jìn)行純化。2.技術(shù):PCR擴(kuò)增、酵母轉(zhuǎn)化、DNA質(zhì)粒提取、Agarose凝膠電泳、親和層析純化、WesternBlot等分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)學(xué)實驗技術(shù)的應(yīng)用。3.設(shè)備:PCR擴(kuò)增器，南方電泳儀，SDS凝膠電泳，蛋白印跡儀，透析用戶，并具備基本的分子生物學(xué)實驗設(shè)備。計劃進(jìn)度:預(yù)計在4-5個月內(nèi)完成漢坦病毒重組核蛋白表達(dá)，優(yōu)化表達(dá)條件及其純化，以及應(yīng)用研究的驗證，其中分別設(shè)置以下主要任務(wù)時間表。任務(wù)起止時間PCR擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物純化1-2個月克隆和質(zhì)粒DNA提取2-3個月重組核蛋白表達(dá)、純化及應(yīng)用研究3-5個月總結(jié)報告撰寫第5-6個月預(yù)期成果:完成漢坦病毒重組核蛋白表達(dá)、優(yōu)化表達(dá)條件及其純化，并進(jìn)行應(yīng)用研究驗證，撰寫相關(guān)論文發(fā)表于國內(nèi)外核心期刊，為該病毒前期診斷提供新思路和方法，提高其早期診斷的簡易性、快速性和準(zhǔn)確性。參考文獻(xiàn):1.MaesP,etal.Aproposalfornewcriteriafortheclassificationofhantaviruses,basedonSandMsegmentproteinsequences.Infect,GenetEvol.2009.9,813–820.2.GavrilovskayaIN,etal.Pathogenesisofhantavirusinfection:animalmodels.VirusRes.2014；187:51-7.3.ZhangY,etal.OptimizationofrecombinanthantavirusG1antigen