測(cè)試藥對(duì)結(jié)腸癌皮下移植瘤模型生長(zhǎng)作用的初步研究

測(cè)試藥對(duì)結(jié)腸癌皮下移植瘤模型生長(zhǎng)作用的初步研究摘要目的以人結(jié)腸癌COLO205細(xì)胞株建立人源化小鼠皮下移植瘤模型,測(cè)試藥物對(duì)此腫瘤模型生長(zhǎng)的作用。方法將連續(xù)培養(yǎng)十代之前的人結(jié)腸癌COLO205細(xì)胞，以約5×106的數(shù)量接種于每只小鼠背部靠近腋右下方皮下。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)到平均約100-150mm3左右時(shí)，48只小鼠根據(jù)腫瘤大小和體重被隨機(jī)分成6組，每組8只。分組后小鼠經(jīng)腹腔注射的方式進(jìn)行給藥，每?jī)商旖o藥一次，一共給藥14次，每周測(cè)量腫瘤體積兩次，連續(xù)4周。結(jié)果實(shí)驗(yàn)期間，人結(jié)腸癌細(xì)胞COLO205皮下移植瘤模型在本實(shí)驗(yàn)中成功的建立。陽(yáng)性藥5-FU組、5-FU+測(cè)試藥高劑量組、5-FU+測(cè)試藥中劑量組、5-FU+測(cè)試藥低劑量組小鼠給藥后瘤體積增長(zhǎng)相對(duì)緩慢，與同期空白對(duì)照組相比瘤體積相對(duì)較低，有顯著差異（p<0.05）。測(cè)試藥組給藥后體積增長(zhǎng)相對(duì)緩慢，與空白對(duì)照組相比，瘤體積相近，沒(méi)有顯著差異（p>0.05）。結(jié)論經(jīng)實(shí)驗(yàn)顯示測(cè)試藥與5-Fu聯(lián)合用藥有抑制腫瘤生長(zhǎng)的趨勢(shì)?！娟P(guān)鍵詞】結(jié)腸癌皮下移植瘤模型測(cè)試藥COLO205細(xì)胞目錄1前言1研究背景1研究現(xiàn)狀11.3研究的目的和意義12材料與方法22.1實(shí)驗(yàn)材料22.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22.1.2儀器22.1.3試劑22.2實(shí)驗(yàn)方法32.2.1細(xì)胞培養(yǎng)和接種32.2.2動(dòng)物分組和給藥方法32.2.3動(dòng)物觀察32.2.4檢測(cè)指標(biāo)42.2.5實(shí)驗(yàn)停藥和恢復(fù)給藥標(biāo)準(zhǔn)42.2.6實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人道終點(diǎn)42.2.7實(shí)驗(yàn)結(jié)束后安樂(lè)死及實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)42.2.8統(tǒng)計(jì)分析43實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論53.1測(cè)試藥對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的反應(yīng)和體重變化53.2測(cè)試藥對(duì)腫瘤體積、相對(duì)腫瘤體積及相對(duì)腫瘤抑制率的影響變化...63.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥后的腫瘤重量及瘤重抑制率的結(jié)果94結(jié)論115結(jié)束語(yǔ)11參考文獻(xiàn)12附錄13前言1.1研究背景所謂癌癥就是所有惡性腫瘤的總稱，然而腫瘤細(xì)胞的特性就是無(wú)限制地增生，消耗患者體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)。它可以破壞相鄰好的細(xì)胞和組織，使人體產(chǎn)生各種癥狀，并且可以在全身各處轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)繁殖，可以導(dǎo)致發(fā)熱、食欲不良以及各種臟器功能受到嚴(yán)重?fù)p傷等。然而隨著我們的生活方式和環(huán)境的改變，癌癥的發(fā)病率有著逐漸上升的趨勢(shì)。雖然現(xiàn)在的醫(yī)療發(fā)展不斷的提高，但是癌癥的治療效果還是沒(méi)有到達(dá)理想的程度。目前結(jié)腸癌(Colorectalcancer,CRC)是人類高發(fā)的惡性腫瘤也是最常見(jiàn)的消化道腫瘤之一，每年全球約有120萬(wàn)新病例，預(yù)估計(jì)60萬(wàn)人左右死于此疾病。它的發(fā)病率一直在上升，在全部的惡性腫瘤發(fā)病率中已經(jīng)到了第三位,它的死亡率現(xiàn)居于惡性腫瘤死因的第二位.而其發(fā)病情況有顯著的地區(qū)差異，高發(fā)區(qū)主要集中在北美等發(fā)達(dá)國(guó)家。我國(guó)雖然仍處于低發(fā)病地區(qū)，但癌癥的死亡率已經(jīng)居于的第五位,嚴(yán)重危害了人類的健康。近幾年來(lái)，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們的生活方式的改變，尤其是飲食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)腸癌已成為我國(guó)發(fā)展最快上升率最高的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著我們國(guó)家人們的生命健康。1.2研究現(xiàn)狀結(jié)腸癌發(fā)病率還隨著年齡的增大而逐步的上升，據(jù)國(guó)內(nèi)統(tǒng)計(jì)，以40-50歲居多，40歲以下約占1/3。高發(fā)國(guó)家的結(jié)腸癌高發(fā)年齡為60-70歲，30歲以下約占6%左右。我國(guó)結(jié)腸癌發(fā)病年齡比國(guó)外早了10-15歲左右。全世界每年新發(fā)病例約有120萬(wàn)，死于此疾病的人大約60萬(wàn)左右。中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院-腫瘤醫(yī)院/國(guó)家癌癥中心發(fā)布2015中國(guó)癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)的結(jié)直腸癌發(fā)病率和死亡率均居惡性腫瘤中的前5位，其中新發(fā)37.6萬(wàn)病例，死亡19.1萬(wàn)病例，已經(jīng)成為非常嚴(yán)重危害我國(guó)人民健康的疾病。雖然科學(xué)正在不斷的發(fā)展，醫(yī)療水平也在不斷的提高，直腸癌的治療水平也有明顯的提高，但是對(duì)于晚期直腸癌的治療仍不理想。直腸癌晚期治療取得理想療效的關(guān)鍵是選擇正確的治療方案，并且需要及時(shí)有效地進(jìn)行治療。然而，直腸癌的早期診斷率就比較的高，對(duì)于放療和化療也比較的敏感，所以會(huì)比其他癌癥的治療效果好。尤其近些年，隨著各種技術(shù)不斷的改進(jìn)，各種治療直腸癌的方法有了翻天覆地的提高，根據(jù)癌癥援助中心（英國(guó)邁克米藍(lán)）1971-2011年統(tǒng)計(jì)顯示，各類癌癥患者在確診之后平均存活時(shí)間都有延長(zhǎng)，其中結(jié)腸癌存活的時(shí)間平均從7個(gè)月延長(zhǎng)到了10年左右，大約延長(zhǎng)5倍。1.3研究目的和意義引發(fā)結(jié)腸癌的原因是和生活方式、遺傳、飲食、環(huán)境等因素密切相關(guān)，并且結(jié)腸癌的產(chǎn)生涉及原癌基因、抑癌基因等多種癌癥基因的過(guò)程，最終結(jié)果就是幾種癌癥基因相互協(xié)同作用。當(dāng)抑癌基因和癌基因兩者的平衡被打破時(shí),癌癥基因被細(xì)胞增殖所控制時(shí)會(huì)持續(xù)或者過(guò)度表達(dá)，同時(shí)這些抑制癌癥的基因在失活或者不表達(dá)的時(shí)候，就會(huì)讓癌變細(xì)胞產(chǎn)生逃避機(jī)體控制的免疫機(jī)制，這樣就會(huì)逐漸的形成腫瘤，最后導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)移和惡化。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的激活可能與轉(zhuǎn)移抑制基因的失活有關(guān)。這是多種轉(zhuǎn)移機(jī)制基因和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因共同協(xié)助作用下的最終結(jié)果。結(jié)腸癌動(dòng)物模型對(duì)研究結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展及治療等方面，具有非常重要的作用。目前人體之外的實(shí)驗(yàn)研究相關(guān)結(jié)腸癌的特性或者探討治療方法，主要還是借助已經(jīng)成功建立的結(jié)腸癌傳代細(xì)胞株或者動(dòng)物模型。特別是在研究結(jié)腸癌相關(guān)輔助治療方面，動(dòng)物模型甚至比細(xì)胞株更加具有優(yōu)勢(shì)，它更加真實(shí)地反映出體內(nèi)治療的效果，對(duì)于推到臨床應(yīng)用具有更高的參考價(jià)值。國(guó)內(nèi)外的學(xué)者對(duì)結(jié)腸癌的動(dòng)物模型都做了相關(guān)研究。本文以結(jié)腸癌COLO205細(xì)胞株構(gòu)建皮下移植瘤模型，研究測(cè)試藥物對(duì)體內(nèi)抗腫瘤的藥效作用。為研究結(jié)腸癌治療的相關(guān)科研人員提供一些理論依據(jù)。2材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物品系為BALB/cnude小鼠，雌性，4-5周齡16-20g，數(shù)量：56只，入組小鼠為48只?？紤]到此模型成瘤的均一性較差,需要準(zhǔn)備30%的備用動(dòng)物以確保實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。動(dòng)物均無(wú)攜帶特定病原，無(wú)給藥史。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供商：上海靈暢生物科技有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(滬)2019-0005。動(dòng)物每籠4只(同一給藥組)，放入SPF級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)。實(shí)驗(yàn)用小鼠可無(wú)限量獲取專用鼠糧(經(jīng)輻照消毒，江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限公司，中國(guó))。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，實(shí)驗(yàn)用小鼠無(wú)限量獲取經(jīng)處理的飲用水（酸化水），處理方式為市政供水經(jīng)Mol超純水機(jī)進(jìn)行過(guò)濾并用鹽酸將其pH值調(diào)節(jié)為2.0-3.0。在可預(yù)見(jiàn)范圍內(nèi)，動(dòng)物食物和飲用水中的已知污染物含量不會(huì)對(duì)本實(shí)驗(yàn)的目的或操作過(guò)程造成影響。2.1.2儀器設(shè)備離心機(jī)（ThermoFisherlegendMACH1.6/）、倒置顯微鏡（TS100）、生物安全柜（ThermoMSC-Advantage）、CO2培養(yǎng)箱（ThermoHERAcell150）、水浴鍋（DK-8B）、液氮罐（ThermoLOCATOR4）、移液器（電動(dòng)）（IBSPIPETBOYacu）、移液器（1ml、200μl、10μl）（GilsonP1000、GilsonP200、GilsonP10）、麻醉劑（MATRXVIP3000）、天平（DENVERINSTRUMENTTP-602）、游標(biāo)卡尺（mitutoyoCD-15cX）2.1.3試劑RPMI-1640培養(yǎng)基（Corningcellgro，批號(hào)：10-040-CVR）、胎牛血清（FBS）（GIBCO，批號(hào)：10270-106）、青鏈霉素（P.S.）（GIBCO，批號(hào)：15140-122）、胰蛋白酶-乙二胺四乙酸（GIBCO，批號(hào)：25200-072）、PBS（Corningcellgro、21-040-CVR）2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1細(xì)胞培養(yǎng)和接種以RPMI-1640培養(yǎng)基添加10%FBS培養(yǎng)于含5%CO2的37?C培養(yǎng)箱。細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)，確保十代之前的任意一代接種于56只小鼠（8只備用），每只小鼠接種約5x106的COLO205細(xì)胞，接種體積為100uL，接種部位為小鼠背部右邊靠近腋下。接種前用3-4%異氟烷將小鼠麻醉。2.2.2動(dòng)物分組和給藥方法當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)到平均約100-150mm3左右時(shí)，48只腫瘤大小合適的小鼠根據(jù)腫瘤大小和體重被隨機(jī)分成6組，每組8只。分組給藥當(dāng)天定義為第0天。分組情況和給藥方案如表1所示：表1.分組和給藥方案組別Na受試物劑量(mg/kg)b給藥途徑d給藥周期給藥次數(shù)c18PBS-i.p.兩天一次14285-氟尿嘧啶30i.p.兩天一次1438測(cè)試藥10i.p.兩天一次14485-氟尿嘧啶+測(cè)試藥30+15i.p.兩天一次14585-氟尿嘧啶+測(cè)試藥30+10i.p.兩天一次14685-氟尿嘧啶+測(cè)試藥30+5i.p.兩天一次14注：a：每組動(dòng)物只數(shù)。b：給藥體積依實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重按10μL/g計(jì)算。c：實(shí)際給藥次數(shù)14次，給藥周期為四周。d：i.p.指腹腔注射。2.2.3動(dòng)物觀察每天觀察每只小鼠的外觀及行為，自給藥開始根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果連續(xù)觀察4周。所有非正常的外觀形態(tài)和行為活動(dòng)都記錄在臨床觀察表內(nèi)。測(cè)試藥有可能對(duì)動(dòng)物消化系統(tǒng)有影響；如動(dòng)物出現(xiàn)拉肚子，需記錄。2.2.4檢測(cè)指標(biāo)腫瘤體積：對(duì)于皮下移植瘤模型，分組后每周兩次測(cè)量腫瘤體積和體重。腫瘤體積（V）的計(jì)算方法如下：V=（長(zhǎng)×寬2）/2。動(dòng)物體重：對(duì)于皮下移植瘤模型，接種、分組（首次給藥前）、給藥期間每周測(cè)量并記錄老鼠體重兩次。動(dòng)物發(fā)生意外死亡或?yàn)l死安樂(lè)死時(shí)也稱重。動(dòng)物狀態(tài)觀察：觀察內(nèi)容包括但不限于腫瘤結(jié)節(jié)破潰情況、動(dòng)物精神狀態(tài)、飲食情況等。相對(duì)腫瘤抑制率（TGI）：TGI%=（1-T/C）×100%。其中T和C分別為試驗(yàn)組和空白對(duì)照組在某一特定時(shí)間點(diǎn)的相對(duì)腫瘤體積（RTV），T/C%為相對(duì)腫瘤增殖率，即在某一時(shí)間點(diǎn)試驗(yàn)組與空白對(duì)照組的相對(duì)腫瘤體積（RTV）的百分比值。計(jì)算公式如下：T/C%=TRTV/CRTV×100%（TRTV：試驗(yàn)組平均RTV；CRTV：溶劑對(duì)照組平均RTV；RTV=Vt/V0，V0為分組時(shí)該動(dòng)物的瘤體積，Vt為治療后該動(dòng)物的瘤體積）。瘤重抑制率IRTW%=（陰性對(duì)照組平均瘤重–治療組平均瘤重）/陰性對(duì)照組平均瘤重×100%。療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：如果TGI<60%，為無(wú)效；如果TGI≥60%，且經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理試驗(yàn)組RTV值顯著低于空白對(duì)照組RTV（p<0.05）為有效，即測(cè)試藥對(duì)腫瘤生長(zhǎng)具有顯著抑制作用。2.2.5實(shí)驗(yàn)停藥和恢復(fù)給藥標(biāo)準(zhǔn)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，小鼠體重下降≥15%時(shí)，即停止給藥，停藥期應(yīng)足夠長(zhǎng)讓小鼠恢復(fù)體重。僅體重下降≥15%的小鼠停藥，其余小鼠正常給藥；停藥時(shí)小鼠體重恢復(fù)參照以下標(biāo)準(zhǔn)將繼續(xù)實(shí)驗(yàn)：體重下降≤10%。2.2.6實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人道終點(diǎn)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，若出現(xiàn)以下任何一項(xiàng)或多項(xiàng)情況時(shí)，應(yīng)當(dāng)對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死：1.當(dāng)單只動(dòng)物荷瘤體積超過(guò)2000mm3；2.腫瘤發(fā)生潰瘍、壞死或感染；3.動(dòng)物出現(xiàn)行動(dòng)異常，或癱瘓；4.動(dòng)物體重一旦降低超過(guò)開始給藥時(shí)體重的20%。2.2.7實(shí)驗(yàn)結(jié)束后安樂(lè)死及實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中當(dāng)某組中動(dòng)物的平均腫瘤體積超過(guò)2000mm3或?qū)嶒?yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行安樂(lè)死處理。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，所有荷瘤小鼠用CO2窒息，然后脫頸椎處死。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，所有荷瘤動(dòng)物拍照，將所有腫瘤取出，稱重并拍照。照片見(jiàn)附錄2和3。2.2.8統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果將以平均值±S.E.M的方式呈現(xiàn)。兩組間比較將用Dunnett’smulti-comparisontest進(jìn)行檢驗(yàn)。如果p<0.05則認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論3.1測(cè)試藥對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的反應(yīng)和體重變化實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物精神狀態(tài)良好，動(dòng)物體重輕微下降，與同期對(duì)照組相比，G2陽(yáng)性藥5-氟尿嘧啶組動(dòng)物體重在Day24~Day28期間相對(duì)較高，且有顯著差異；G45-氟尿嘧啶+測(cè)試藥高劑量組動(dòng)物體重在Day17~Day28期間相對(duì)較高，且有顯著差異（p<0.05）；G55-氟尿嘧啶+測(cè)試藥中劑量組和G65-氟尿嘧啶+測(cè)試藥低劑量組動(dòng)物體重在Day21~Day28期間相對(duì)較高，且有顯著差異（p<0.05）。本次實(shí)驗(yàn)從結(jié)果來(lái)看各組裸鼠都未見(jiàn)死亡。（見(jiàn)表2和圖1）。表2.各組動(dòng)物體重（g）分組分組后天數(shù)（天）037101417212428G1PBSMean19.4118.8016.8218.0317.2016.7316.9716.5715.74S.E.M.0.540.550.860.610.630.540.560.600.50G25-氟尿嘧啶Mean18.7817.5716.1116.9817.1117.8018.6718.8018.53S.E.M.0.640.660.620.770.9021.06P值0.99920.77570.99800.95780.99430.36320.08010.02710.0073G3測(cè)試藥Mean19.2918.9017.9518.3117.8217.0817.3517.1616.83S.E.M.0.390.530.780.720.840.880.890.970.98P值0.99991.00000.68710.99890.96870.99730.99470.96470.7135G45-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(高)Mean19.1917.7516.9917.1318.4519.8320.9321.1720.66S.E.M.0.570.560.610.760.660.590.500.520.48P值1.00000.73600.99820.96400.57420.03450.00350.00060.0002G55-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(中)Mean18.9517.3616.0316.3417.1418.5920.1520.9220.27S.E.M.0.740.750.720.870.850.670.550.530.44P值0.99170.35960.88570.42951.00000.25380.01310.00040.0003G45-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(低)Mean19.2718.0917.5818.0918.9719.2719.8019.8519.34S.E.M.0.270.330.520.490.600.620.500.490.72P值0.99980.85990.90821.00000.34160.08420.03170.01020.0041圖1.給藥后各組動(dòng)物體重變化趨勢(shì)圖3.2測(cè)試藥對(duì)腫瘤體積、相對(duì)腫瘤體積及相對(duì)腫瘤抑制率的影響變化實(shí)驗(yàn)期間，G1空白對(duì)照組小鼠的腫瘤體積持續(xù)增長(zhǎng)（見(jiàn)圖2），Day0瘤體積均值為210.30±24.91mm3，Day28瘤體積均值達(dá)到1355.56±117.46mm3（見(jiàn)表3），RTV均值升至7.05±0.93（見(jiàn)圖3和表4），說(shuō)明人結(jié)腸癌細(xì)胞COLO205皮下移植瘤模型在本實(shí)驗(yàn)中成功建立。G2陽(yáng)性藥5-氟尿嘧啶組動(dòng)物Day0瘤體積均值為199.09±23.41mm3，給藥后瘤體積增長(zhǎng)相對(duì)緩慢，Day28觀察結(jié)束時(shí)瘤體積均值為475.66±175.24mm3，RTV均值升至2.03±0.51。與同期空白對(duì)照組相比，瘤體積在Day17~Day28期間相對(duì)較低，有顯著差異（p<0.05，見(jiàn)表3）。G3測(cè)試藥組動(dòng)物Day0瘤體積均值為194.93±26.56mm3，給藥后瘤體積增長(zhǎng)相對(duì)緩慢，Day28觀察結(jié)束時(shí)瘤體積均值為1344.84±95.93mm3，RTV均值升至7.62±1.02。與同期溶媒對(duì)照組相比，瘤體積相近，沒(méi)有顯著差異（p>0.05，見(jiàn)表3）。G45-氟尿嘧啶+測(cè)試藥高劑量組動(dòng)物Day0瘤體積均值為194.64±21.03mm3，給藥后瘤體積增長(zhǎng)相對(duì)緩慢，Day28觀察結(jié)束時(shí)瘤體積均值為35.13±12.80mm3，RTV均值升至0.20±0.09。與同期溶媒對(duì)照組相比，瘤體積在Day10~Day28期間相對(duì)較低，有顯著差異（p<0.05，見(jiàn)表3）。G55-氟尿嘧啶+測(cè)試藥中劑量組動(dòng)物Day0瘤體積均值為206.70±21.21mm3，給藥后瘤體積增長(zhǎng)相對(duì)緩慢，Day28觀察結(jié)束時(shí)瘤體積均值為99.86±32.55mm3，RTV均值升至0.46±0.15。與同期溶媒對(duì)照組相比，瘤體積在Day10~Day28期間相對(duì)較低，有顯著差異（p<0.05，見(jiàn)表3）。G65-氟尿嘧啶+測(cè)試藥低劑量組動(dòng)物Day0瘤體積均值為201.52±27.85mm3，給藥后瘤體積增長(zhǎng)相對(duì)緩慢，Day28給藥結(jié)束時(shí)瘤體積均值為513.83±118.53mm3，RTV均值升至2.28±0.50。與同期溶媒對(duì)照組相比，瘤體積在Day10~Day28期間相對(duì)較低，有顯著差異（p<0.05，見(jiàn)表3）。本次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示表明測(cè)試藥聯(lián)合5-氟尿嘧啶給藥對(duì)腫瘤模型有著明顯的抑制性作用。表3.各組腫瘤體積（mm3）分組分組后天數(shù)（天）037101417212428G1PBSMean210.30345.33459.91650.49770.22943.271160.201270.951355.56S.E.M.24.9135.7542.1367.1978.4987.32109.77107.06117.46G25-氟尿嘧啶Mean199.09310.64369.64424.33476.67475.25450.07459.17475.66S.E.M.23.4132.7547.92102.84133.34156.41157.76169.87175.24P值0.97890.72630.20680.09880.07080.01550.00120.00050.0004G3測(cè)試藥Mean194.93296.73439.58693.84866.88953.701061.501206.741344.84S.E.M.26.5635.1348.8855.9870.2771.1682.5896.9995.93P值0.99040.75970.99650.98300.82541.00000.92410.98941.0000G45-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(高)Mean194.64297.05359.62301.76225.14129.1181.3060.9235.13S.E.M.21.0320.9241.2537.8028.3220.2112.1911.6212.80P值0.99940.88330.61290.00060.00000.00000.00000.00000.0000G55-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(中)Mean206.70313.81369.44324.94252.56181.19140.55107.7199.86S.E.M.21.2129.7025.3730.2329.2524.2624.9127.4832.55P值0.99740.89740.28700.00020.00000.00000.00000.00000.0000G65-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(低)Mean201.52305.65339.47351.90368.53389.80445.56497.33513.83S.E.M.27.8540.3340.1052.9364.6177.9197.54114.02118.53P值0.99930.87140.16460.00550.00150.00010.00010.00010.0000圖2.各組動(dòng)物腫瘤體積變化趨勢(shì)表4.各組相對(duì)腫瘤體積（mm3）分組分組后天數(shù)037101417212428G1PBSMean1.001.672.283.313.934.785.976.647.05S.E.M.0.000.060.160.370.460.470.720.880.93G25-氟尿嘧啶Mean1.001.591.872.022.192.091.951.962.03S.E.M.0.000.080.120.270.390.470.460.500.51P值N/A0.78750.09960.01080.00680.00030.00010.00010.0001G3測(cè)試藥Mean1.001.552.333.824.775.365.936.767.62S.E.M.0.000.060.150.380.480.680.720.881.02P值N/A0.66240.99880.78850.59290.93221.00001.00000.9924G45-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(高)Mean1.001.571.851.551.150.660.430.330.20S.E.M.0.000.080.100.090.070.090.070.080.09P值N/A0.82270.27940.00030.00000.00000.00000.00000.0000G55-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(中)Mean1.001.541.871.611.210.870.660.500.46S.E.M.0.000.060.05P值N/A0.79710.17750.00030.00000.00000.00000.00000.0000G65-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(低)Mean1.001.531.751.741.751.782.012.202.28S.E.M.0.000.080.070.400.460.50P值N/A0.53360.03310.00110.00030.00000.00010.00030.0003圖3.各組動(dòng)物相對(duì)腫瘤體積變化趨勢(shì)3.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥后的腫瘤重量及瘤重抑制率的結(jié)果實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤重量見(jiàn)圖4和表5。與同期溶媒對(duì)照組相比，除了G3測(cè)試藥組，其他各治療組的腫瘤重量均低于G1空白對(duì)照組，有顯著差異。表5.實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)各組腫瘤重量（g）及腫瘤抑制率分組實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)瘤重（g）瘤重抑制率IRTW(%)G1PBSDay28Mean1.28——S.E.M.0.11G25-氟尿嘧啶Day28Mean0.4763.28%S.E.M.0.15P值0.7918G3測(cè)試藥Day28Mean1.224.69%S.E.M.0.12P值0.3262G45-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(高)Day28Mean0.0496.88%S.E.M.0.02P值0.9989G55-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(中)Day28Mean0.1389.84%S.E.M.0.04P值0.6561G65-氟尿嘧啶+測(cè)試藥(低)Day28Mean0.4267.19%S.E.M.0.09P值NA圖4.腫瘤重量瘤重抑制率(%)：(陰性對(duì)照組平均瘤重–治療組平均瘤重)/陰性對(duì)照組平均瘤重×100%。各組瘤重抑制率如下：G2=(1.28-0.47)/1.28×100%=63.28%G3=(1.28-1.22)/1.28×100%=4.69%G4=(1.28-0.04)/1.28×100%=96.88%G5=(1.28-0.13)/1.28×100%=89.84%G6=(1.28-0.42)/1.28×100%=67.19%相對(duì)腫瘤增殖率(T/C%)：用于評(píng)價(jià)藥物抗腫瘤活性的作用，相對(duì)腫瘤增殖率T/C(%)=治療組(T)RTV平均值/陰性對(duì)照組(C)RTV平均值×100%。療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：T/C(%)>40%為無(wú)效，T/C(%)≤40%，且與陰性對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)為有效。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各組相對(duì)腫瘤增殖率的情況見(jiàn)表6表6.各組相對(duì)腫瘤增殖率DaysaftertreatmentG1PBSG25-氟尿嘧啶G3測(cè)試藥G45-氟尿嘧啶+測(cè)試藥（高）G55-氟尿嘧啶+測(cè)試藥（中）G65-氟尿嘧啶+測(cè)試藥（低）MeanMeanT/C(%)MeanT/C(%)MeanT/C(%)MeanT/C(%)MeanT/C(%)Day011100.001100.001100.001100.001100.00Day31.671.5995.211.5592.811.5794.011.5492.221.5391.62Day72.281.8782.022.33102.191.8581.141.8782.021.7576.75Day103.312.0261.033.82115.411.5546.831.6148.641.7452.57Day143.932.1955.734.77121.371.1529.261.2130.791.7544.53Day174.782.0943.725.36112.130.6613.810.8718.201.7837.24Day215.971.9532.665.9399.330.437.200.6611.062.0133.67Day246.641.9629.526.76101.810.334.970.57.532.233.13Day287.052.0328.797.62108.090.202.840.466.522.2832.344結(jié)論測(cè)試藥與5-氟尿嘧啶聯(lián)合使用能夠?qū)Ρ緦?shí)驗(yàn)結(jié)腸癌移植瘤模型有較好的抑制生長(zhǎng)作用,而且小鼠的生存能力也有所提高,增強(qiáng)了荷瘤小鼠的免疫功能，并且測(cè)試藥聯(lián)合5-氟尿嘧啶抗腫瘤的作用比較單獨(dú)應(yīng)用測(cè)試藥作用更加的強(qiáng)烈。此外測(cè)試藥物聯(lián)合5-氟尿嘧啶給藥對(duì)體重的影響比較小,對(duì)后期的實(shí)驗(yàn)給藥非常合適。本文可以為研究治療結(jié)腸癌相關(guān)腫瘤模型提供相關(guān)理論依據(jù)。5結(jié)束語(yǔ)目前，癌癥的發(fā)病率和死亡率呈逐漸上升的趨勢(shì)。根據(jù)美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)的估計(jì)，可能90%以上癌癥患者的死亡都受到不同程度耐藥性的影響，而結(jié)腸癌的研究主要集中在癌癥基因的發(fā)病機(jī)制、結(jié)腸癌基因的治療、與結(jié)腸癌相關(guān)的蛋白酶的作用等方面，結(jié)腸癌治療的多重耐藥機(jī)制和藥物治療機(jī)制等方面，已取得非常大的進(jìn)展。對(duì)結(jié)腸癌未來(lái)的研究，有望在腫瘤血管、多重耐藥、基因治療等方面取得突破性進(jìn)展。血管的生成是一個(gè)包括血管里面的內(nèi)皮細(xì)胞激活、增殖和內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，重新形成的血管和血管網(wǎng)絡(luò)等多方面的復(fù)雜過(guò)程。近年越來(lái)越多的研究熱點(diǎn)是通過(guò)腫瘤血管的抑制為目的來(lái)抑制結(jié)腸癌的形成。相信有效抑制腫瘤血管形成的藥物將來(lái)會(huì)成功的研發(fā)出來(lái)。腫瘤細(xì)胞的多重耐藥是導(dǎo)致臨床抗感染藥物治療、腫瘤化療失敗重要的原因之一?？朔嘀啬退幰恢笔强蒲腥藛T追求得目標(biāo)。相信科研人員最終會(huì)克服治療腫瘤多藥耐藥的難題。經(jīng)過(guò)科研人員的長(zhǎng)期努力，結(jié)腸癌的研究取得了非常大進(jìn)展，但還是需要努力。相信在不久以后，人類會(huì)克服危害人類健康的結(jié)腸癌和相關(guān)問(wèn)題。參考文獻(xiàn)[1]賴躍興,靖大道大腸癌流行因素的研究現(xiàn)狀[J]中國(guó)腫瘤2007(05)[2]驢強(qiáng),邢沈陽(yáng),趙志輝,張西臣,李建華,龔鵬濤結(jié)腸癌的研究現(xiàn)狀及展望[J]中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)200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