革蘭陽性菌的鑒定操作

革蘭陽性菌的鑒定操作1整理課件

陽球G+c：葡萄球菌屬、微球菌屬、鏈球菌屬、腸革蘭陽性菌球菌屬等陽桿G+b：棒狀桿菌屬、李斯特氏菌屬、丹毒絲菌屬、分支桿菌屬、奴卡菌屬等2整理課件3整理課件需氧革蘭陽性球菌：觸酶葡萄球菌屬微球菌屬鏈球菌屬腸球菌屬G+球菌革蘭涂片陽性陰性七葉苷陽性、6.5％Nacl陽性腸球菌屬鏈球菌屬4整理課件

挑取單個菌落進行涂片固定、初染、酶染、脫色、復(fù)染注意：挑取時接種環(huán)輕碰菌落邊緣即可。

1：涂片

2：染色

5整理課件根據(jù)菌體特征作出初步鑒定假設(shè)鏡檢結(jié)果為革蘭氏陽性桿菌，那么在建議與解釋欄填寫“因NCCLS上無相應(yīng)的藥敏標準，請根據(jù)臨床病癥經(jīng)驗用藥，并考慮是否為污染菌。〞3：鏡檢革蘭陽性球菌6整理課件

原理：2H2O2

O2+2H2O注意：血瓊脂上菌落不宜作此試驗。4：觸酶試驗觸酶試驗〔Catalase〕：1、觸酶陽性，可初步判斷為葡萄球菌屬和微球菌屬;2、觸酶陰性，可初步判斷為鏈球菌屬和腸球菌屬7整理課件5：Staphaurex膠乳凝集試驗Staphaurex膠乳凝集試驗是一種鑒定金葡菌的快速、簡便的商品化直接凝集試驗。根本原理是在紙板或玻片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，然后用接種環(huán)挑取待鑒定的新鮮培養(yǎng)物參加混勻出現(xiàn)凝集塊現(xiàn)象為陽性。本法不僅可以檢測金葡菌的凝固酶而還可通過IgG抗體的FC段與金葡菌的A蛋白有特殊的親和力而檢測之。中等大小、黃或灰白，β溶血或不溶血的菌落，那么做Staphaurex膠乳凝集試驗：陽性、24hβ溶血，那么判斷為金黃色葡萄球菌；不溶血，那么API或上機。陰性報告凝固陰性葡萄球菌或APISTARPH、上機8整理課件5.API板條試驗5.葡萄糖發(fā)酵試驗5.β溶血菌落小、黃色菌落；鏡下呈四聯(lián)、八疊排列細菌，那么做葡萄糖發(fā)酵試驗：陽性那么轉(zhuǎn)為上一個步驟試驗；陰性報微球菌屬9整理課件6.桿菌肽試驗6.CAMP試驗6.Optochin試驗6.七葉苷NaCl試驗七葉苷試驗〔陰性或陽性〕6.5％Nacl試驗陰性：1.α溶血，做Optochin試驗：敏感且G+矛頭狀雙球菌、臍窩狀菌落，那么判斷為肺炎鏈球菌〔Optochin試驗抑菌圈的直徑≥14mm為陽性〕2.β溶血：2.1.桿菌肽試驗敏感，那么判斷為A群鏈球菌2.2.乳膠凝集或CAMP陽性，那么判斷為B群鏈球菌2.3.其它上機3.γ溶血那么上機10整理課件6.阿拉伯糖、山梨醇七葉苷試驗陽性6.5％Nacl試驗陽性，那么判斷為腸球菌屬：1.阿拉伯糖陰性、山梨醇陽性那么判斷為糞腸球菌2.阿拉伯糖陽性、山梨醇陰性那么判斷為屎腸球菌11整理課件葡萄球菌屬12整理課件葡萄球菌屬概述葡萄球菌屬〔Staphylococcus〕是一類觸酶試驗陽性的革蘭氏陽性球菌，包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中間型葡萄球菌屬、施氏葡萄球菌、路鄧葡萄球菌等32個種。因常堆聚成葡萄串狀，故名。葡萄球菌在自然界中分布廣泛，存在于空氣、水、塵埃及人體皮膚外表、鼻、咽等。多數(shù)為非致病菌。少數(shù)可導(dǎo)致疾病。13整理課件形態(tài)與染色球形或稍呈橢圓形，直徑0.4-1.2um，排列成葡萄球狀。葡萄球菌無鞭毛、不能運動，無芽孢，除少數(shù)菌株外一般不形成莢膜。革蘭染色為陽性，其衰老、死亡或被白細胞吞噬后某些菌株可被染成革蘭陰性。14整理課件金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落特征：光滑、完整微隆起、半透明，β-溶血，奶黃色、橙黃色、檸檬色、白色〔脂溶性色素〕菌落特征：菌落相對較小，2.5～6.0mm，取決于不同菌株，通常不產(chǎn)生色素，某些菌株產(chǎn)生黏液性常黏附在瓊脂外表菌落特征：菌落5～8mm大小，完整，有光澤，不透明、光滑，比前面提到菌種菌落較凸起，約一半菌株產(chǎn)色素，奶油、黃-橙色。培養(yǎng)特性15整理課件頭葡萄球菌孔氏葡萄木糖葡萄16整理課件金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌小、黃色菌落；鏡下呈四聯(lián)、八疊排列細菌

No中等大小、黃或灰白，β溶血或不溶血的菌落

API或上機

報微球菌屬

葡萄糖發(fā)酵報告凝固陰性葡萄球菌或API或上機+Staphaurex膠乳凝集葡萄球菌微球菌屬

－24hβ溶血+

－

－+

G+球菌觸酶+

上機主要病原菌：金黃色葡萄球菌其他：膿腫和嚴重傷口感染中分離的路鄧葡萄球菌；多次血培養(yǎng)中分離的凝固酶陰性葡萄球菌葡萄球菌17整理課件鏈球菌屬18整理課件鏈球菌屬概述鏈球菌屬〔Streptococcus〕是一群觸酶實驗陰性、呈鏈狀排列的革蘭氏陽性球菌，廣泛存在于自然界和人及動物糞便和健康人鼻咽部，可引起各種化膿性炎癥、猩紅熱、丹毒、新生兒敗血癥、腦膜炎、產(chǎn)褥熱以及鏈球菌變態(tài)反響性疾病等該菌屬種類繁多，目前臨床上仍沿用Lancefield血清學(xué)方法分為A、B、C、D、E、F、G群，或根據(jù)其在血平板上的溶血現(xiàn)象進行分類〔β溶血或完全溶血、α溶血或草綠色溶血、γ溶血或不溶血〕19整理課件

根據(jù)溶血現(xiàn)象分類

⑴α型溶血性鏈球菌

菌落周圍有不透明溶血環(huán)。多為條件性致病菌。⑵β型溶血性鏈球菌

菌落周圍形成完全透明的無色的溶血環(huán)。致病力強。⑶γ型鏈球菌

不產(chǎn)生溶血素，菌落周圍無溶血環(huán)，也稱為不溶血性鏈球菌。無致病性，常存在于乳類和糞便中，偶爾引起感染。20整理課件形態(tài)與染色球形或卵圓形，直徑0.6-1.0um，呈鏈狀排列，短者2-8個細菌組成，長者有20-30個細菌組成。局部幼齡培養(yǎng)物可見到透明質(zhì)酸形成的莢膜。無芽孢，無鞭毛，革蘭染色陽性。21整理課件肺炎鏈球菌菌落特征：生長在血瓊脂平板或哥倫比亞血平板上的菌落圓形，外表光滑、灰白色、邊緣整齊、半透明，開始扁平以后中心塌陷，呈臍窩狀，具體呈矛頭狀成雙排列。該菌Optochin敏感，膽汁溶菌試驗陽性。22整理課件臍窩狀菌落粘液狀菌落23整理課件原理：Optochin〔乙基氫化去甲奎寧的商品名〕可干擾肺炎鏈球菌葉酸的生物合成，抑制該菌的生長故肺炎鏈球菌對其敏感，而其他鏈球菌對其耐藥。Optochin試驗抑菌圈的直徑≥14mm為陽性O(shè)ptochin敏感試驗24整理課件臨床標本培養(yǎng)后混雜在口腔正常菌群中的化膿鏈球菌化膿性鏈球菌25整理課件桿菌肽〔Bacitracin〕試驗操作：K-B法貼桿菌肽紙片〔直徑6mm，0.04U/片〕，常規(guī)培養(yǎng)18-24h結(jié)果判讀：抑菌圈>10mm敏感。無乳鏈球菌金葡菌原理：細菌具有“CAMP〞因子，能促進葡萄球菌β溶血素的活性，使兩種細菌在劃線處呈現(xiàn)箭頭形透明溶血區(qū)。操作：血平板上待測菌與金葡菌垂直劃線，劃線之間留出0.5-1cm,不能相接。CAMP試驗26整理課件馬鏈球菌β溶血無乳鏈球菌27整理課件血清分群診斷：A、B、C、D、F、G28整理課件耐藥G+球菌觸酶A群鏈球菌桿菌肽乳膠凝集或CAMPBAP溶血

γ

β

α上機Optochin試驗肺炎鏈球菌上機敏感敏感陽性B群鏈球菌其他上機七葉苷：－或＋6.5％Nacl：－

－G+矛頭狀雙球菌、臍窩狀菌落鏈球菌屬29整理課件腸球菌屬30整理課件腸球菌屬概述腸球菌屬是一組主要存在于人類或動物腸道、具有共同生化特征的革蘭陽性球菌，歸屬倆球菌科。主要包括：糞腸球菌、屎腸球菌、鳥腸球菌、鉛黃腸球菌等。通常為Lancefield血清D群。1989年，依據(jù)Facklam和Collins的分類，腸球菌屬內(nèi)包括十二種及一個變異種。它們是：糞腸球菌〔E.faecalis〕屎腸球菌〔E.faecium)鳥腸球菌(E.avium)酪黃腸球菌(E.casseliflavus)堅忍腸球菌(E.durans)雞腸球菌E.galinarum)芒地腸球菌(E.mundii)惡臭腸球菌(E.maladoratum)希拉腸球菌(E.hirae)孤立腸球菌〔E.solitarius〕棉子糖腸球菌(E.raffinosus)假鳥腸球菌(E.pseudoavium)糞腸球變異株(E.faecalisvar)。31整理課件形態(tài)與染色腸球菌屬的細菌為革蘭氏陽性球菌，多數(shù)菌種成雙或呈短鏈狀排列；一般無芽孢，無莢膜，少數(shù)菌種有鞭毛，陳舊培養(yǎng)物或在厭氧狀態(tài)下有時呈革蘭氏陰性。32整理課件生化反響膽汁七葉苷試驗〔+〕6.