酶活性的測定

第四章：酶學(xué)分析技術(shù)第三節(jié)酶活性的測定1精選ppt酶具有高效性酶的催化效率一般是無機催化劑的

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～1013倍。2精選ppt酶具有專一性酶的專一性建立在酶結(jié)構(gòu)的專一性上3精選ppt影響酶活性測定的因素一、標(biāo)本1、溶血紅細(xì)胞中某些酶的活性比血清高。2、抗凝劑某些抗凝劑可抑制酶的活性。因此一般都采用血清做標(biāo)本，確實需要使用血漿的，那么使用肝素抗凝。3、樣品存放時間各種血清酶的穩(wěn)定性不同，故而存放時間及存放方法不同都會影響到酶的活性。4精選ppt第三節(jié)、影響酶活性測定的因素二、測定條件酶活性易受到條件如溫度、PH、底物濃度等影響。因此，在酶活性測定時，要控制在最正確條件下進行。這樣，不僅酶的活性最高，相對誤差最小，而且酶活性受測定條件變化的影響也小。在此主要介紹底物濃度對酶活性影響及反映相互關(guān)系的米氏方程。5精選ppt6精選ppt

Vmax〔S〕v=—————〔S〕+Km上式中v代表反響速度，Vmax代表最大反響速度，〔S〕代表底物濃度，Km稱為米氏常數(shù)。米-曼氏方程：7精選ppt〔Vmax-v〕〔S〕Km=———————v當(dāng)v=1/2Vmax時，Km=〔S〕。因此Km值為反響速度相當(dāng)于最大反響速度一半時的底物濃度。Km值是酶的特征常數(shù)，具有重要的應(yīng)用價值。由米-曼氏方程可以導(dǎo)出：8精選pptKm值是酶的特征常數(shù)，在反響條件一定時，只與酶的種類和底物的性質(zhì)有關(guān)，與酶的濃度無關(guān)。不同種類的酶其Km值不同，對于一種未知的酶，可在規(guī)定的條件下測定其Km值加以鑒定。Km值的應(yīng)用9精選ppt測定酶活性時本卷須知：1、要規(guī)定反響條件2、標(biāo)本要新鮮3、配制的底物濃度應(yīng)準(zhǔn)確且足夠大，底物溶液中應(yīng)參加不抑制該酶活性的防腐劑并冰箱保存，以防止底物被分解或變質(zhì)4、在測定過程中所用器材應(yīng)絕對清潔，不應(yīng)含有酶的抑制物5、使酶活性測定在線性期內(nèi)進行10精選ppt測定酶活性時本卷須知：6、應(yīng)正確設(shè)計適當(dāng)?shù)膶φ展埽韵鶞y結(jié)果中非酶反響生成的那一局部。測定管中的產(chǎn)物量必須減去對照管中的產(chǎn)物量才是有酶催化生成的產(chǎn)物量。〔1〕樣品對照：只加樣品不加底物〔2〕底物對照：不加樣品只加底物〔3〕時間對照：含有酶和底物但反響時間為零的對照管；也可以先用蛋白沉淀劑或其他試劑停止反應(yīng)后，再加底物予以抵銷。11精選ppt酶的區(qū)域化分布表7-3診斷常用血清酶的來源血清酶符號來源鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶OCT肝卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶LCAT

肝谷氨酸脫氫酶GLDH肝山梨醇脫氫酶SDH肝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT肝、腎、心異檸檬酸脫氫酶ICD肝、胎盤、心

-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶-GT

肝、膽、腎、小腸5ˊ-核苷酸酶5ˊ-NT肝、膽道單胺氧化酶MAO肝、腎、腦天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST心、肝、骨骼肌肌酸激酶CK骨骼肌、心、腦乳酸脫氫酶LDH心、腎、骨骼肌、肝、肺堿性磷酸酶ALP小腸、胎盤、肝、腎酸性磷酸酶ACP前列腺、紅細(xì)胞、血小板淀粉酶AMS胰、唾液腺脂肪酶LPS胰12精選ppt酶活性測