第六章 藥物含量測(cè)定技術(shù)

第六章

藥物含量測(cè)定技術(shù)

目錄§6-1??藥物含量測(cè)定方法概述

§6-2??容量分析法§6-3??光譜分析法§6-4??色譜分析法§6-1藥物含量測(cè)定方法概述學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握藥物的含量測(cè)定方法選擇，會(huì)運(yùn)用計(jì)算公式解決計(jì)算問(wèn)題。案例導(dǎo)入

安徽省滁州市77歲的呂先生，自11年前查出腦梗后便遵醫(yī)囑每天服用阿司匹林，以降低腦梗的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。2018年的春天，呂先生在家附近的藥房購(gòu)買(mǎi)了3盒阿司匹林腸溶片，取出一片含在嘴里，喝水送服竟然立馬化了，而且原本應(yīng)該無(wú)味的藥“還有點(diǎn)甜”。服藥一個(gè)月后，呂先生開(kāi)始“走路發(fā)飄、頭腦糊涂”，連別人講話都聽(tīng)不大懂。呂先生家人向當(dāng)?shù)厥称匪幤坊橹ш?duì)舉報(bào)。經(jīng)安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院鑒定，被查獲的假“阿司匹林腸溶片”“硝苯地平控釋片”有效藥物含量為零，不具有任何療效。討論：1.阿司匹林腸溶片應(yīng)該采用什么方法進(jìn)行含量測(cè)定？合格標(biāo)準(zhǔn)是多少？

2.藥物的含量測(cè)定方法有哪些？藥物含量測(cè)定1.藥物含量測(cè)定是指測(cè)定藥物中的有效成分或指標(biāo)成分的含量，是評(píng)價(jià)藥物質(zhì)量的重要指標(biāo)。2.測(cè)定方法：容量分析法、光譜分析法和色譜分析法。3.劑型特點(diǎn)：原料——準(zhǔn)確重現(xiàn)

制劑——專(zhuān)屬靈敏§6-2容量分析法學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握常見(jiàn)的藥物含量測(cè)定的容量分析法，并能選擇合適的定量分析法完成含量計(jì)算。2.理解滴定度、濃度校正因子概念。3.了解容量分析法的特點(diǎn)。一、容量分析法的特點(diǎn)

也稱(chēng)滴定分析法：將已知濃度滴定液滴加至被測(cè)藥物溶液中，至滴定終點(diǎn)，根據(jù)滴定液的濃度、體積和滴定度，計(jì)算含量。容量分析法一、容量分析法的特點(diǎn)1.容量分析法的特點(diǎn)（1）方法簡(jiǎn)便易行（2）方法耐用性高（3）測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確（4）方法專(zhuān)屬性差一、容量分析法的特點(diǎn)常用的容量分析法：非水溶液滴定法、酸堿滴定法、配位滴定法、氧化還原滴定法、沉淀滴定法等。常用的滴定方式有３種：直接滴定法、剩余滴定法（返滴定法或回滴定法）、置換滴定法。二、容量分析法的相關(guān)計(jì)算1.滴定度2.濃度校正因子3.含量的計(jì)算（1）直接滴定法（2）間接滴定法二、容量分析法的相關(guān)計(jì)算1.滴定度（T）定義：每1

mL規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量，mg。例如：用碘量法測(cè)定維生素Ｃ的含量時(shí)，《中國(guó)藥典》規(guī)定：每1mL碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6（維生素C）。二、容量分析法的相關(guān)計(jì)算2.濃度校正因子（F）定義：滴定液的實(shí)際配制濃度與規(guī)定濃度的比值稱(chēng)為校正因子，常用“F”表示。3.含量的計(jì)算（1）直接滴定法

T為滴定度（mg/ml）；V為供試品消耗滴定液的體積（ml）；F為滴定液濃度校正因子；ms為供試品的取樣量（g）二、容量分析法的相關(guān)計(jì)算例6-1：維生素C的含量測(cè)定

精密稱(chēng)取維生素C0.2238g，加新沸過(guò)的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05022mol/L）滴定至溶液顯藍(lán)色并在30秒鐘內(nèi)不褪，消耗碘滴定液（0.05022mol/L）25.12ml。已知每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6?！吨袊?guó)藥典》規(guī)定本品含C6H8O6不得少于99.0%。請(qǐng)計(jì)算維生素C的含量并判斷是否符合規(guī)定？

結(jié)論：本品維生素C的含量為99.3%，符合規(guī)定。二、容量分析法的相關(guān)計(jì)算3.含量的計(jì)算（2）剩余滴定法

T為滴定度（mg/ml）；V空白為空白試驗(yàn)消耗滴定液B的體積（ml）；V樣品為樣品消耗滴定液B的體積（ml）；F為滴定液濃度校正因子；ms為供試品的取樣量（g）二、容量分析法的相關(guān)計(jì)算例6-2：司可巴比妥鈉的含量測(cè)定

取本品約0.1g，精密稱(chēng)定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5ml，立即密塞并振搖1分鐘，在暗處?kù)o置15分鐘后，注意微開(kāi)瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于13.01mg的C12H17N2NaO3。

已知供試品的取樣量為0.1022g，硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）濃度校正因子為1.038，供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液15.73ml，空白試驗(yàn)消耗硫代硫酸鈉滴定液23.21ml。《中國(guó)藥典》規(guī)定本品含C12H17N2NaO3不得少于98.5%。請(qǐng)計(jì)算司可巴比妥鈉的含量并判斷是否符合規(guī)定？

結(jié)論：本品司可巴比妥鈉的含量為98.8%，符合規(guī)定。二、容量分析法的相關(guān)計(jì)算§6-3光譜分析法學(xué)習(xí)目標(biāo)1.理解紫外-可見(jiàn)分光光度法和熒光分光光度法的特點(diǎn)。2.了解紫外-可見(jiàn)分光光度法和熒光分光光度法的藥物含量測(cè)定適用范圍。3.會(huì)運(yùn)用紫外-可見(jiàn)分光光度法完成藥物含量的測(cè)定。一、紫外-可見(jiàn)分光光度法

紫外-可見(jiàn)分光光度法是基于物質(zhì)分子對(duì)紫外光區(qū)和可見(jiàn)光區(qū)的單色光輻射的吸收特性建立的光譜分析方法。定義一、紫外-可見(jiàn)分光光度法1.朗伯-比爾定律（原理）定義：?jiǎn)紊廨椛浯┻^(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，在一定的濃度范圍內(nèi)被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(zhǎng)度）成正比。公式：

A為透光率，E為吸收系數(shù)，

c為溶液濃度（g/ml），l為液層厚度（cm）

一、紫外-可見(jiàn)分光光度法2.方法特點(diǎn)（1）波長(zhǎng)范圍為190～800nm；（2）靈敏度高；（3）準(zhǔn)確度高；（4）儀器價(jià)格較低廉，操作簡(jiǎn)單，易于普及；（5）應(yīng)用廣泛。

一、紫外-可見(jiàn)分光光度法3.儀器校正與檢定（1）

波長(zhǎng)（2）

吸光度的準(zhǔn)確度（3）

雜散光的檢查4.對(duì)溶劑的要求

一、紫外-可見(jiàn)分光光度法5.測(cè)定法（1）

對(duì)照品比較法

溶液濃度原料藥制劑一、紫外-可見(jiàn)分光光度法5.測(cè)定法（2）

吸收系數(shù)法

一、紫外-可見(jiàn)分光光度法5.測(cè)定法（3）

計(jì)算分光光度法

對(duì)照品和供試品的測(cè)試條件應(yīng)盡可能一致計(jì)算分光光度法一般不宜用作含量測(cè)定（4）

比色法

適用范圍：紫外光區(qū)無(wú)強(qiáng)吸收或有干擾藥物的測(cè)定為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑，使反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收移至可見(jiàn)光區(qū)二、熒光分光光度法

物質(zhì)受紫外光或可見(jiàn)光照射激發(fā)后能發(fā)射出比激發(fā)光波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光；當(dāng)激發(fā)光停止照射后，熒光隨之消失；激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，用于定性分析；熒光強(qiáng)度用于定量分析。定義二、熒光分光光度法1.方法特點(diǎn)（1）靈敏度高；（2）熒光自熄滅；（3）干擾因素多；（4）線性范圍窄；（5）取樣少，方法快速。

二、熒光分光光度法2.測(cè)定法（對(duì)照品比較法）

cX為供試品溶液的濃度；cr為對(duì)照品溶液的濃度；Rx為供試品溶液的熒光強(qiáng)度；Rxb為供試品溶液試劑空白的熒光強(qiáng)度；Rr為對(duì)照品溶液的熒光強(qiáng)度；Rrb為對(duì)照品溶液試劑空白的熒光強(qiáng)度

§6-4色譜分析法學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握高效液相色譜法和氣相色譜法的色譜條件、系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、含量測(cè)定方法。2.理解高效液相色譜法和氣相色譜法含量測(cè)定的計(jì)算公式。色譜分析法根據(jù)分離原理吸附色譜法分配色譜法離子交換色譜法分子排阻色譜法根據(jù)分離方法紙色譜法薄層色譜法柱色譜法高效液相色譜法氣相色譜法根據(jù)流動(dòng)相氣相色譜法液相色譜法超臨界流體色譜法1.分類(lèi)色譜分析法2.方法特點(diǎn)（1）高靈敏度；（2）高選擇性；（3）高效能與高速度。

一、高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱，對(duì)供試品進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。定義一、高效液相色譜法1.對(duì)儀器的一般要求和色譜條件（1）色譜系統(tǒng)色譜柱：ODS；3.9~4.6mm；3~10

m檢測(cè)器：紫外-可見(jiàn)分光檢測(cè)器流動(dòng)相：甲醇/乙腈-水

一、高效液相色譜法1.對(duì)儀器的一般要求和色譜條件（2）儀器及色譜柱維護(hù)注意事項(xiàng)①流動(dòng)相使用前應(yīng)采用0.45μm濾膜濾過(guò)并經(jīng)脫氣處理，流動(dòng)相中應(yīng)盡可能不用緩沖鹽，如需用時(shí)，應(yīng)盡可能使用低濃度緩沖鹽，每日使用后應(yīng)充分沖洗；②用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱時(shí)，流動(dòng)相中有機(jī)溶劑一般不低5％，否則C18鏈隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致柱效下降、組分保留值變化、造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定；③色譜柱保存時(shí)應(yīng)保持填料在濕潤(rùn)狀態(tài)，兩端密塞，如C18柱可在甲醇中保存。

一、高效液相色譜法2.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（1）色譜柱的理論板數(shù)（n）

一、高效液相色譜法（2）分離度（R）：用于評(píng)價(jià)待測(cè)組分與被分離組分之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)分離效能的關(guān)鍵指標(biāo)。

一、高效液相色譜法（2）分離度（R）

定量分析時(shí)，為便于準(zhǔn)確測(cè)量，一般要求待測(cè)組分色譜峰與相鄰色譜峰或內(nèi)標(biāo)峰之間的分離度應(yīng)大于1.5。一、高效液相色譜法（3）靈敏度：用于評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)檢測(cè)微量物質(zhì)的能力，通常以信噪比（S/N）表示。（4）拖尾因子（T）：用于評(píng)價(jià)色譜峰的對(duì)稱(chēng)性。T值應(yīng)在0.95～1.05。

一、高效液相色譜法（5）重復(fù)性

用于評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)響應(yīng)值的重復(fù)性能。

除另有規(guī)定外，通常取各品種項(xiàng)下的對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0％一、高效液相色譜法3.測(cè)定法（1）內(nèi)標(biāo)法

AS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；AR為為對(duì)照品的峰面積或峰高；cS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；cR為對(duì)照品的濃度；f為內(nèi)標(biāo)法校正因子一、高效液相色譜法

一、高效液相色譜法3.測(cè)定法（2）外標(biāo)法

cX為供試品的濃度；AX為供試品的峰面積或峰高；AR為對(duì)照品的峰面積或峰高；cR為對(duì)照品的濃度。二、氣相色譜法

以氣體為流動(dòng)相的色譜法稱(chēng)為氣相色譜法（GC）。GC法適合于對(duì)熱穩(wěn)定、受熱易氣化的藥物測(cè)定。定義二、氣相色譜法1.對(duì)儀器的一般要求（1）載氣源（2）進(jìn)樣部分（3）色譜柱（4）柱溫箱（5）檢測(cè)器（6）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)