黃芪多糖對潰瘍性結腸炎大鼠腸道菌群失調(diào)的調(diào)整作用

黃芪多糖對潰瘍性結腸炎大鼠腸道菌群失調(diào)的調(diào)整作用

近年來，蝗性胃炎的發(fā)病率有所增加。臨床上常用柳樹磺酰胺（sasp）和糖皮質(zhì)激素治療，但副作用大，容易復發(fā)。減少或避免治療新型藥物的副作用已成為研究的重點之一。本實驗根據(jù)部分補益類中藥具有扶植腸道正常菌群生長、調(diào)節(jié)菌群失調(diào)、提高定植抗力功能,可起到益生元的作用的機理,選取黃芪多糖作為治療藥物,從微生態(tài)學角度探討其對潰瘍性結腸炎大鼠腸道菌群失調(diào)的調(diào)整作用。1實驗材料1.1實驗動物Wistar大鼠60只,體重180~220g,雌雄各半,由牡丹江醫(yī)學院動物實驗中心提供。1.2培養(yǎng)基和培養(yǎng)基乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸標準品(美國Sigma公司),麗珠腸樂(珠海麗珠集團麗珠制藥廠),培養(yǎng)基(青島海博生物有限公司),2,4,6三硝基苯磺酸(TNBS)(Sigma公司),黃芪多糖(上海日升生物技術有限公司)。2實驗方法2.1治療前藥試驗組10只60只大鼠隨機分為模型組(10只),正常對照組(20只),自然恢復組(10只),麗珠腸樂組(10只),黃芪多糖中藥組(簡稱中藥組)(10只)。2.2大鼠結腸tnbs和乙醇液的制備除正常對照組外,其余各組大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.2ml/1009)將大鼠麻醉,固定。將外徑2.0mm、長約15cm的輸液管(輸液管先用液體石蠟油潤滑),從大鼠肛門逆行插入結腸內(nèi)深約8.0cm處,一次性將100mg/kgTNBS和50%乙醇的TNBS/乙醇液0.25ml注入大鼠結腸內(nèi),用棉簽堵住大鼠肛門,輕揉大鼠腹部lmin,使TNBS/乙醇液均勻地與大鼠結腸粘膜接觸。然后將大鼠頭向下,身體傾斜45°,放置lmin,再將大鼠放平。對照組用同樣方法,0.25ml生理鹽水灌腸,均自然清醒。3d后,處死造模組大鼠和10只正常對照組大鼠,剪取直腸和結腸組織,清洗后肉眼觀察結腸組織,并取腸段(10%甲醛溶液中固定)作組織切片以確定造模是否成功。2.3灌胃藥物治療中藥組采用黃芪多糖進行灌胃治療(黃芪多糖濃度為0.2g/ml生藥量),麗珠腸樂組用麗珠腸樂灌胃治療,自然恢復和正常對照組用生理鹽水灌胃,以上各組灌胃量均為每次0.3ml,每天兩次,連續(xù)7d后處死進行指標檢測。2.4指標檢測2.4.1發(fā)酵在距大鼠回盲部末端10cm以內(nèi),無菌采取盲腸內(nèi)容物0.1g,將上述采集的標本,應用無菌生理鹽水進行10倍系列稀釋至10-9倍。不同稀釋度標本滴種培養(yǎng)48h后進行菌落計數(shù)。2.4.2色譜分析測定無菌條件下取0.05g盲腸內(nèi)容物,立即放入無菌玻璃試管中,溶于1ml蒸餾水中,加50%硫酸0.1ml、乙醚0.5ml蓋緊塞子,取1μl作色譜分析。將樣本注入進樣器后,儀器自動采集數(shù)據(jù)并送到1200工作站積分處理并作出色譜圖,其中記錄各有機酸的出峰順序、保留時間、峰高、峰面積百分比。2.4.3菌落計數(shù)壓將大鼠在無菌條件下取肝組織0.lg,置于無菌勻漿器中,加0.9ml生理鹽水勻漿,將標本稀釋至10-3,用微量加樣器吸取標本20μl滴種在中國蘭培養(yǎng)基上,置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h后進行菌落計數(shù)。3統(tǒng)計分析工具實驗數(shù)據(jù)結果采用表示,試驗數(shù)據(jù)使用SPSS16.0數(shù)據(jù)分析軟件作統(tǒng)計分析,P>0.05表示差異不顯著,P<0.05表示差異顯著,P<0.01表示差異極顯著。4結果4.1急性炎細胞感染模型組肉眼觀察顯示結腸粘膜充血、水腫、糜爛、出血、潰瘍,顯微鏡下顯示隱窩有急性炎細胞浸潤,固有膜內(nèi)有慢性炎細胞浸潤。正常對照組大鼠結腸粘膜組織肉眼觀察和顯微鏡下均顯示正常。4.2不同統(tǒng)計學處理的差異p>0.05從表1可以看出,模型組與正常組相比,雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量明顯下降,腸桿菌和腸球菌數(shù)量顯著上升,且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。經(jīng)7d治療后,中藥組與麗珠腸樂組雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量均明顯上升,腸球菌和腸桿菌的數(shù)量明顯下降,相比自然恢復組具有顯著差異(P<0.05),中藥組與麗珠腸樂組之間的差別具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其對腸道微生態(tài)失調(diào)的調(diào)整作用中藥優(yōu)于麗珠腸樂。4.3下降且降低從表2可以看出,模型組與正常組相比,乙酸含量顯著下降,且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。經(jīng)7d治療后,中藥組與麗珠腸樂組乙酸含量顯著上升,與自然恢復組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。4.4不同中藥組與麗珠腸樂組腸桿菌數(shù)量變化比較從表3可以看出,模型組與正常組相比,腸桿菌數(shù)量明顯上升(P<0.05)。經(jīng)7d治療后,中藥組與麗珠腸樂組腸桿菌數(shù)量顯著上升下降,相比自然恢復組具有顯著差異(P<0.05),中藥組與麗珠腸樂組之間的差別具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),中藥組降低腸桿菌易位的作用優(yōu)于麗珠腸樂組。5討論5.1賴同時依賴關系與賴后相互制約機體與其正常菌群作為一個整體存在,它們既相互依賴又相互制約。黃芪多糖對雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量的升高具有明顯促進作用,可以降低腸桿菌、腸球菌的數(shù)量,可見黃芪多糖可以顯著改善腸道微生態(tài)失調(diào)。5.2黃棕櫚糖對厭氧菌代謝產(chǎn)物中醋酸含量的影響5.3不同時期自然恢復組與自然恢復組的比較經(jīng)過7d治療,大鼠肝臟細菌易位數(shù)量大幅度下降,與同時期自然恢復組相比,差異有極顯著性,說明黃芪多糖能有效控制肝臟的需氧菌易位。其機制可能是通過增強網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬能力和機體免疫力來完成的。5.4扶正固本類中藥黃芪多糖與麗珠腸樂對微生態(tài)失調(diào)大鼠均具有調(diào)整菌群失調(diào)的作用,但從檢測指標的結果比較中可以看出黃芪多糖的作用優(yōu)于麗珠腸樂(活菌制劑),其原因可能與中藥雙向性調(diào)節(jié)有關。