造血細(xì)胞檢驗(yàn)方法：細(xì)胞化學(xué)染色

第二篇造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)

第二章造血基礎(chǔ)理論第三章造血細(xì)胞檢驗(yàn)方法第四章造血細(xì)胞檢驗(yàn)的臨床應(yīng)用第三章造血細(xì)胞檢驗(yàn)方法

第一節(jié)造血細(xì)胞形態(tài)學(xué)第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色第三節(jié)骨髓活體組織檢驗(yàn)（自學(xué)）第四節(jié)血細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)檢驗(yàn)（自學(xué)）第五節(jié)造血祖細(xì)胞培養(yǎng)檢驗(yàn)（自學(xué)）第六節(jié)血細(xì)胞遺傳學(xué)檢驗(yàn)（自學(xué)）第七節(jié)分子血液學(xué)檢驗(yàn)（自學(xué)）細(xì)胞化學(xué)染色的種類(lèi)鐵染色中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色過(guò)氧化物酶染色蘇丹黑染色酯酶染色過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)酸性磷酸酶染色急性白血病分型總結(jié)目的要求病例急性白血病分型急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）急性髓細(xì)胞白血?。ˋML,NALL）M0急性髓細(xì)胞白血病微小分化型M1急性粒細(xì)胞白血病未分化型M2急性粒細(xì)胞白血病部分分化型M3急性早幼粒細(xì)胞白血病M4急性粒單核細(xì)胞白血病M5急性單核細(xì)胞白血病M6急性紅白細(xì)胞白血病M7急性巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞化學(xué)染色的種類(lèi)鐵染色中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色過(guò)氧化物酶染色蘇丹黑染色酯酶染色過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)酸性磷酸酶染色急性白血病分型急白初診的常規(guī)染色：過(guò)氧化物酶染色特異性酯酶非特異性酯酶+NaF過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)三、過(guò)氧化物酶染色

peroxidase(POX)、myeloperoxidase(MPO)血細(xì)胞所含的POX主要為髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）1985年血液學(xué)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）推薦三種方法：二氨基聯(lián)苯胺法（DAB）、過(guò)氧化物酶氨基－甲基卡巴唑染色法及二鹽酸聯(lián)苯胺法。以前常用復(fù)方聯(lián)苯胺法（Washburn法）下一頁(yè)二氨基聯(lián)苯胺法（DAB）的原理

血細(xì)胞內(nèi)的POX，能催化二氨基聯(lián)苯胺（DAB）脫氫，形成金黃色不溶性沉淀，而DAB所脫的氫使H2O2還原成H2O二氨基聯(lián)苯胺法（DAB）復(fù)方聯(lián)苯胺法的原理

（Washburn法）四甲基聯(lián)苯胺聯(lián)苯胺藍(lán)→棕黑色↓H2O2H2O脫氫POX

復(fù)方聯(lián)苯胺法POX染色的結(jié)果判斷在細(xì)胞漿中出現(xiàn)陽(yáng)性的顆粒，根據(jù)陽(yáng)性物質(zhì)有無(wú)、多少分為（-）至（++++）結(jié)果應(yīng)報(bào)陽(yáng)性率（觀察100個(gè)白血病細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞所占的比例）及陽(yáng)性分布情況下一頁(yè)P(yáng)OX染色的結(jié)果分級(jí)（-）無(wú)陽(yáng)性顆粒。（±）顆粒細(xì)小、分布稀疏（+）顆粒較粗、常呈局灶性分布、約占胞漿1/4（++）顆粒粗大、分布較密、約占胞漿1/4～1/2（+++）顆粒粗大、團(tuán)塊狀分布、約占胞漿1/2～3/4（++++）布滿整個(gè)細(xì)胞、可覆蓋核上POX染色結(jié)果分級(jí)：各種細(xì)胞POX染色的結(jié)果粒細(xì)胞系統(tǒng)：早期原粒為陰性，隨著細(xì)胞的成熟陽(yáng)性率和陽(yáng)性程度逐漸增強(qiáng)單核細(xì)胞：早期單核細(xì)胞呈陰性，其余各期均呈陽(yáng)性，為（±）-（＋）白血病時(shí)Auer小體可呈陽(yáng)性吞噬細(xì)胞有時(shí)陽(yáng)性，其余細(xì)胞系均呈陰性POX－中性、嗜酸性中幼粒POX－單核細(xì)胞POX－淋巴、粒、巨核POX了－粒、紅、漿細(xì)胞POX染色的臨床意義是輔助判斷急性白血病細(xì)胞類(lèi)型的首選、最重要的細(xì)胞化學(xué)染色ALL：陰性（陽(yáng)性率＜3%）M3、M2b：強(qiáng)陽(yáng)性M2a、M1、M6、M4、M5:多數(shù)陽(yáng)性POX染色陽(yáng)性為急性髓細(xì)胞白血??！POX－ALL急性淋巴細(xì)胞白血病POX-M5急性單核細(xì)胞白血病POX-M1急性粒細(xì)胞白血病POX-M2急性粒細(xì)胞白血病POX-M3急性早幼粒細(xì)胞白血病POX-M3-2急性早幼粒細(xì)胞白血病二、蘇丹黑染色法

SudanblackB（SB）原理：細(xì)胞漿內(nèi)的中性脂肪、類(lèi)固醇、磷脂+蘇丹黑→脂類(lèi)物質(zhì)被染成黑色結(jié)果分級(jí)：基本同POX染色臨床意義：基本同POX染色。但蘇丹黑比POX更為敏感，但特異性差一些SB染色－M3急性早幼粒細(xì)胞白血病SB染色－M5急性單核細(xì)胞白血病六、酯酶染色------種類(lèi)不同血細(xì)胞中所含酯酶的成分不同根據(jù)酯酶特異性高低分為：特異性酯酶（specificesterase,SE）非特異性酯酶（nonspecificesterase,NSE）特異性酯酶就是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色非特異性酯酶的種類(lèi)有多種，根據(jù)pH值不同分為酸性：酸性α-醋酸萘酚酯酶中性：α-醋酸萘酚酯酶、醋酸AS-D萘酚酯酶等堿性：α-丁酸萘酚酯酶NAS-DCE幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞、特異性高。因此又稱(chēng)為“粒細(xì)胞酯酶”、“特異性酯酶”氯乙酸ASD萘酚NAS-DCEASD萘酚重氮鹽有色沉淀1．氯乙酸ASD萘酚酯酶染色

（naphytholAS-Dchloroacetateesterasestain，NAS-DCE）

NAS-DCE的正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

粒系：原粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)或陽(yáng)性反應(yīng),自早幼粒細(xì)胞至成熟中性粒細(xì)胞均為陽(yáng)性反應(yīng)，EOS陰性或弱陽(yáng)性,BAS陽(yáng)性單系：個(gè)別可呈弱陽(yáng)性反應(yīng)其他：淋巴、漿、幼紅細(xì)胞和血小板均呈陰性反應(yīng)

NAS-DCE的臨床意義主要用于輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類(lèi)型急性粒細(xì)胞白血?。撼赎?yáng)性或少數(shù)陰性急性早幼粒細(xì)胞白血?。撼蕪?qiáng)陽(yáng)性急性單核細(xì)胞白血病：呈陰性，少數(shù)弱陽(yáng)性急粒-單核細(xì)胞白血?。毫Ｏ店?yáng)性，單系陰性急性淋巴細(xì)胞白血?。撼赎幮?/p>

NAS-DCE染色：1中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽(yáng)性；2淋巴細(xì)胞，呈陰性；4單核細(xì)胞，呈陰性；5幼紅細(xì)胞，呈陰性NAS-DCE染色：M1型中的1原始粒細(xì)胞細(xì)胞，呈陽(yáng)性；其他均呈陰性NAS-DCE染色：M3--早幼粒細(xì)胞均呈強(qiáng)陽(yáng)性，并可見(jiàn)柴捆細(xì)胞中的棒狀小體也呈陽(yáng)NAS-DCE染色：M3-NAS-DCE染色：M5--呈強(qiáng)陽(yáng)性為中性成熟粒細(xì)胞，其他原幼單核細(xì)胞均呈陰性單核細(xì)胞系統(tǒng)的陽(yáng)性可被氟化鈉抑制，通常同時(shí)做氟化鈉抑制試驗(yàn)

醋酸ASD萘酚NAS-DAEASD萘酚重氮鹽有色沉淀2．醋酸AS-D萘酚酯酶染色

naphythyolAS-Dacetateesterasestains，NAS-DAE氟化鈉抑制率的計(jì)算：氟化鈉試驗(yàn)抑制率=抑制前陽(yáng)性率或陽(yáng)性積分-抑制后陽(yáng)性率或陽(yáng)性積分抑制前陽(yáng)性率或陽(yáng)性積分氟化鈉抑制試驗(yàn)的抑制率大于0.50為抑制

NAS-DAE染色的正常血細(xì)胞染色反應(yīng)

粒系：常陽(yáng)性，此反應(yīng)不被氟化鈉抑制單系：陽(yáng)性（常較強(qiáng)），此反應(yīng)能被氟化鈉抑制淋系：陰性或弱陽(yáng)性，此反應(yīng)不被氟化鈉抑制紅系：早期可呈陽(yáng)性，隨著成熟而減弱，巨系：巨核細(xì)胞和血小板為陽(yáng)性反應(yīng)

NAS-DAE染色的臨床意義用以輔助鑒別急性白血病的細(xì)胞類(lèi)型急性粒細(xì)胞白血?。宏?yáng)性，不被NaF抑制急性早幼粒細(xì)胞白血病:強(qiáng)陽(yáng)性，不被NaF抑制急性單核細(xì)胞白血?。宏?yáng)性(常較強(qiáng))，被NaF抑制急性粒單核細(xì)胞白血?。宏?yáng)性，被NaF部分抑制急性淋巴細(xì)胞白血病：弱陽(yáng)性或陽(yáng)性，不被NaF抑制NAS-DAE染色:1中性成熟粒細(xì)胞，呈陽(yáng)性；2單核細(xì)胞，陽(yáng)性較強(qiáng)；3中幼紅細(xì)胞，呈陰性NAS-DAE染色:中性中幼粒細(xì)胞，呈陽(yáng)性NAS-DAE染色:M5呈強(qiáng)陽(yáng)性NAS-DAE染色:M5被氟化鈉抑制NAS-DAE染色:M3強(qiáng)陽(yáng)性，加氟化鈉不抑制NAS-DAE染色:ALL呈弱陽(yáng)性3．α-丁酸萘酚酯酶染色—原理

α-naphtholbutyrateesterase，α-NBE)

血細(xì)胞內(nèi)的α-丁酸萘酚酯酶在堿性條件下,將基質(zhì)液中的α-丁酸萘酚水解,釋出α-萘酚,α-萘酚與基質(zhì)液中的堅(jiān)牢紫醬GBC偶聯(lián),形成不溶性紅色沉淀,定位于胞質(zhì)內(nèi)

α-NBE染色的正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)粒系：各期粒細(xì)胞均為陰性反應(yīng)單系：原單為陰性或陽(yáng)性，幼單和單核為陽(yáng)性，此反應(yīng)可被NaF抑制，組織細(xì)胞也可陽(yáng)性,但不被NaF抑制淋系：外周血的T淋巴細(xì)胞可呈致密的局限性點(diǎn)狀陽(yáng)性反應(yīng)，B淋巴細(xì)胞為陰性反應(yīng)，非T非B細(xì)胞也可出現(xiàn)散在顆粒狀陽(yáng)性反應(yīng)其它:如巨核細(xì)胞和漿細(xì)胞為陰性或弱陽(yáng)性反應(yīng)

α-NBE染色的臨床意義急粒：陰性急單：可呈陽(yáng)性反應(yīng)急粒單：部分白血病細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)，部分白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng)急淋：陰性急性單核細(xì)胞白血病α-NBE染色五、過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)(糖原染色)－－原理

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）

過(guò)碘酸(periodicacid)乙二醇基雙醛基(-CHOH-CHOH)(-CHO-CHO)

有色品紅無(wú)色品紅（shiff）PAS正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)-紅色粒系：分化好的原粒至中性分葉核粒細(xì)胞均呈陽(yáng)性反應(yīng)，并隨著細(xì)胞的成熟而逐漸增強(qiáng)，陽(yáng)性呈彌散性、細(xì)顆粒狀；嗜酸性顆粒呈陰性（間質(zhì)陽(yáng)性），嗜堿性顆粒呈陽(yáng)性單系分化差的原始單核細(xì)胞呈陰性，其他陽(yáng)性，絕大多數(shù)陽(yáng)性呈細(xì)顆粒狀淋系：大多數(shù)呈陰性，陽(yáng)性率常＜20％，呈粗顆?；驂K狀巨系均呈陽(yáng)性，呈顆粒狀或塊狀紅系：均呈陰性PAS染色2：小淋巴細(xì)胞呈陽(yáng)性，呈顆粒狀（較粗）PAS染色1：1中性中幼粒細(xì)胞，呈彌散及顆粒狀陽(yáng)性（較弱）；2中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽(yáng)性；3幼紅細(xì)胞，呈陰性；4淋巴細(xì)胞，呈陰性巨核細(xì)胞呈陽(yáng)性PAS的臨床意義鑒別紅系良惡性疾?。杭t系惡性疾病中紅系可陽(yáng)性（包括紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征），紅系良性基本陰性輔助鑒別急性白血病類(lèi)型：ALL呈粗顆粒狀或塊狀；急粒呈彌散紅色或細(xì)顆粒狀；急單：呈細(xì)顆粒狀其他細(xì)胞：轉(zhuǎn)移性腺癌、戈謝細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性，尼曼-匹克細(xì)胞、Reed-Sternberg細(xì)胞陰性或弱陽(yáng)性PAS染色：1和2為有核紅細(xì)胞，呈陽(yáng)性；其他有核紅細(xì)胞呈陰性PAS染色：原始及幼稚淋巴細(xì)胞均陽(yáng)性，呈粗顆粒狀、、塊狀陽(yáng)性ALL：粗顆粒狀PAS染色：淋巴瘤細(xì)胞均陽(yáng)性，呈粗顆粒狀、塊狀陽(yáng)性淋巴瘤：粗顆?；驂K狀PAS染色：急單，細(xì)顆粒狀急單：細(xì)顆粒狀PAS染色：M3PAS染色：M3M3：彌散陽(yáng)性PAS染色：急粒PAS染色：呈彌散陽(yáng)性急粒：彌散陽(yáng)性PAS染色：PAS染色：M3

尼曼-皮克細(xì)胞呈弱陽(yáng)性弱陽(yáng)性尼曼-匹克細(xì)胞細(xì)胞化學(xué)染色總結(jié)(1)對(duì)于不明原因貧血的初診患者：常規(guī)做鐵染色，必要時(shí)還應(yīng)做中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色和過(guò)碘酸－雪夫反應(yīng)急性白血?。撼Ｒ?guī)做過(guò)氧化物酶染色、特異性酯酶染色、非特異性酯酶染色及過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)等慢性粒細(xì)胞白血病：常規(guī)做NAP染色四種常見(jiàn)類(lèi)型白血病的細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果M3M1、M2aM5

ALLPOX染色+++～+++++*或--或+**-SB染色+++～+++++*或--或+**-，個(gè)別+NAS-DCE染色+++～+++++*或--，個(gè)別+**-NAS-DAE染色+++～++++-或+*+～++++-或+NAS-D