仔豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

仔豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗程子兵1董春霞2石國界3沙里塔那4馬長麗1（1.塔城地區(qū)動物疾控與診斷中心新疆塔城834700；2.重慶市武隆縣畜牧獸醫(yī)局重慶市武隆縣408500；3.塔城市畜牧獸醫(yī)工作站新疆塔城834700；4.額敏縣獸醫(yī)工作站新疆額敏縣834600）摘要:對塔城地區(qū)一農(nóng)戶飼養(yǎng)豬群中仔豬發(fā)生的臨床癥狀以水腫病、白痢、黃痢為特征的病例進行了樣品采集，后經(jīng)麥康凱、伊紅美藍分離培養(yǎng)，糖發(fā)酵生化試驗、動物試驗等結(jié)果顯示均為大腸桿菌，同時通過藥敏試驗篩選出敏感抗生素。關(guān)鍵詞：仔豬；大腸桿菌；分離鑒定；藥敏試驗Abstract：SpecimenswithdropsyanddysenteryclinicalsymptomswereisolatedfromonehouseholdraisespiggroupinTachengarea.Bybacteriaculture,biochemicaltestandanimaltest,theresultsindicatethebacteriumispathogenicEscherichiaColi.Meanwhile,weascertainsensitiveantibioticstothisEcolibymedicinetest.Keywords:pig;EscherichiaColi;isolateindentify;medicinetest仔豬大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的腸道傳染病，主要表現(xiàn)為仔豬白痢、黃痢和水腫病，其中黃痢多發(fā)生于1周內(nèi)哺乳仔豬，病豬主要表現(xiàn)為排黃色糊狀糞便；白痢多發(fā)于10～30日齡，病豬主要表現(xiàn)為排乳白色或灰白色腥臭糊狀糞便；水腫病多發(fā)于斷奶仔豬，主要有神經(jīng)癥狀、胃壁、腸黏膜等組織水腫，四季均可發(fā)生，發(fā)病率和致死率高低不等，嚴重者同窩仔豬中發(fā)病率可達90％以上，致死率可達100％，幸存者則影響生長，甚至成為僵豬【l】。由于致病性大腸桿菌的血清型復(fù)雜，在不同豬場、不同季節(jié)、不同批次，不同年齡流行菌株均可能不相同，造成規(guī)模化豬場的防控困難，引起較大的經(jīng)濟損失[2]。筆者對塔城地區(qū)農(nóng)戶散養(yǎng)豬群中采集的仔豬白痢、黃痢和仔豬水腫病的病料進行了細菌分離培養(yǎng)、鑒定及藥敏試驗。現(xiàn)將結(jié)果報告如下：1材料與方法1．1材料1.1.1采取農(nóng)民散養(yǎng)戶中臨床癥狀較為典型的5份仔豬白痢、黃痢肛門拭子及仔豬水腫病的小腸黏膜2份。1.1.2培養(yǎng)劑、普通肉湯、血清瓊脂平板由本實驗室自行配制，麥康凱瓊脂（MCK）、伊紅美藍瓊脂（EMB）按參考文獻[3]制備；三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸櫞酸鹽瓊脂斜面、葡萄糖微量生化反應(yīng)管、乳糖微量生化反應(yīng)管、麥芽糖微量生化反應(yīng)管、甘露醇微量生化反應(yīng)管購自杭州微生物試劑有限公司，10種藥敏試紙購自北京天壇生物技術(shù)有限公司。1.1.3實驗動物12只小白鼠。1.1.4藥敏試驗抗生素藥敏紙片青霉素（PG）、丁胺卡那霉素（AKN）、頭孢噻肟（CTX）、復(fù)合磺胺（SXT）、慶大霉素（GEN）、妥布霉（TOB）、苯唑青霉素（OXA）、頭孢唑啉（CFZ）、頭孢三嗪（CRO）、氟派酸（NOR）。1.2方法1.2.1細菌分離培養(yǎng)與鏡檢將待檢樣品接種于普通肉湯進行細菌培養(yǎng)，置37℃溫箱培養(yǎng)12～16h觀察結(jié)果；然后將培養(yǎng)物分別劃線接種于麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍瓊脂平板進行細菌培養(yǎng)，37℃溫箱培養(yǎng)20-241.2.2生化試驗生化鑒定挑取經(jīng)純培養(yǎng)的菌落分別接種于三糖鐵瓊脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸櫞酸鹽瓊脂斜面和葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇等發(fā)酵管，37℃培養(yǎng)24h1.2.3致病性試驗將分離菌的肉湯純培養(yǎng)物對10只健康小白鼠分別腹腔注射0.4～0.5mL，另2只小白鼠腹腔注射0.4～0.5mL無菌肉湯培養(yǎng)液作為對照，24～48h死亡或發(fā)病者取肝臟抹片革蘭氏染色鏡檢。1.2.4藥敏試驗采用藥敏紙片擴散法[4],37℃培養(yǎng)18～24h2結(jié)果2.1分離培養(yǎng)疑似培養(yǎng)物在麥康凱瓊脂培養(yǎng)20h后均為紅色菌落，在伊紅美藍瓊脂上培養(yǎng)20h后為中心暗藍黑色并有綠色金屬閃光的菌落；革蘭氏染色鏡檢均為革蘭氏陰性中等大小桿菌。2.2生化反應(yīng)從7份樣品中分離的細菌經(jīng)生化鑒定后，確定均為大腸埃希氏菌，具體結(jié)果見表1：表1：大腸桿菌生化鑒定結(jié)果試驗TSTH2SIdoleMRV-P麥芽糖枸櫞酸鹽甘露醇葡萄糖乳糖結(jié)果＋－＋＋－＋－＋＋＋2.3致病性結(jié)果將分離菌的肉湯純培養(yǎng)物對12只健康小白鼠分別腹腔注射0.4～0.5mL，另2只小白鼠為對照，24～36h內(nèi)死亡6只,48h后死亡2只,另2只發(fā)病,對照鼠不發(fā)病。取發(fā)病者肝臟抹片革蘭氏染色鏡檢，結(jié)果均為革蘭氏陰性中等大小桿菌。2.4藥敏試驗藥敏試驗結(jié)果見表2。表2大腸桿菌抑菌圈直徑測量結(jié)果抗生素PGOXASXTCTXGENTOBCFZAKNNORCRO抑菌圈直徑（mm）－－561111121616183小結(jié)與討論3.1鑒定結(jié)果根據(jù)培養(yǎng)特性、形態(tài)、生化試驗、致病性試驗鑒定結(jié)果表明此細菌分離株為致病性大腸桿菌。3.2動物試驗結(jié)果根據(jù)動物試驗結(jié)果，顯示分離株毒力較強，為致病性大腸桿菌，可使小鼠發(fā)病率達100%，致死率達80%。3.3治療藥敏試驗結(jié)果當前大多豬場致病性大腸桿菌對許多藥物具有不同程度的耐藥性，這可能與豬飼料中長期使用某些抗菌藥物及濫用抗生素有關(guān)，因此，使用藥物治療大腸桿菌病時，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，選擇敏感藥物，且應(yīng)注意交替使用。從本次藥敏試驗結(jié)果可以看出，分離的大腸桿菌對青霉素（PG）、頭孢噻肟（CTX）、復(fù)合磺胺（SXT）、苯唑青霉素（OXA）等不敏感；對慶大霉素（GEN）、妥布霉（TOB）、頭孢唑啉（CFZ）等中敏；而對頭孢三嗪（CRO）、丁胺卡那霉素（AKN）、氟派酸（NOR）高敏。因此，應(yīng)該避免盲目使用抗生素,在治療時采用廣譜抗菌藥與特效抗生素結(jié)合對癥治療，才能使病情得以控制，防止產(chǎn)生耐藥性和錯過治療時機。3.4防治大腸桿菌分布廣泛，也是動物腸道內(nèi)的正常寄居菌，當腸道內(nèi)環(huán)境發(fā)生變化時,附著在腸黏膜上并大量繁殖,產(chǎn)生許多對宿主有害的毒性物質(zhì)，如腸毒素、內(nèi)毒素及其他有害產(chǎn)物引起動物發(fā)病。特別是初生仔豬十分易感，常發(fā)生嚴重腹瀉和敗血癥，嚴重影響生長和造成死亡，給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴重的損失。而防控仔豬大腸桿菌病方面，結(jié)合多年的臨床工作經(jīng)驗，筆者認為應(yīng)該重點考慮以下三點：（1）加強飼養(yǎng)管理應(yīng)從疫苗、藥物預(yù)防、溫度、濕度、飼料配方、環(huán)境衛(wèi)生、消毒、飲水、飼養(yǎng)密度等方面采取綜合的生物安全措施，做到預(yù)防為主。（2）從源頭上采取措施堅持自繁自養(yǎng)的原則，不從疫情不明的豬場引進種豬；做好母豬分娩前后的環(huán)境清掃和消毒工作，盡快讓仔豬吸吮到初乳，使仔豬迅速獲得初乳抗體，以增強抵抗力。（3）藥物防治需慎重不要盲目的長期大劑量使用某種藥物，以免造成耐藥菌株的出現(xiàn)。且由于大腸桿菌易產(chǎn)生耐藥性，臨床用藥時建議以藥敏試驗結(jié)果為依據(jù)，有指導(dǎo)性的、科學(xué)的使用抗生素。這樣不但能夠克服了用藥的盲目性，而且可大大縮短疫病治愈的時間，節(jié)約生產(chǎn)成本。參考文獻：[1]蔡寶樣．動物傳染病診斷[M】．南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出