DB3715-T 41-2023 羊肚菌液體菌種制備技術規(guī)程

65.020CCS

B

053715 DB

3715/T

—2023羊肚菌液體菌種制備技術規(guī)程 聊城市市場監(jiān)督管理局 發(fā)

布DB

3715/T

41—2023 本文件按照GB/T

—《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任。本文件由聊城市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出、組織實施并歸口。中心、山東蒙恩現(xiàn)代有限公司。張素芳、王遠亮

、趙岑、何小春、蘇靜、王鳳改、王光勇、付成龍。DB

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41—20231 范圍本文件規(guī)定了羊肚菌液體菌種制備的術語和定義、生產(chǎn)要求、生產(chǎn)技術和檔案管理等要求。本文件適用于羊肚菌液體菌種的制備。2 規(guī)范性引用文件文件。GB

150 壓力容器GB

5749 生活飲用水衛(wèi)生標準GB

50073 潔凈廠房設計規(guī)范NY/T

食用菌菌種生產(chǎn)技術規(guī)程NY/T

1935 食用菌栽培基質質量安全要求3 術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1液體菌種發(fā)酵罐

liquid

strain

fermentation

食用菌液體菌種培養(yǎng)的專用發(fā)酵設備，設備應符合

GB

要求。3.2接種搶

inoculation

gun將液體菌種按無菌操作要求由發(fā)酵罐接種到固體培養(yǎng)機物料上的工具。4 生產(chǎn)要求4.1人員要求工作人員應該保持個人衛(wèi)生，進液體菌種發(fā)酵車間必須穿戴經(jīng)滅菌處理的工作服、口罩、鞋、帽。4.2 產(chǎn)地環(huán)境要求4.2.1 場所要求

NY/T

528

5749要求。4.2.2 廠房要求采用高溫高壓滅菌，在

℃，壓力約

采用高溫高壓滅菌，在

℃，壓力約

條件下保持

30

。培養(yǎng)基冷卻至常溫，在無菌條件下將

3～4

塊

2

cm

的母種菌塊接入搖瓶內。廠房設計應符合

NY/T

要求，發(fā)酵罐菌種培養(yǎng)室應符合

GB

50073

要求。冷卻區(qū)應衛(wèi)生干凈、接種區(qū)應正壓無菌、培養(yǎng)室應能控溫、通風。4.3 生產(chǎn)設備與設施4.3.1 生產(chǎn)設備與用具

GB

要求。應具有備用電源。4.3.2 備、制種用的滅菌設施和常規(guī)用具。5 生產(chǎn)技術5.1 工藝流程母種制備

→

搖瓶液體菌種制備

→

發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)

→

放罐接種5.2 母種制備母種制備應符合

NY/T

的規(guī)定。5.3 搖瓶液體菌種制備5.3.1 培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基按下列配方配制，豆粕

%，葡萄糖

2

%，磷酸二氫鉀

0.3

%，硫酸鎂

0.15

%，原料應符合NY/T

1935

的規(guī)定。取定量的純水放入燒杯，煮沸后將上述原料按比例依次倒入燒杯中完全溶解,培養(yǎng)液，冷卻備用。5.3.2 搖瓶裝液量采用

1

000

mL

三角瓶，裝液量為

500

mL

用紗布和牛皮紙封口。5.3.3 25.3.4 35.3.5 靜置

h

后置于恒溫搖床，24

℃～

℃、140

r/min～160

r/min

4

d～6

d養(yǎng)液應澄清透明，無雜菌、無異味；鏡檢無雜菌、菌絲淺白色且色澤均勻、形態(tài)正常；菌絲球密度達70

%～80

%，菌絲球較小且均勻（菌球直徑小于

0.5

8

，均勻懸浮于液體培養(yǎng)基中，不分層。5.3.6 DB

3715/T

41—2023搖瓶液體菌種若不能及時使用，可在

0

℃～4

℃度低溫保藏不超過

10

d。5.4 發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)5.4.1 雜菌檢測接種前

2

d

應對搖瓶液體菌種進行檢測，用注射器吸取少量菌液注射到培養(yǎng)基斜面上，36

℃培養(yǎng)24

h5.4.2 罐體清洗及注水生產(chǎn)前，嚴格檢測罐體：內檢與外檢，及時排查問題，確保安全生產(chǎn)。檢查后，罐體注入純凈水，器下沿齊平。5.4.3 磨細玉米面

4

5.6

g/L，全麥粉

1.25

，白糖

5

g/L，葡萄糖

6.25

，磷酸二氫鉀

0.325

0.19

g/L，0.15

mL/L純凈水攪拌至無顆粒，倒入罐內，最后加入消泡劑。5.4.4 封罐滅菌氣壓力介于

0.2

Mpa～0.3

Mpa

124

℃～126

0.14

Mpa～0.15

60

(由外向內關)，滅菌完成。5.4.5

0.05

～0.07

氣攪拌，罐內溫度降到

℃以下時，關閉冷水管、進氣和排氣閥，罐體壓力保持

0.05

。5.4.6

接種前準備卡環(huán)并向外拔出約

1

cm，當排氣閥有微弱氣體排出時，關閉排氣閥，準備接種。5.4.7 接種與培養(yǎng)5.4.7.1接種量接種比例為

1：800。5.4.7.2 殺菌消毒5.4.7.3 接種DB

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41—2023緩捏軟管使菌液流入罐內，完畢后用干凈的脫脂棉對接種口內壁清理，關閉接種口閥門。5.4.7.4 培養(yǎng)0.01

15

℃～18

℃培養(yǎng)。再培養(yǎng)

2

d～3

d

即可接種，培養(yǎng)的后

3

d，因菌液粘稠，菌絲量增加，宜適當加大通氣量攪拌。5.4.7.5 雜菌檢測第

4

d

點燃托板上的脫脂棉對取樣口火焰封口。取樣完后用干凈的脫脂棉對取樣口內壁清理。樣品在

36

養(yǎng)

24

h，無雜菌出現(xiàn)。5.5 放罐接種5.5.1 菌包培養(yǎng)料準備60

%的麥粒，煮熟煮透無白芯；

%玉米芯，玉米芯顆粒大小在

0.8

cm～1

，玉米芯泡透。將煮熟的麥粒用其干重

1.5

%的輕質碳酸鈣和

5

‰磷酸二氫鉀拌勻，浸泡過的玉米芯用其干重

2

%的輕質碳酸鈣拌勻，再將二者拌勻，含水量以

60

%～65

%為宜。用生石灰調

pH

值到

～11

之間。5.5.2 5.5.2.1

包裝規(guī)格采用

cm×36

cm×0.5

聚丙烯袋包裝。5.5.2.2 菌包重量每包重

0.8

kg

左右。5.5.2.3 封口套環(huán)+扣蓋。5.5.3 菌袋消毒滅菌

持

60

，升溫到

℃保持

min，升溫到

121

℃，達到滅菌溫度保持

min，再燜置

30

。5.5.4 接種環(huán)境應符合

GB

50073

要求。5.5.5 接種槍用酒精燈火焰消毒后使用。5.5.6

0.08

Mpa(送氣壓力為

氣閥微開)，霧化好，菌絲生長快，接種量每包

20

～30

，每接種

1

5.5.7 DB

3715/T

41—2023培養(yǎng)溫度為

13

℃～

15

d

左右長滿菌袋。5.5.8 5

℃～8

℃條件下可保存

d。6 檔案管理應建立羊肚菌液體菌種生產(chǎn)記錄（見附錄A），定期由