中藥水提物促進(jìn)黑素生物合成的研究

中藥水提物促進(jìn)黑素生物合成的研究

黑素是一種重要的纖維蛋白化合物，主要用于決定人體的毛發(fā)和皮膚顏色。在人體內(nèi),黑色素由酪氨酸酶(tyrosinase)作用于酪氨酸形成多巴,去氫后形成多巴醌,并重排成5,6-醌吲哚,聚合后與黑素體內(nèi)的結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)合形成黑素蛋白即黑素。黑素分為優(yōu)黑素(eumelanin)和褐黑素(pheomelanin)兩類。優(yōu)黑素,褐色,是不溶的多聚體,耐各種化學(xué)處理;而褐黑素為紅色和黃色色素,能溶于堿性溶液。紅色和金色頭發(fā)中為褐黑素。毛發(fā)顏色是由毛囊內(nèi)黑素細(xì)胞產(chǎn)生黑素的質(zhì)和量所決定的;表皮內(nèi)的黑色素能吸收大部分紫外線,減少UVA和UVB波的透射,保護(hù)和減輕日光引起的皮膚急性和慢性損傷。研究中藥活性成分促進(jìn)黑色素生物合成,是21世紀(jì)美發(fā)、防曬化妝品的前沿課題,它將造福于成千上萬(wàn)頭發(fā)早白和皮膚易被曬傷的人們。1試劑及儀器中藥:薄荷、降香和復(fù)方中藥七寶美髯組方[源自(本草綱目)]為大連市藥材公司購(gòu)得。試劑:酪氨酸酶、左旋多巴為日本和光純藥工業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)品;其余試劑均為分析純。儀器:紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)UV-3100(日本島津公司)和HP8553(美國(guó)惠普公司)。2方法2.1制備生藥膏狀將薄荷、降香于80℃干燥30min,稍加粉碎,取5g用50mL蒸餾水煎煮45min,過(guò)濾后再加30mL蒸餾水煎煮30min過(guò)濾,合并兩次濾液,濃縮成膏狀。將膏狀物溶于蒸餾水中,制成每mL溶液相當(dāng)于生藥100mg,放入冰箱備用。測(cè)試時(shí)再按需配制成不同濃度。2.2七寶米旭群中藥水提取物的制備2.2.1七寶美贊群的組成首烏、牛膝、枸杞、茯苓、菟絲子、補(bǔ)骨脂和當(dāng)歸。2.2.2粗水提物的制備首烏2.05g,其余六中藥各為0.5g,稍加粉碎,倒入100mL的圓底燒瓶中,加入50mL的蒸餾水,浸泡,100℃回流40min,抽濾藥液,剩余的藥渣再加入30mL蒸餾水繼續(xù)回流30min,再次抽濾,合并濾液,濾液反復(fù)抽濾3次,保存于錐形瓶中,即為七味中草藥的粗水提物。在90℃下,減壓蒸餾粗水提物,呈膏狀,置于25mL容量瓶中,用蒸餾水定容至25mL,得到每mL溶液相當(dāng)于生藥200mg的溶液,作為配制各種濃度溶液的母液,置于冰箱中,冷藏備用。測(cè)試時(shí)取一定量的母液,加入適當(dāng)?shù)恼麴s水配制成不同質(zhì)量濃度的復(fù)方中藥水提物。2.2.3水浴加熱反應(yīng)(1)將酪氨酸酶1mL(100單位)與0.15%左旋多巴液1mL混合,25℃恒溫水浴中孵育5min。(2)加入不同質(zhì)量濃度中藥液1mL,置于25℃超級(jí)恒溫水浴中繼續(xù)孵育60min。(3)用1mol/L鹽酸0.2mL終止反應(yīng)。將反應(yīng)混合物以3000r/min,離心分離15min,去上清液,沉淀物用6mol/L的鹽酸洗1次,蒸餾水洗2次,最后用1mol/L的氫氧化鈉水溶液3mL充分溶解試管底部的團(tuán)塊,可以適當(dāng)加熱以促進(jìn)溶解速度。調(diào)試分光光度計(jì),特定波長(zhǎng)下測(cè)量溶液的吸光度值A(chǔ)n。2.2.4黑素生產(chǎn)率的計(jì)算黑素生成上調(diào)率用加藥組An占空白對(duì)照組An的百分率表示:黑素上調(diào)率(%)=(An加藥組/An空白組-1)×100%3結(jié)果與討論3.1薄薄水提物對(duì)黑素合成調(diào)度系統(tǒng)的影響由表1顯示,薄荷水提物在較低質(zhì)量濃度對(duì)酪氨酸酶促黑素生物合成已經(jīng)有明顯的作用,質(zhì)量濃度為40mg/mL、波長(zhǎng)280nm的紫外光使酶促黑素合成的上調(diào)率達(dá)237%。隨著紫外區(qū)入射光波長(zhǎng)的增加上調(diào)率增加,質(zhì)量濃度為100mg/mL薄荷水提物,波長(zhǎng)330nm的紫外光使酶促黑素合成的上調(diào)率從229%提高到617%,說(shuō)明薄荷水提物促黑素生物合成上調(diào)的影響并非是唯一因素。薄荷水提物濃度對(duì)促黑素合成上調(diào)的影響不明顯,而紫外光的波長(zhǎng)對(duì)黑素合成上調(diào)率的影響卻很顯著。同時(shí)還可看出薄荷水提物促黑素生物合成物在UVB、UVA區(qū)都具有強(qiáng)的吸收。3.2降精油提物質(zhì)量對(duì)黑素合成調(diào)濕的影響由表2可見(jiàn)降香水提物在較低質(zhì)量濃度對(duì)酪氨酸酶促黑素生物合成已有明顯的作用,質(zhì)量濃度為40mg/mL,波長(zhǎng)280nm的紫外光已使酶促黑素合成的上調(diào)率達(dá)205%,質(zhì)量濃度為100mg/mL,波長(zhǎng)280nm的紫外光已使酶促黑素合成的上調(diào)率達(dá)340%。隨著紫外區(qū)入射光波長(zhǎng)增加上調(diào)率增加,質(zhì)量濃度為100mg/mL降香水提物,波長(zhǎng)330nm的紫外光使黑素合成的上調(diào)率從340%提高到685%。降香水提物質(zhì)量濃度對(duì)本課題促黑素生物合成上調(diào)率的影響明顯,而紫外光的波長(zhǎng)對(duì)黑素合成上調(diào)的影響更為顯著。同時(shí)由表2還可看出降香水提物促黑素生物合成物在UVB、UVA區(qū)具有較強(qiáng)的吸收,也有望成為新的防曬劑。3.3水提物質(zhì)量對(duì)黑素生物合成調(diào)濕結(jié)果的影響由表3可見(jiàn)七寶美髯膏組方水提物在較低質(zhì)量濃度對(duì)酪氨酸酶促黑素生物合成有一定的上調(diào)作用,質(zhì)量濃度為50mg/mL,波長(zhǎng)280nm的紫外光使酶促黑素合成上調(diào)率為63%,水提物質(zhì)量濃度對(duì)本課題促黑素生物合成上調(diào)率的影響明顯。質(zhì)量濃度為200mg/mL,波長(zhǎng)280nm的紫外光已使黑素合成的上調(diào)率達(dá)328%;而紫外光的波長(zhǎng)對(duì)黑素合成上調(diào)率有較大影響,在低濃度隨著波長(zhǎng)的增加上調(diào)率有所降低,如質(zhì)量濃度為50mg/mL組方水提物,波長(zhǎng)330nm的紫外光使黑素合成上調(diào)率從63%下降到44%,在高濃度則相反,其原因作者將在另文中給予解釋和討論。表3中看出七寶美髯膏組方水提物促黑素生物合成物在UVB段同樣具有較強(qiáng)的吸收,在UVA段的吸收有所減弱。4