宮頸病變與hpv-dna檢測的相關(guān)性研究

宮頸病變與hpv-dna檢測的相關(guān)性研究

子宮頸癌是婦科常見的腫瘤之一，發(fā)病率位于女性腫瘤的第二位置，其次是乳腺癌。每年約有50萬新發(fā)病例,其中80%的病例發(fā)生在發(fā)展中國家。我國宮頸癌的發(fā)生率和病死率均約占世界的1/3。現(xiàn)已明確HPV(humanpapillomavirus)感染是宮頸癌發(fā)生的主要病因,應(yīng)用宮頸脫落細胞學(xué)檢查可以早期發(fā)現(xiàn)并治療HPV感染引起的宮頸組織病變,有效預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。本研究對婦科門診宮頸炎、CIN患者進行新柏氏液基薄層細胞學(xué)(TCT)技術(shù)篩查并與病理學(xué)診斷相結(jié)合,并進行高危型HPV16/18型熒光定量PCR檢測。發(fā)現(xiàn)HPV高危型患者CIN發(fā)病率較高,特別是高度病變。從宮頸上皮內(nèi)瘤病變(CIN)發(fā)展到宮頸癌是一個較長的過程,因此及早發(fā)現(xiàn)高危型HPV感染,及早發(fā)現(xiàn)和治療CIN患者以阻斷宮頸癌的發(fā)生,是當前醫(yī)學(xué)預(yù)防和研究的重點之一。南寧市婦幼保健院2004年1月~2006年8月對400例患者開展人乳頭瘤病毒感染與子宮頸上皮內(nèi)病樣變相關(guān)關(guān)系的研究,本文通過對我院TCT技術(shù)篩查與病理學(xué)診斷相結(jié)合、對宮頸炎和CIN一級及其以上(≥CIN1)病例各200例進行HPV16/18型熒光定量PCR檢測病例分析,總結(jié)評價TCT聯(lián)合HPV-DNA檢測在宮頸病變診斷中的價值。數(shù)據(jù)和方法1.院專科門診就診患者宮頸炎、CIN患者各200例均來自于2004年1月~2006年8月在我院婦科門診就診患者,年齡19~62歲。宮頸炎對照組200例經(jīng)TCT技術(shù)篩查和陰道鏡檢查診斷為宮頸炎,宮頸病變組200例經(jīng)TCT技術(shù)篩查診斷為宮頸病變≥不典型鱗狀細胞(≥ASC),經(jīng)病理學(xué)診斷為宮頸病變≥CIN1。2.細胞涂片的制備采用頸管刷收集子宮頸外口、宮頸管的脫落細胞,將采集的細胞立即洗入有保存液的樣本保存瓶中,經(jīng)過ThinPrep2000處理儀對樣品進行處理,就可以得到一張薄而均勻的直徑為2cm大小的圓形細胞涂片。剩余的TCT標本可送往PCR實驗室作HPV-DNA熒光定量檢測。3.核酸檢測試劑盒羅氏-Lightcycler全自動熒光定量PCR檢測儀,HPV16/18型核酸檢測試劑盒,購于中山醫(yī)科大學(xué)達安基因股份有限公司。設(shè)陰性對照、臨界值對照、強陽性模板經(jīng)稀釋成103、104、105、106、107,用于做標準曲線,檢測結(jié)果≥500拷貝者為陽性。4.統(tǒng)計方法采用χ2檢驗統(tǒng)計分析結(jié)果。5.鱗狀上皮細胞的asc-h細胞學(xué)診斷采用TBS描述性報告方式,本研究所涉及的細胞學(xué)異常診斷包括:非典型鱗狀細胞(atypicalsquamouscells,ASC),包括不明確意義的非典型鱗狀上皮細胞ASC-US和不除外高度病變的非典型鱗狀上皮細胞ASC-H);低度鱗狀上皮內(nèi)病變(low-gradesquamousintraepitheliallesion,LSIL);高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high-gradesquamousintraepithelialesion,HSIL)。熒光定量pcr檢測1.200例宮頸病變的TCT技術(shù)篩查診斷和病理學(xué)診斷結(jié)果:見表1。2.以病理學(xué)診斷為標準對200例宮頸病變與200例宮頸炎進行HPV16/18型熒光定量PCR檢測,結(jié)果見表2。以上結(jié)果表明,200例宮頸病變≥CIN1的HPV16/18型感染69例,感染率為34.5%(69/200),明顯高于宮頸炎對照組(感染率為8.0%),兩組結(jié)果比較有顯著性差異(χ2=41.9,P<0.005),特別是25例宮頸病變≥CIN2的宮頸上皮內(nèi)高度病變的病例,HPV16/18型感染18例,感染率高達72.0%(18/25)。技術(shù)聯(lián)合hpv-dna檢測篩查妊娠合并用藥1.關(guān)于宮頸脫落細胞學(xué)檢查:宮頸脫落細胞學(xué)的開展顯著降低了宮頸癌的發(fā)病率。通過對宮頸直接觀察或取材分析,如脫落細胞學(xué)檢查,可以早期發(fā)現(xiàn)宮頸存在的問題。長期應(yīng)用的巴氏五級診斷方法由于不能完全反映宮頸病變的狀態(tài),并且不能與組織學(xué)診斷相對應(yīng),又難以滿足臨床工作的需求。1988年提出的Bethesda系統(tǒng)(TBS)以明確、恰當?shù)姆绞奖磉_細胞學(xué)判讀的結(jié)果,便于與臨床醫(yī)師的交流與溝通。2001年再次修訂的Bethesda系統(tǒng),將鱗狀上皮細胞異常分為4類:非典型鱗狀細胞(ASC,包括ASC-US和ASC-H)、低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL,包括HPV/CINⅠ),高度鱗狀上皮內(nèi)病變(CINⅡ/Ⅲ,包括可疑浸潤)、鱗狀細胞癌。本研究所采用病例均為細胞學(xué)≥ASC以上病變。我院2002年引進TCT技術(shù),它是一種比較新的脫落細胞制片技術(shù),該技術(shù)改變了傳統(tǒng)的涂片方法,幾乎100%的樣品細胞都被收集到裝有保存液TCT專用瓶子中,細胞固定及時,形態(tài)結(jié)構(gòu)不容易發(fā)生改變,細胞隨機均勻分布,并且濕固定的細胞核結(jié)構(gòu)清晰,易于鑒別,尤其是HSIL。與傳統(tǒng)巴氏涂片方法相比,TCT技術(shù)檢查能非常顯著地提高對低度及其以上病變的檢出率。TCT技術(shù)和TBS描述性細胞學(xué)診斷可以提高并與病理學(xué)診斷結(jié)果的一致性(表1),對細胞學(xué)形態(tài)特征表現(xiàn)為挖空細胞、角化不良細胞、濕疣外底層細胞的患者可以診斷或提示為HPV感染。因此,應(yīng)用TCT技術(shù)聯(lián)合HPV-DNA檢測篩查宮頸癌勢在必行。2.關(guān)于高危型HPV檢查:HPV感染是子宮頸癌的主要致病因素。按其與癌發(fā)生危險性的高低分為高危型和低危型。低危型HPV主要引起肛門皮膚及男性外生殖器、女性大小陰唇、尿道口、陰道下段外生性疣類病變和低度宮頸上皮內(nèi)癌變。高危型HPV除引起外生殖器疣外,更可以導(dǎo)致外生殖器癌、宮頸癌和高度宮頸上皮內(nèi)瘤變。本研究采用羅氏-Lightcycler全自動熒光定量PCR檢測儀,HPV16/18型核酸檢測試劑盒,由于實驗條件所限,只研究最常見的高危型HPV16/18與CIN關(guān)系,結(jié)果顯示200例宮頸病變≥CIN1的HPV16/18型感染69例,感染率為34.5%,明顯高于宮頸炎對照組的8.0%,兩組結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.005),說明高危型HPV16/18感染與宮頸上皮內(nèi)瘤變密切相關(guān)。HPV高危型患者CIN發(fā)病率明顯增高。尤其是25例宮頸病變≥CINⅡ的宮頸鱗狀上皮高度病變和宮頸鱗癌患者,HPV16/18型感染18例,感染率高達72.0%(18/25),明顯高于宮頸鱗狀上皮低度病變CINⅠ組的感染率29.1%(51/175),兩組結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.78,P<0.005),本研究證實,隨著病變級別增高,高危型HPV陽性率愈高,提示高危型HPV的存在在宮頸病變發(fā)展中的重要作用。HPV檢測在宮頸病變的檢查中有重要意義;高危型HPV患者CIN高度病變發(fā)生率明顯增高,此結(jié)論與上海市長寧區(qū)婦幼保健院和復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院的唐禮榕和張志毅研究相一致。與北京大學(xué)人民醫(yī)院婦科趙昀等的研究相一致。因此,HPV-DNA高危型陽性者是宮頸癌篩查的高危人群,應(yīng)加強隨訪,由此可見,高危型HPV16/18陽性預(yù)示著CIN的存在特別是CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌的存在或者將來有可能發(fā)展為CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌的可能?，F(xiàn)在,人們對HPV感染與宮頸病變的關(guān)系的認識逐漸統(tǒng)一:HPV感染是宮頸上皮內(nèi)瘤病變及宮頸癌發(fā)生的必要因素。3.無論是細胞學(xué)(TCT技術(shù))或是高危型HPV檢測,均是臨床常用的宮頸病變檢查方法。通過細胞學(xué)檢查可以明確患者是否存在細胞學(xué)的改變,因細胞學(xué)診斷受閱片醫(yī)師主觀影響較大,使細胞學(xué)的可重復(fù)性較差。高危型HPV檢測采用標準化試劑盒,人為主觀因素影響小,可了解患者是否存在和宮頸癌關(guān)系密切的高危型HPV感染,從而對患者將來發(fā)生宮頸病變的危險性進行預(yù)測,但還應(yīng)結(jié)合其他檢測才能判斷患者目前的病變程度,如細胞學(xué)、陰道鏡、病理學(xué)。HPV感染所引起的疾病的發(fā)展通常要經(jīng)過潛伏感染期、亞臨床感染期、臨床癥狀期和HPV相關(guān)腫瘤期。對于潛伏感染期和亞臨床感染期,PCR可以檢測到HPV的存在,但在感染初期,部分患者無細胞