農(nóng)用微生物菌劑

農(nóng)用微生物菌劑〔GB20287-2006〕前言本標(biāo)準(zhǔn)的5.1、5.3和第8章條文為強制性條款，其余為推舉性條款。B為資料性附錄。農(nóng)用微生物菌劑范圍〔即微生物接種劑要求、試驗方法、檢驗規(guī)章、包裝、標(biāo)識、運輸和貯存。本標(biāo)準(zhǔn)適用于農(nóng)用微生物菌劑類產(chǎn)品。標(biāo)準(zhǔn)性引用文件〔略〕術(shù)語和定義〔略〕產(chǎn)品分類產(chǎn)品按劑型可分為液體、粉劑、顆粒型；按內(nèi)含的微生物種類或功能特性可菌菌劑、有機物料腐熟劑、促生菌劑、菌根菌劑、生物修復(fù)菌劑等。要求菌種生產(chǎn)用的微生物菌種應(yīng)安全、有效。生產(chǎn)者應(yīng)供給菌種的分類鑒定報告，包批文。產(chǎn)品外觀〔略〕產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)2執(zhí)行。項目劑型a項目劑型a復(fù)合菌劑，每一種有效菌的數(shù)量不得少于0.01億/g(mL)；以單一的膠質(zhì)芽胞桿菌〔Bacillusmucilaginosus 〕1.2/g。b液體粉劑顆粒(cfu)a，億≥2.02.01.0/g(mL)/g(mL)≤3.0×1063.0×1063.0×106雜菌率，%≤10.020.030.0水分，%≤-35.020.0細度，%≥-8080pHb，月≥5.0~8.035.5~8.565.5~8.5工程劑型a工程劑型abc液體粉劑顆粒有效活菌數(shù)(cfu)，億/g(mL)≥1.00.500.50a，U/g〔mL〕≥30.030.030.0蛋白酶活b，U/g(mL)≥15.015.015.0水分，%≤-35.020.0細度，%≥-7070pH5.0～8.55.5～8.55.5～8.5c，月≥36農(nóng)用微生物菌劑產(chǎn)品中無害化指標(biāo)見表3。表3 劑產(chǎn)品的無害化技術(shù)指標(biāo)參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)極限糞大腸菌群數(shù)，個/g(mL)≤100蛔蟲卵死亡率，%≥95砷及其化合物〔以As計〕，mg/kg≤75鎘及其化合物〔以Cd計〕，mg/kg≤10鉛及其化合物〔以Pb計〕，mg/kg≤100鉻及其化合物〔以Cr計〕，mg/kg≤150汞及其化合物〔以Hg計〕，mg/kg≤5試驗方法儀器設(shè)備〔略〕試劑〔略〕產(chǎn)品參數(shù)的檢測)的測定(或白色塑料調(diào)色板)中，認真觀看樣品的顏色、外形、質(zhì)地。有效活菌數(shù)的測定承受平板計數(shù)法，依據(jù)所測微生物的種類選用適宜的培育基。ProbableNumber，MPN〕5C的規(guī)定。系列稀釋g〔0.01g〕，100mL的無菌水中(液體30min，即成母液菌懸液〔根底液〕。5.0mL45mL1:10稀釋的菌懸液〔每個稀釋度應(yīng)更換無菌移液管〕。加樣及培育mL，加至預(yù)先制備好的固體培育基平板上，分別用無菌玻璃刮刀將不同稀釋度的菌懸液均勻地涂于瓊脂外表。每一稀釋度重復(fù)3次，同時以無菌水作空白比照，于適宜的條件下培育。菌落識別無效，應(yīng)重做。菌落計數(shù)20~300〔10~150個〕，分別統(tǒng)計有效活菌數(shù)目和雜菌數(shù)目。當(dāng)只有一個稀釋度，其平均菌落20～30020～300個之間時，應(yīng)按兩者菌落總數(shù)之比值打算。假設(shè)其比值小于等于22式〔1〕或式〔2〕計算：m 1 02n = xkv/(mv)×10-8 〔m 1 02=1 02vn xkv/(vv)×10-8 〔2=1 02v式中：mn —質(zhì)量有效活菌數(shù)， 億/gmvn—體積有效活菌數(shù)， 億/mLvx—菌落平均數(shù)， 個k—稀釋倍數(shù)v1—根底液體積， mLv2—菌懸液參加量， mLv0—樣品量， mLm0—樣品量， g霉菌雜菌數(shù)的測定承受馬丁培育基，測定方法同6.3.2。雜菌率的測定除樣品有效菌外其它的菌均為雜菌。樣品中雜菌率按式〔3〕計算：1 m=n/(n+n)×100 〔31 式中：m—樣品雜菌率， %1n—雜菌數(shù)， 億/g(mL)1n—有效活菌數(shù)， 億/g(mL)水分的測定105℃2℃烘干0.5h2份平行樣品〔1.0mm試驗篩〕，每份0.01g〕，分別參加鋁盒中并記錄質(zhì)量。將裝好樣品的鋁盒置于枯燥h~6h20min后進展稱量。水分含量按式〔4〕計算〔結(jié)果為兩次測定的平均值〕：1 2 1 w=(m-m)/(m-m)×100 〔41 2 1 式中：w—樣品水分含量， %0m—空鋁盒的質(zhì)量， g01m—樣品和鋁盒的質(zhì)量， g12m—烘干后樣品和鋁盒的質(zhì)量，g2細度的測定粉劑樣品0.1g〕，300mL200mL水浸泡10min~30min0.18mm的試驗篩中，然后用水沖洗，并用刷子輕輕地算：s={1-m1/[m0〔1-w〕]}×100 〔5〕式中：s —篩下樣品質(zhì)量分數(shù)， %m0—樣品質(zhì)量， gw —樣品含水量， %m1—篩上干樣品質(zhì)量， g顆粒樣品50g0.1〔1.0mm4.75m〕(大孔徑試驗篩放在上面)。樣品倒入大孔徑試驗篩內(nèi)篩樣品，然后稱小孔徑試驗篩上的樣品質(zhì)量。顆粒細度按式〔6〕計算：g=m1/m0×100 〔6〕式中：g—樣品質(zhì)量分數(shù)， %m1—小孔徑試驗篩上樣品質(zhì)量，gm0—樣品質(zhì)量， gpH值的測定30min，用標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)。pH值的測定，每個樣品重復(fù)三次，計算三次的平均值。液體樣品的燒杯中，直接用酸度計測定，儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。粉劑樣品15g50mL1:2(樣品:無離子水)的比例將無離(1:3~1:5的比例加無離子pH值，儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。顆粒樣品1.0mm6.3.7.2的方法測定。糞大腸菌群數(shù)的測定19524.1《肥料中糞大腸菌群的測定》的規(guī)定。蛔蟲卵死亡率的測定19524.2《肥料中蛔蟲卵死亡率的測定》的規(guī)定。纖維素酶活、蛋白酶活的測定應(yīng)符合附錄D的規(guī)定。砷、鎘、鉛、鉻、汞的測定18877—20025.12~5.17的規(guī)定。保質(zhì)期的檢驗在產(chǎn)品說明書標(biāo)明的保質(zhì)期前，按6.3.1~6.3.11方法測定產(chǎn)品相應(yīng)指標(biāo)。檢驗規(guī)章GB8170GB1250中修約值比較法的規(guī)定。抽樣〔或每批固體發(fā)酵抽樣過程嚴格避開雜菌污染。抽樣工具(瓶)，金屬勺、抽樣器、量筒、牛皮紙袋、膠水、抽樣封條及抽樣單等。抽樣方法和數(shù)量一般在成品庫中抽樣，承受隨機法抽取。抽樣以件為單位，小包裝以每一包裝箱為一件。隨機抽取3~5件，每件中隨瓶)；假設(shè)每袋(瓶)500g〔mL〕的產(chǎn)品，應(yīng)多抽幾件。大包500g(mL)，3袋(瓶)，每袋〔瓶〕500g(mL)。檢驗分類〔略〕判定規(guī)章具以下任何一條款者，均為合格產(chǎn)品檢驗結(jié)果各項技術(shù)指標(biāo)均符合標(biāo)準(zhǔn)要求的產(chǎn)品；1項不符合要求，而其它各項技術(shù)指標(biāo)符合要求的產(chǎn)品。具以下任何一條款者，均為不合格產(chǎn)品有效活菌數(shù)不符合技術(shù)指標(biāo)；霉菌雜菌數(shù)不符合技術(shù)指標(biāo)；雜菌率不符合技術(shù)指標(biāo)；糞大腸菌群不符合技術(shù)指標(biāo)；蛔蟲卵死亡率不符合技術(shù)指標(biāo)；砷、鎘、鉛、鉻、汞中任一含量不符合技術(shù)指標(biāo)；有機物料腐熟劑產(chǎn)品中所測酶活不符合技術(shù)指標(biāo)；2項〔含〕以上不符合要求。包裝、標(biāo)識、運輸和貯存885-2004《農(nóng)用微生物產(chǎn)品標(biāo)識要求》附錄 A 常用檢測培育基NY/T1114-2004《微生物肥料試驗用培育基技術(shù)條件》附錄 B〕常用染色劑革蘭氏染色劑結(jié)晶紫染色液〔Hucker氏配方〕甲液：結(jié)晶紫〔Crystalviolet〕 2.0g乙醇(95%) 20.0mL乙液：草酸銨[(NH4)2C2O4H2O] 0.8g蒸餾水 80.0mL甲、乙兩液相混，過濾，棕色瓶保存。(Lugol)氏碘液碘(I2)片 1.0g碘化鉀(KI) 2.0g蒸餾水 300mL足蒸餾水，棕色瓶保存。脫色液95%的乙醇液。復(fù)染液0.5%的番紅水溶液〔SafraninO)2.5%的番紅酒精溶液 20mL蒸餾水 80mL芽胞染色液孔雀綠染色液〔Malachitegreen〕孔雀綠 5.0g蒸餾水 100mL0.5%番紅染色液石碳酸復(fù)紅染色液甲液：堿性復(fù)紅(Basicfuchsin) 0.3g95%酒精 10.0mL乙液：石碳酸(PhenoecrystalsC.P) 5.0g蒸餾水 95mL5~10倍使用。附錄 C〔標(biāo)準(zhǔn)性附錄〕稀釋法〔MPN5管法〕稀釋10.0g100mL的無菌水中(液體菌劑取l0.0mL)20min200r/min301×101稀釋度的菌懸液。45mL無菌水的三角瓶中，1×1021×103、1×104、1×105……稀釋度的菌懸液〔每個稀釋度應(yīng)更換無菌移液管〕。加樣選擇適宜的51.0mL，加到已預(yù)備好的盛有9.0mL無菌培育基的螺口試管中，每一稀釋度重復(fù)接5支試管〔不同稀釋度間更換無菌移液管〕，同時用無菌培育液作比照。培育接種后馬上擰緊塑料帽并搖勻，將接種好的試管放到適宜的條件下培育。計算依據(jù)各稀釋系列試管中有無待測微生物生長或其生理反響的正或負得出數(shù)統(tǒng)計表中查出近似值〔C1〕，即可計算出待測樣品的有效活菌數(shù)，以億個/mL或億個/g表示。計算方法：稀釋倍數(shù)

1mL〔g〕樣品中的有效活菌數(shù)=菌數(shù)近似值×數(shù)量指標(biāo)第一位數(shù)的計數(shù)規(guī)章指標(biāo)系取稀釋系列中全部重復(fù)都有生長(或是正反響)的最高稀釋度為數(shù)量指標(biāo)的第一位數(shù)字，總共取三個連續(xù)稀釋管的結(jié)果查表。5-5-3-0-05-3-0數(shù)列；5-3-0-0-05-3-0數(shù)列；5-5-4-3-04個等級的稀釋度的狀況。此時，可先取前面的5-4-3數(shù)列，后取4-3-0數(shù)列，分別求出lgMPN，0.431+1〔101進展校MPN=27.5。表C.1 MPN，lgMPN表陽性試管數(shù)MPN陽性試管數(shù)MPN第一 其次第三〔相當(dāng)于第一LgMPN第一其次第三〔相當(dāng)于第LgMPN稀釋管 稀釋管稀釋管1〕稀釋管稀釋管稀釋管1毫升〕0 000-5002.30.3620 100.180.255-15013.10.4911 000.200.301-15103.30.5191 100.400.602-15114.60.6632 000.450.653-15204.90.6902 010.680.833-15217.00.8452 100.680.833-15229.50.9782 200.930.968-15307.90.8983 000.780.892-153111.01.0413 011.10.04153214.01.1463 101.10.041