陽桃根多糖對糖尿病小鼠血清胰島素及胸腺、脾臟指數(shù)的影響

陽桃根多糖對糖尿病小鼠血清胰島素及胸腺、脾臟指數(shù)的影響

糖尿病是一種代謝性疾病，與胰島素的產(chǎn)生和作用異常有關(guān)，主要表現(xiàn)為糖皮質(zhì)激素。由于植物多糖在自然界分布廣泛,資源豐富,具有多種生物活性,毒副作用小,已成為天然降糖藥物開發(fā)的熱點之一。大量研究已表明許多植物多糖具有降血糖、抗氧化、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)活性。本文主要探討了陽桃根多糖(AverrhoacarambolaL.rootpolysaccharide,ACLRP)對鏈脲佐菌素致糖尿病小鼠血糖、胰島素及胸、脾指數(shù)的影響。1材料和方法1.1材料表面1.1.1陽桃根多糖的制備鏈脲佐菌素(STZ):深圳晶美公司進口分裝,ProductID:380-010-G001;格列本脲:浙江南洋藥業(yè)有限公司,規(guī)格2.5mg/片,批號:20060302;陽桃根多糖由本實驗組制備;血糖檢測試劑盒:四川省邁克科技有限責任公司,生產(chǎn)批號:0507031;胰島素放射免疫分析試劑盒:北京北方生物技術(shù)研究所,批號0710201。1.1.2動物昆明種小鼠,SPF級,體重(22±2)g,由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供,試驗動物生產(chǎn)許可證:SCXK(桂)2003-0003。1.1.3微波真空干燥機722S可見分光光度計(上海精密科學儀器有限責任公司);微波真空干燥機(WBZ-2,貴陽新奇微波工業(yè)有限責任公司);GC-1200γ放射免疫計數(shù)盒(中國科學技術(shù)大學科技實業(yè)總公司中佳光電儀器分公司)。1.2方法1.2.1陽桃根多糖的提取陽桃根碎片500g用70%乙醇提取后的殘渣,晾干,分別加5,4,3L水,回流提取3次,每次2h、1.5h、1h,濾過,合并濾液,離心,取上清液于真空微波干燥器中濃縮后加3倍體積的95%乙醇進行醇沉,攪拌混勻,4℃冰箱保存,靜置24h,重復(fù)2次,去上清液,沉淀依次用無水乙醇、丙酮洗滌5次,真空干燥得陽桃根多糖。1.2.2模型的確定和分組采用鏈脲佐菌素(150mg·kg-1)一次性腹腔注射禁食12h后的實驗小鼠,3d后,小鼠禁食12h,眼內(nèi)眥取血,采用葡萄糖氧化酶法測空腹血糖,選擇空腹血糖高于11.1mmol·L-1者確定為糖尿病模型。將造模成功的40只小鼠隨機分為模型對照組(Modelgroup)、格列本脲組(Glibenclamidegroup)、陽桃根多糖高、低劑量組(ACLRP-H,ACLRP-L);另隨機選擇10只健康小鼠做正常對照組(Normalgroup)。格列本脲組以25mg·kg-1.d-1灌胃,陽桃根多糖以高劑量249mg·kg-1.d-1、低劑量124.5mg·kg-1·d-1灌胃,正常對照組、模型對照組每天給予生理鹽水灌胃,各組均按10ml·kg-1給藥,每天1次,連續(xù)14d。1.2.3小鼠胰島素活性測定①空腹血糖(fastingbloodglucose,FBG)分別于灌胃給藥后第0,7,14天將小鼠禁食12h,眼內(nèi)眥取血,測定小鼠空腹血糖;②空腹血清胰島素(fastingbloodseruminsulin,FBSI)小鼠灌胃給藥d14,禁食12h,拔眼球取血,用競爭放射免疫法測定小鼠空腹血清胰島素水平,并計算出小鼠胰島素敏感指數(shù)(Insulinsensitivityindex,ISI)。③胸腺、脾指數(shù)(IndexofThymus、Spleen)給藥14d后,處死小鼠,解剖取胸腺和脾臟,用生理鹽水洗凈,濾紙擦干,稱重,分別計算胸腺、脾指數(shù)。采用統(tǒng)計軟件SPSS15.0對實驗數(shù)據(jù)進行分析,結(jié)果以表示,統(tǒng)計學處理用方差分析和t檢驗,P<0.05有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2.1降血糖作用比較與模型組比較,陽桃根多糖高、低劑量組有明顯的降血糖作用(P<0.01)。其血糖下降百分率分別達到35.35%和33.39%。結(jié)果見表1。2.2各組小鼠輸注后胰島素敏感指數(shù)的比較陽桃根多糖高、低劑量組小鼠的空腹血清胰島素明顯低于糖尿病模型組小鼠(P<0.01),而陽桃根多糖高、低劑量組小鼠的胰島素敏感指數(shù)明顯高于糖尿病模型組小鼠(P<0.01)。結(jié)果見表2。2.3小鼠臟器重量、尾腺指數(shù)、臟器指數(shù)變化的比較陽桃根多糖高、低劑量組小鼠的胸腺、脾臟重量明顯高于模型組小鼠的重量(P<0.01);其胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)也明顯高于模型組(P<0.01)。結(jié)果見表3。3陽桃根多糖對糖尿病小鼠血糖狀態(tài)的影響隨著人們生活水平的提高,人口老齡化以及肥胖發(fā)生率的增加,糖尿病的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。糖尿病可能引發(fā)多種并發(fā)癥,對人體的危害僅次于腫瘤和心血管疾病。國外發(fā)病高峰年齡是65歲以上,而在我國提早到45歲發(fā)病,呈低齡化趨勢。糖尿病的病因是復(fù)雜的,但歸根到底是由于胰島素絕對缺乏,或胰島素抵抗導(dǎo)致的相對缺乏而引起的。本研究利用STZ選擇性破壞小鼠胰島β細胞,導(dǎo)致機體內(nèi)胰島素分泌不足,使血糖值持續(xù)穩(wěn)定升高而建立糖尿病模型,探討陽桃根多糖對糖尿病小鼠的降血糖作用及其對胰島素、胸腺、脾臟的影響。結(jié)果表明糖尿病模型小鼠經(jīng)陽桃根多糖治療14d后,陽桃根多糖高、低劑量組對改善糖尿病小鼠的高血糖狀態(tài)有良好的作用;陽桃根多糖在一定程度上降低血清胰島素水平,提高機體胰島素敏感指數(shù),說明該藥具有降血糖作用,其機制可能為增強機體對胰島素的敏感性以及改善胰島β細胞的分泌。免疫力下降是糖尿病的顯著特征,在高血糖狀態(tài)下,機體對胰島多種抗原成分失去耐受,主要組織相容性復(fù)合物(MHC)-Ⅱ類分子與其處理的β細胞抗原共同激活輔助性T淋巴細胞中的Th1亞群,抑制Th2亞群,導(dǎo)致細胞因子不平衡,進而激活細胞毒性T細胞(CTL)、巨噬細胞、自然殺傷細胞(NK),從而產(chǎn)生氧自由基、一氧化氮等,對胰島β細胞產(chǎn)生直接毒性,最終加速糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展。胸腺是T淋巴細胞分化成熟的中樞免疫器官,而脾臟是體內(nèi)最大的淋巴器官,也是具有免疫活性的T、B細胞移居和接受抗原刺激后產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要場所,因此胸腺指數(shù)和脾指數(shù)是衡量免疫功能的重要指標。大量的研究已證明多糖具有肯定的抗腫瘤、激活免疫細胞、調(diào)節(jié)機體免疫功能的作用。本研究結(jié)果也證實了,經(jīng)陽桃根多糖治療后的糖尿病小鼠胸腺指數(shù)及脾指數(shù)均有明顯提高,說明陽桃根多糖對糖尿病小鼠的