針刺對(duì)抑郁癥模型大鼠行為學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究

針刺對(duì)抑郁癥模型大鼠行為學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究

自1984年針灸開始用于患有抑郁的治療以來，取得了一些成果。但是,對(duì)于針刺作用的過程和實(shí)驗(yàn)研究尚不深入。為了探討針刺治療在抑郁癥治療中的應(yīng)用規(guī)律,我們觀察了針刺對(duì)抑郁癥模型大鼠行為學(xué)的影響,并與選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRI)氟西汀作對(duì)照?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下:1材料和方法1.1南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心成年SD大鼠,體重180~220g,雄性,由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。首先用Open-Field法作行為學(xué)評(píng)分,選擇得分相近的50只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、空白對(duì)照組、藥物組、針刺組,共5組,每組10只;正常對(duì)照組每籠飼養(yǎng)5只,模型組、空白對(duì)照組及治療組每籠飼養(yǎng)1只(分養(yǎng))。1.2.2應(yīng)激性刺激試驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M、空白對(duì)照組、藥物組、針刺組大鼠,共接受21天各種不同的應(yīng)激,包括冰水游泳(4℃,5min)、熱應(yīng)激(45℃,5min)、禁水(24h)、夾尾(1min)、電擊足底(電壓50mV,每隔15s刺激1次,每次持續(xù)10s,共15次)、搖晃(1次/s,5min)、禁食(24h)和晝夜顛倒等刺激,平均每種刺激各4次。正常對(duì)照組,常規(guī)飼養(yǎng),不接受任何應(yīng)激性刺激。分別于實(shí)驗(yàn)d1、d7、d14、d21測定各大鼠的體重、行為學(xué)(水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng))和糖水消耗量。1.2.3氟西汀針刺治療正常對(duì)照組,繼續(xù)常規(guī)飼養(yǎng),每籠飼養(yǎng)5只。模型組,處死?？瞻讓?duì)照組,繼續(xù)分養(yǎng),每籠飼養(yǎng)1只;常規(guī)飼料喂養(yǎng),不予應(yīng)激性刺激,也不予任何治療措施。藥物組,繼續(xù)分養(yǎng),每籠飼養(yǎng)1只;常規(guī)飼料喂養(yǎng),不與應(yīng)激性刺激,按照1.8mg/Kg給予氟西汀,將藥物溶解于生理鹽水中灌胃。1日1次治療,連續(xù)21d。針刺組,根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》大鼠穴位定位方法,選擇百會(huì)、內(nèi)關(guān)、三陰交,并參照人和動(dòng)物的穴位解剖結(jié)構(gòu)特點(diǎn),在華興邦研制的大鼠針灸穴位圖譜基礎(chǔ)上,在大鼠前正中線上,額頂骨縫交界線前方處定位神庭穴。針刺方法:常規(guī)穴位消毒,選用蘇州醫(yī)療用品廠生產(chǎn)的“華佗”牌32號(hào)1.0寸針灸針進(jìn)行治療。百會(huì)穴向前斜刺,神庭穴向上斜刺,進(jìn)針深度約為2mm,內(nèi)關(guān)直刺1mm,三陰交直刺5mm,每穴行均勻捻轉(zhuǎn)刺激30s,留針10min。1日1次治療,連續(xù)21d。分別于實(shí)驗(yàn)d28、35、42測定各鼠的體重、行為學(xué)和糖水消耗量的變化。1.3行為測試1.3.1面的活動(dòng)reging本實(shí)驗(yàn)所用敞箱為正方形,長、寬各80cm,高40cm,底面由面積相等邊長16cm的正方形25塊組成,以動(dòng)物穿越底面的塊數(shù)為水平活動(dòng)(crossing)得分,以直立次數(shù)為垂直活動(dòng)(rearing)得分,每只動(dòng)物共進(jìn)行7次測定,每次3min。1.3.2糖的消耗實(shí)驗(yàn)計(jì)算動(dòng)物24h飲用1%蔗糖溶液的量。1.4處理數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)誤(xˉ±s)(xˉ±s)表示,統(tǒng)計(jì)分析用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。2結(jié)果與分析2.1各組大鼠的體重變化各組大鼠的體重變化見表1。結(jié)果表明:在d21造模結(jié)束時(shí)和d42治療結(jié)束時(shí),各組間比較,體重的變化無明顯差異(P>0.05)。2.2各治療大鼠單次給藥后的整體節(jié)流運(yùn)動(dòng)積分Open-Field法是測定抑郁癥大鼠行為學(xué)的經(jīng)典方法,分水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)2個(gè)觀察面,以觀察得分為評(píng)分計(jì)算單位。各組大鼠的水平運(yùn)動(dòng)評(píng)分見表2,垂直運(yùn)動(dòng)評(píng)分見表3。結(jié)果表明:①造模開始后d7,模型組大鼠的水平活動(dòng)和垂直活動(dòng)開始降低,與正常對(duì)照組比較,有顯著性差異(P<0.05)。②在造模結(jié)束時(shí)(造模21d),與正常對(duì)照組比較,模型組、空白對(duì)照組以及各治療組大鼠的水平活動(dòng)明顯降低(P<0.01);與正常對(duì)照組比較,垂直活動(dòng)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組、空白對(duì)照組與各治療組大鼠的水平活動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)無明顯差異。③與空白對(duì)照組比較,各治療組在治療第7天后行為學(xué)積分開始升高,但是無明顯差異(P>0.05);在治療d14后各治療組大鼠水平活動(dòng)、垂直活動(dòng)均明顯升高(P<0.05,P<0.01)。④在治療21d后,各治療組運(yùn)動(dòng)積分與正常組大鼠間無明顯差異;與空白對(duì)照組比較,水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)都存在明顯差異(P<0.01)。⑤在治療21d后,針刺治療組大鼠與氟西汀藥物治療組大鼠的運(yùn)動(dòng)積分無顯著性差異。2.3各組大鼠的血糖含量比較不同情緒障礙的大鼠對(duì)于糖水的接受程度是不同的,消耗量是體現(xiàn)抑郁癥大鼠接受獎(jiǎng)賞意愿和程度的指標(biāo)之一。各組大鼠24小時(shí)飲用1%蔗糖溶液的量見表4。結(jié)果表明:(1)與正常對(duì)照組比較,模型組、空白對(duì)照組以及各治療組大鼠的糖水消耗量于第7天后開始減少(P<0.05);在d14、21,均存在顯著差異(P<0.01)。(2)針刺治療和氟西汀藥物治療第7天后,大鼠的糖水消耗量開始升高,與正常對(duì)照大鼠的糖水消耗量,無明顯差異(P>0.05);與空白對(duì)照組比較,也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在治療d21(實(shí)驗(yàn)d42)時(shí),針刺組大鼠的糖水消耗量明顯高于空白對(duì)照組(P<0.01),與正常對(duì)照組接近(P>0.05);而藥物治療組的糖水消耗量與空白對(duì)照組無明顯差異,但與正常對(duì)照組也無明顯差異(P>0.05)。3抑郁癥模型大鼠動(dòng)力學(xué)表現(xiàn)抑郁癥是一種以持久的情緒低落、興趣減少和活動(dòng)力下降為主要臨床征象的精神障礙性疾病,該病的神經(jīng)精神機(jī)制目前尚不完全清楚。本病的動(dòng)物模型,到目前為止一般可分為應(yīng)激模型、孤養(yǎng)模型、藥理學(xué)模型、腦損傷模型、操作應(yīng)激模型、遺傳選擇性模型等。一般認(rèn)為,良好的抑郁癥動(dòng)物模型應(yīng)該具有以下特征:①行為表現(xiàn)的模擬性(模型和疾病之間癥狀的一致性);②具有合理的理論基礎(chǔ)(造模手段與臨床抑郁癥的病因之間有關(guān)聯(lián));③動(dòng)物模型體內(nèi)病理生理學(xué)的改變與人類抑郁癥患者有相似性;④抗抑郁劑治療有效,模擬所致的行為學(xué)改變必須持續(xù)足夠長的時(shí)間以允許抗抑郁劑的長期應(yīng)用等。根據(jù)上述理論和抑郁癥的臨床特點(diǎn),我們綜合應(yīng)激和分養(yǎng)兩種經(jīng)典模型,應(yīng)用分養(yǎng)和中等強(qiáng)度不可預(yù)見性的刺激,造成分養(yǎng)動(dòng)物持久的抑郁狀態(tài),復(fù)制了抑郁癥模型。在造模過程中,模型大鼠處于明顯的抑郁狀態(tài),可見精神萎糜,毛色晦滯,各種活動(dòng)減少,在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)水平活動(dòng)和垂直活動(dòng)次數(shù)明顯減少,糖水消耗量降低。在造模結(jié)束(造模21d)時(shí),模型大鼠的行為學(xué)表現(xiàn),與正常對(duì)照組大鼠相比較,水平運(yùn)動(dòng)積分明顯下降,且存在顯著的差異性(P<0.01),但是垂直運(yùn)動(dòng)的下降無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各治療組大鼠的體重、水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)、糖水消耗與模型組大鼠間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。水平運(yùn)動(dòng)反映了抑郁癥大鼠的活動(dòng)度和運(yùn)動(dòng)能力,水平運(yùn)動(dòng)地明顯下降,說明了模型大鼠處于抑郁狀態(tài)。垂直運(yùn)動(dòng)反映了大鼠對(duì)周圍新鮮環(huán)境的好奇性,而興趣下降也是抑郁癥患者的主要癥狀之一。我們的造模過程中,雖然d21時(shí),模型組與正常對(duì)照組大鼠的垂直運(yùn)動(dòng)無顯著性差異,但是,在造模第7、第14天時(shí)的評(píng)分,與正常組大鼠相比較,存在顯著性的差異(P<0.01)。而體重的變化和糖水消耗量的變化,無明顯的差異。從模型大鼠的行為學(xué)改變,尤其是水平運(yùn)動(dòng)的評(píng)分變化,可以認(rèn)為,我們成功復(fù)制了抑郁癥的動(dòng)物模型。對(duì)于抑郁癥的發(fā)病機(jī)理研究,認(rèn)為除了心理-社會(huì)因素和遺傳因素外,主要還由于患者體內(nèi)去甲腎上腺素、5-羥色胺(5-HT)和多巴胺等神經(jīng)遞質(zhì)失衡所致。氟西汀是一種選擇性的5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRI),研究資料表明氟西汀有抑制神經(jīng)元從突觸間隙攝取5-羥色胺,增加間隙中可供實(shí)際利用的這種神經(jīng)遞質(zhì),從而改善5-羥色胺能神經(jīng)的功能狀態(tài)而改善情感癥狀。在治療階段,我們運(yùn)用針刺治療抑郁癥模型大鼠,并與藥物(氟西汀)治療相比較,同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組。研究發(fā)現(xiàn):針刺治療可以顯著地改善抑郁癥模型大鼠的行為學(xué)異常,與氟西汀治療相當(dāng)(P>0.05),與空白對(duì)照組在水平運(yùn)動(dòng)積分上存在明顯地差異(P<0.01)。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果說明針刺可改善抑郁大鼠的抑郁狀態(tài),我們推測其作用機(jī)理可能與調(diào)節(jié)中樞單胺能神經(jīng)功能狀態(tài)有關(guān)。另外,我們可以發(fā)現(xiàn),在治療過程中,針刺組大鼠在治療1周后,水平運(yùn)動(dòng)積分迅速提高,且與正常組大鼠的水平運(yùn)動(dòng)積分的差異無顯著性意義(P>0.05)。提示了針刺治療,相對(duì)于藥物治療,見效快。針刺治療和藥物治療兩者還可能存在著不同的作用過程。同時(shí),我們發(fā)現(xiàn),在針刺組接受針刺治療的大鼠存在明顯的易激惹表現(xiàn),尤其是在治療的后期有更多的大鼠表現(xiàn)得更加明顯。這一方面,可能與大鼠的抑郁狀態(tài)改善有關(guān)系;而另一方面,也提示了大鼠對(duì)針刺治療的某種“看法”。雖然我們的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是將針刺作為一種治療方法和手段,但是,模型大鼠