貓p27核心抗原（P27）elisa試劑盒說明書

第第頁貓p27核心抗原（P27）elisa試劑盒說明書貓p27核心抗原（P27）elisa試劑盒說明書elisa試劑盒常見構(gòu)成部分：1）酶和底物：在ELISA中zui常用的酶為HRP和ALP。2）抗體：在ELISA中應(yīng)用的抗體可分為多克隆抗體（多抗）和單克隆抗體（單抗）。3）抗原：在ELISA中應(yīng)用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。重要有三類，即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原。4包被：將免疫活性物質(zhì)（抗原或抗體）結(jié)合于固相載體上的過程稱為包被。常用的料子有聚苯乙烯、硝酸纖維薄膜等；常用的方法有吸附法、化學(xué)交聯(lián)法及親和素生物素間接包被法5）固相載體：固相載體是ELISA中用以分別結(jié)合標(biāo)記物和游離標(biāo)記物的重要手段，應(yīng)與各種免疫活性物質(zhì)有良好的結(jié)合性能而且不轉(zhuǎn)變其免疫活性。常用的固相載體有聚苯乙烯塑料和硝酸纖維素膜。貓p27核心抗原（P27）elisa試劑盒樣本試驗(yàn)前準(zhǔn)備：ELISA試劑盒液體樣本：包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。（1）血清室溫血液自然凝固1020分鐘后，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。保管過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。（2）血漿：應(yīng)依據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合1020分鐘后，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。保管過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。（3）尿液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。保管過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。（5）培養(yǎng)細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.27.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度實(shí)現(xiàn)100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。保管過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。（6）組織標(biāo)本切割標(biāo)本后，稱取重量。加入肯定量的PBS，PH7.4.用液氮快速冷凍保管備用。標(biāo)本溶化后仍然保持28℃的溫度。加入肯定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。貓p27核心抗原（P27）elisa試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180ng/L，120ng/L，60ng/L，30ng/，15ng/L）。2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3.8.洗滌：操作同5.9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.停止：每孔加停止液50μl，停止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加停止液后15分鐘。貓p27核心抗原（P27）elisa試劑盒注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保管。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并常常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避開試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好掌控在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，介紹使用排槍加樣。4.封板膜只限一次性使用，以避開交叉污染。5.底物請(qǐng)避光保管。6.嚴(yán)格依照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必需以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).7.全部樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。8.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。9.如需代測(cè)或者樣本短時(shí)間不測(cè)定，可立刻低溫凍存，溫度越低越好，中心避開反復(fù)凍融，20℃以下可保管三個(gè)月,70℃以下可保管六個(gè)月。10.貓p27核心抗原（P27）elisa試劑盒試劑使用須知：11.（1）請(qǐng)參照相關(guān)法規(guī)、文獻(xiàn)、MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進(jìn)行安全操作。12.（2）通常購(gòu)買試劑時(shí)肯定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話，更加注意其他保管和管理。13.（3）萬一試劑操并非專業(yè)技術(shù)人員。必需在專業(yè)人士的引導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作。對(duì)于使用后的廢棄物，不要或者舊的試劑，應(yīng)依照