口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)進(jìn)展

口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)進(jìn)展

溶解試驗(yàn)技術(shù)是評(píng)價(jià)口服固體制劑的內(nèi)部質(zhì)量的重要手段。該試驗(yàn)不僅可以為建立內(nèi)部和外部相關(guān)數(shù)據(jù)提供依據(jù)，而且可以作為一種簡單有效的方法來評(píng)估口服固體制劑的質(zhì)量。在多種pH溶出介質(zhì)中溶出曲線的測(cè)定是先進(jìn)國家藥物審評(píng)機(jī)構(gòu)評(píng)價(jià)口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要手段。該試驗(yàn)可用于評(píng)估不同來源的同一制劑內(nèi)在質(zhì)量差異。日本自1998年開始實(shí)施“藥品品質(zhì)再評(píng)價(jià)工程”,陸續(xù)出版了《醫(yī)療用醫(yī)薬品品質(zhì)情報(bào)集》(即日本參比制劑目錄、橙皮書、OrangeBook),其中詳細(xì)羅列了所收載制劑的四條標(biāo)準(zhǔn)溶出曲線。美國FDA藥品審評(píng)中心的仿制藥辦公室屬下的生物等效部也于2004年1月起,在其官方網(wǎng)站上推出了“固體制劑溶出曲線數(shù)據(jù)庫”。目前我國雖未推出“溶出曲線數(shù)據(jù)庫”,但對(duì)口服固體制劑多條溶出曲線的測(cè)定已愈發(fā)受到關(guān)注與重視。本文在參照國際藥物聯(lián)合會(huì)(FIP)頒布的《口服固體制劑溶出度試驗(yàn)指導(dǎo)原則》、日本厚生勞動(dòng)省頒布的《仿制藥生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》、FDA頒布的《常規(guī)口服固體制劑溶出度試驗(yàn)工業(yè)指南》、美國藥典31版《溶出度試驗(yàn)驗(yàn)證法:研究與建立》(附錄1092)和歐洲藥典2008年版《溶出度試驗(yàn)法》(附錄溶出度試驗(yàn)法2.9.3)基礎(chǔ)上,詳細(xì)闡述了如何采用多條溶出曲線評(píng)價(jià)固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的具體試驗(yàn)步驟,希望能通過此種檢測(cè)手段找到國產(chǎn)固體制劑與進(jìn)口原研制劑的差距,為臨床療效的差異提供佐證,為國家相關(guān)技術(shù)法規(guī)的擬定與完善、為企業(yè)切實(shí)有效地提高藥品質(zhì)量提供依據(jù)。1采用多孔曲線分析體系1.1原研制劑為參比制劑由于原研制劑一般皆為國際制藥公司開發(fā)研制,在質(zhì)量水平及其控制上有嚴(yán)格的要求。我國絕大多數(shù)藥物制劑均為仿制藥,只有質(zhì)量和原研制劑相同或相似,才能保證其用藥的有效性和安全性。其中溶出曲線的對(duì)比,也應(yīng)以原研制劑作為“參比”。所以,試驗(yàn)前一定要獲得原研制劑,以其作為參比制劑進(jìn)行測(cè)定。對(duì)于參比制劑的遴選,原則上應(yīng)從多批號(hào)樣品中擷取一“標(biāo)準(zhǔn)批號(hào)”,由于客觀條件的限制,建議最低要求應(yīng)獲取一個(gè)在有效期內(nèi)批號(hào)的樣品進(jìn)行研究。1.2溶解介質(zhì)的選擇1.2.1溶劑ph酸性藥物制劑:pH分別為1.0或1.2、5.5~6.5、6.8~7.5和水。中性或堿性藥物/包衣制劑:pH分別為1.0或1.2、3.0~5.0、6.8和水。難溶性藥物制劑:pH分別為1.0或1.2、4.0~4.5、6.8和水。腸溶制劑:pH分別為1.0或1.2、6.0、6.8和水。以上根據(jù)藥物酸堿性而設(shè)定的相應(yīng)pH,參照了日本《仿制藥生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》中的溶出度研究內(nèi)容。其中對(duì)難溶性藥物制劑則是根據(jù)美國FDA公布的《仿制藥指導(dǎo)原則》,但本文將4.0擴(kuò)展到了4.5。1.2.2緩慢釋放控制pH分別為1.0或1.2、3.0~5.0、6.8~7.5和水。1.2.3不同ph的溶劑對(duì)樣品穩(wěn)定性考察藥物pKa小于3.0的可看作酸性藥物,大于或等于3.0的可看作中/堿性藥物。在進(jìn)行溶出曲線測(cè)定之前,應(yīng)首先測(cè)定主成分在各種溶出介質(zhì)中的溶解度,以確定該制劑是否為“pH依賴性制劑”。日本橙皮書中收載有這些數(shù)據(jù)。試驗(yàn)前還應(yīng)進(jìn)行原料藥在不同pH溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性考察,以確保試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確測(cè)定。日本橙皮書中收載有該部分內(nèi)容。以上含有pH范圍的,可分別按0.5或1.0間隔測(cè)試。如溶出曲線差異較大,應(yīng)考慮分別試驗(yàn);如無明顯差異,酌情選擇即可。美國一般采用1.0、4.5、6.8和水,日本一般采用1.2、4.0、6.8和水。無論何種制劑都不宜采用pH8.0以上的介質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)。如確有必要,應(yīng)提供充足理由。FDA公布的溶出度數(shù)據(jù)庫中,只有阿維A(acitretin)膠囊采用pH9.6溶出介質(zhì)。但對(duì)于含有明膠交聯(lián)的制劑,由于此類制劑的生物利用度與交聯(lián)度呈正相關(guān),在溶出介質(zhì)中加入適量酶,有助于評(píng)價(jià)該制劑的溶出度。建議研究時(shí)可考慮添加酶以及酶的種類與濃度。1.3中溶劑的制備1.3.1鹽酸溶液配制pH1.0~2.2鹽酸溶液:精密量取濃鹽酸9.0ml,加水稀釋至1000ml,搖勻,即得pH1.0的鹽酸溶液。其他pH鹽酸溶液:按表1量取0.2mol/L鹽酸(精密量取濃鹽酸18.0ml,加水稀釋至1000ml,搖勻,即得)適量,加水稀釋至200ml,搖勻,即得pH1.2~2.2鹽酸溶液。pH4.5~8.0磷酸鹽緩沖液:精密稱取磷酸二氫鉀6.80g,按表3加入0.2mol/L氫氧化鈉溶液(取8.0g氫氧化鈉,加水溶解并稀釋至1000ml,即得)適量,加水溶解并稀釋至1000ml,搖勻,即得。1.3.2堿/鄰苯二甲酸氫鉀溶液法pH1.0~2.2鹽酸/氯化鉀溶液:除需加入氯化鉀0.75g外,其他配制方法同歐洲藥典。pH2.2~4.0鹽酸/苯二甲酸氫鉀溶液:取苯二甲酸氫鉀2.04g,按表4加入0.2mol/L鹽酸適量,加水溶解并稀釋至200ml,搖勻,即得。pH4.2~5.8氫氧化鈉/鄰苯二甲酸氫鉀溶液:取鄰苯二甲酸氫鉀2.04g,按表5加入0.2mol/L氫氧化鈉溶液適量,加水溶解并稀釋至200ml,搖勻,即得。pH5.8~8.0氫氧化鈉/磷酸二氫鉀溶液:同歐洲藥典。pH8.0~10.0氫氧化鈉/氯化鉀/硼酸溶液:取氯化鉀0.75g與硼酸0.62g,按表6加入0.2mol/L氫氧化鈉溶液適量,加水溶解并稀釋至200ml,搖勻,即得。1.3.3ph對(duì)磷酸氫二鈉溶液配制pH1.2溶液:取氯化鈉2.0g,加水適量溶解后,加鹽酸7ml,再加水稀釋至1000ml,混勻,即得。pH4.0溶液:將0.05mol/L乙酸溶液與0.05mol/L乙酸鈉溶液按16.4∶3.6比例混合,即得。pH3.0~6.0介質(zhì)(除4.0外):取十二水合磷酸氫二鈉17.91g,加水溶解并稀釋至1000ml,得0.05mol/L磷酸氫二鈉溶液。另取一水合枸櫞酸5.25g,加水溶解并稀釋至1000ml,得0.025mol/L枸櫞酸溶液。用該枸櫞酸溶液調(diào)節(jié)上述磷酸氫二鈉溶液至所需pH即可。pH6.8磷酸鹽緩沖液:取磷酸二氫鉀1.7g和無水磷酸氫二鈉1.775g,加水溶解并定容至1000ml,即得。1.3.4中國的藥房配制方法詳見中國藥典2005年版附錄。1.3.5討論和解釋建議根據(jù)原研制劑生產(chǎn)廠商的國別選取溶出介質(zhì)配制法。各介質(zhì)配制pH誤差應(yīng)控制在±0.05。1.4中溶解曲線的測(cè)量1.4.1緩/控釋制劑的確定對(duì)于測(cè)定時(shí)間點(diǎn),普通制劑與腸溶制劑可分別為5、10、15、20、30、45、60、90、120min,此后每隔1h測(cè)定。緩/控釋制劑可為15、30、45、60、90min和2、3、4、5、6、8、10、12、24h。對(duì)于結(jié)束時(shí)間點(diǎn),在酸性介質(zhì)(pH1.0~3.0)中最長測(cè)定時(shí)間為2h;在其他各pH介質(zhì)中普通制劑與腸溶制劑均為6h,緩/控釋制劑為24h。但當(dāng)連續(xù)兩點(diǎn)溶出率均達(dá)90%(緩/控釋制劑為85%),且差值小于5%時(shí),試驗(yàn)則可提前結(jié)束。1.4.2生產(chǎn)規(guī)模與數(shù)量的確定測(cè)定時(shí)間點(diǎn)的擬定:研究表明,相當(dāng)一部分原研制劑的溶出曲線具有延遲、拐點(diǎn)等現(xiàn)象(如辛伐他汀片原研制劑就有5~10min的延遲釋放)。提示:在仿制研發(fā)與質(zhì)量評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)加以注意,故以上測(cè)定時(shí)間點(diǎn)擬定得較為“緊湊”。但當(dāng)比較時(shí)間點(diǎn)確定后,對(duì)于仿制制劑,則可僅進(jìn)行比較時(shí)間點(diǎn)的測(cè)定。試驗(yàn)樣品的生產(chǎn)規(guī)模:由于口服固體制劑的生物利用度與生產(chǎn)規(guī)模密切相關(guān),故一般情況下應(yīng)不小于今后工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模的1/10或不小于10萬個(gè)單位。測(cè)定數(shù)量:為達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)要求,規(guī)定每個(gè)品種的測(cè)定皆應(yīng)選取12個(gè)樣本。但鑒于目前溶出儀尚未有12個(gè)溶出杯裝置,且考慮到工作量等諸多因素,一般測(cè)定6個(gè)樣本即可。1.5溶解試驗(yàn)參數(shù)的確定1.5.1腸道振動(dòng)強(qiáng)度對(duì)片劑,建議采用槳板法、50r/min;對(duì)膠囊劑,建議采用轉(zhuǎn)籃法、50r/min(如采用槳板法,則建議采用沉降籃)。通常認(rèn)為50r/min與中老年人體內(nèi)胃腸道蠕動(dòng)強(qiáng)度基本一致。除非特指或特殊制劑,不宜采用更慢轉(zhuǎn)速。一般采用大杯法,介質(zhì)體積為900~1000ml,不建議采用小杯法。如溶出樣品濃度過低,可采用加大進(jìn)樣量、同時(shí)加大流動(dòng)相中有機(jī)相比例,使被測(cè)組分峰保留時(shí)間縮短、峰形尖銳,以提高檢測(cè)靈敏度。1.5.2表面活性劑添加量選擇在某溶出介質(zhì)中,當(dāng)結(jié)束時(shí)間點(diǎn)溶出量仍達(dá)不到普通制劑90%、緩控釋制劑85%時(shí),則可酌情放寬溶出度試驗(yàn)參數(shù)。建議先增加轉(zhuǎn)速至75r/min,如未果,則可在溶出介質(zhì)中添加表面活性劑,添加濃度應(yīng)以0.01%(w/v)為起點(diǎn)、逐步增加,不建議采用1.0%以上濃度。如仍未達(dá)標(biāo),則再增加轉(zhuǎn)速至100r/min,但絕不允許添加有機(jī)溶劑。因?yàn)檫@將嚴(yán)重背離體內(nèi)外相關(guān)性原則,同時(shí)大大降低區(qū)分效應(yīng)。添加表面活性劑時(shí),應(yīng)注意不同來源試劑可能會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果帶來顯著性差異的情況,尤其是在使用十二烷基磺酸鈉時(shí),故建議在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中注明試劑來源,以使試驗(yàn)重現(xiàn)。1.6中溶解曲線的測(cè)量1.6.1多波長法hplc法采用紫外法測(cè)定時(shí),由于存在著輔料、膠囊殼等諸多因素的干擾,尤其在短波長(低于230nm)處,建議采用兩點(diǎn)相減法,即一波長為被測(cè)組分最大吸收波長,另一波長為遠(yuǎn)端無吸收波長。該法可大大降低輔料干擾,并在日本橙皮書中廣泛使用。當(dāng)以上方法無法排除測(cè)定干擾,或吸光度低于0.25(即使采用5cm長距離測(cè)定池),建議采用HPLC法。無論采用何法測(cè)定,皆建議對(duì)照品溶液濃度配制成50%~60%釋放量,以兼顧溶出液的不同濃度,盡可能縮小外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定誤差。1.6.2溶出液用量的測(cè)定采用一個(gè)濾膜即可,可大大提高工作效率,最大程度排除濾膜吸附的干擾。按規(guī)定,溶出液取出后應(yīng)過濾,但考慮到濾膜吸附的影響(特別是經(jīng)微粉化處理的小規(guī)格難溶藥物制劑),建議:(1)如采用HPLC法測(cè)定,建議溶出液離心后,取上清液測(cè)定。甚至直接置液相小瓶中,靜置后進(jìn)樣。這樣,便可僅取溶出液2ml,該體積相對(duì)于整個(gè)溶出液(900~1000ml)體積的影響很小,故可省略其后的結(jié)果累積校正。(2)如采用UV法測(cè)定,由于每一時(shí)間點(diǎn)均應(yīng)至少棄去5ml初濾液,故抽取體積應(yīng)不少于10ml。由于體積較大,則應(yīng)進(jìn)行結(jié)果累積校正,否則不利于準(zhǔn)確判斷。1.7累積釋放校正計(jì)算公式的公式為多次取樣時(shí),可采取及時(shí)補(bǔ)充同體積同溫度溶出介質(zhì),亦可采取不補(bǔ)液兩種方式,但必須保證每次抽取體積的固定性。累積校正計(jì)算公式如下:1.7.1制劑標(biāo)準(zhǔn)量l/v單位各時(shí)間點(diǎn)校正后的累積溶出量(%)=其中Cn為各時(shí)間點(diǎn)取出后的樣品濃度(即稀釋前的);L為制劑標(biāo)示量(L/V2單位需與Cn一致);V1為各時(shí)間點(diǎn)固定取樣體積;V2為溶出介質(zhì)體積。該公式如采用各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得釋放量表示,則可演變?yōu)?各時(shí)間點(diǎn)校正后的累積溶出量(%)=其中An為各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得溶出量。1.7.2不補(bǔ)充液體各時(shí)間點(diǎn)校正后的累積溶出量(%)=1.8溶出量在65%緩控釋制劑80%以上的時(shí)間點(diǎn)普通制劑如15min內(nèi)溶出量達(dá)85%以上,則無需進(jìn)行曲線比較。此時(shí),仿制制劑亦應(yīng)滿足此條件。只要15min時(shí)溶出量未達(dá)85%以上,需進(jìn)行溶出曲線的比較。溶出量在85%(緩控釋制劑80%以上)以上的時(shí)間點(diǎn)僅能選取一個(gè);且由于所采用的相似因子比較法——f2因子法計(jì)算結(jié)果有依賴于比較時(shí)間點(diǎn)個(gè)數(shù)的特性,故建議選取溶出量間隔相近的4~5個(gè)(普通制劑)或4~6個(gè)(緩控釋制劑)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算比較,但這些時(shí)間點(diǎn)的間隔無需相等。如按“1.5.2”項(xiàng)下試驗(yàn)后,最終溶出量仍未達(dá)到普通制劑90%、緩控釋制劑85%時(shí),不建議再采用更為極端的條件。此時(shí),依據(jù)最終測(cè)定結(jié)果,選取溶出量間隔相近的4個(gè)時(shí)間點(diǎn)計(jì)算比較即可。1.9結(jié)果變異系數(shù)的判定所選用的第一時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果變異系數(shù)應(yīng)不超過20%,自第二時(shí)間點(diǎn)至最后時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果變異系數(shù)均應(yīng)不得過10%。若超出,應(yīng)從儀器的適用性予以考慮解決,如增加轉(zhuǎn)速或增加表面活性劑濃度,直至滿足精密度要求。2參比制劑用量及生產(chǎn)規(guī)模通過以上對(duì)參比制劑的測(cè)定,確立“溶出曲線測(cè)定時(shí)間點(diǎn)”后,在這些時(shí)間點(diǎn)分別測(cè)定仿制制劑。仿制制劑的含量與參比制劑的差值應(yīng)在5%以內(nèi),且所選用的樣品應(yīng)在重量/裝量差異所規(guī)定范圍的1/2以內(nèi),以盡可能排除因個(gè)體差異給溶出度試驗(yàn)數(shù)據(jù)帶來的影響。其生產(chǎn)規(guī)模亦應(yīng)同參比制劑。如所選時(shí)間點(diǎn)的溶出結(jié)果變異系數(shù)超出規(guī)定,已說明該廠家產(chǎn)品批內(nèi)差異的不良波動(dòng)性。此時(shí)則無需再進(jìn)行批間差異比較,但仍需計(jì)算出均值用于與參比制劑的比較。3劑間比較時(shí)的評(píng)估目前,日本和美國官方皆規(guī)定采用相似因子比較法——f1因子和f2因子法進(jìn)行溶出曲線的比較。具體計(jì)算公式如下:當(dāng)用于不同來源制劑間比較時(shí),?1因子應(yīng)介于?2因子應(yīng)≥50;當(dāng)用于