卡維地洛普萘對(duì)缺血性心律失常余

鉀通道Kv4.2mRNA表達(dá)的研究1010410韓長(zhǎng)余卡維地洛、普萘洛爾對(duì)大鼠缺血性心律失常研究背景及意義：目前，卡維地洛、普萘洛爾對(duì)心肌電生理學(xué)特性影響的有關(guān)研究較少。隨著研究的繼續(xù)深入，相關(guān)報(bào)道會(huì)愈來愈多，這將進(jìn)一步為臨床應(yīng)用卡維地洛、普萘洛爾治療心律失常提供藥理學(xué)理論基礎(chǔ)。研究的主要內(nèi)容：通過結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支建立心肌梗死模型，監(jiān)測(cè)心電圖?？ňS地洛1小時(shí)：空白對(duì)照組（Sham），心肌梗死模型組（MI），卡維地洛組（Carvedilol）：普萘洛爾48小時(shí)：空白對(duì)照組（Sham），心肌梗死模型組（MI），給藥組（Propranolol）。提取大鼠缺血區(qū)心肌組織總RNA，應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)RT-PCR技術(shù)，瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)各組Kv4.2mRNA水平。研究所需條件：健康成年雄性Wistar大鼠，體重150克-250克。超凈工作臺(tái)；紫外分光光度儀；微型離心機(jī)；渦旋混合器；PCR儀；水平電泳槽；-86度ULT冰箱；制冰機(jī)；超純水系統(tǒng)；電子天平；生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。普萘洛爾；卡維地洛；RT-PCR反應(yīng)體系試劑盒；引物；Taq酶；Trizol；液氮；氯仿；異丙醇；DNAMarker；無水乙醇。研究假設(shè)：短期內(nèi)（1小時(shí)）卡維地洛對(duì)心律失常的大鼠心肌Kv4.2mRNA有一定恢復(fù)作用。短期內(nèi)（48小時(shí)）普萘洛爾對(duì)心律失常的大鼠心肌Kv4.2mRNA有一定恢復(fù)作用。主要研究方法：構(gòu)建心肌梗死模型提總RNA應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)RT-PCR技術(shù)瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)分析研究結(jié)果：

在大鼠麻醉后，記錄正常標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖一段時(shí)間。在左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎后，記錄1小時(shí)心電圖。出現(xiàn)S-T段拾高，并漸與QRS波融合，QRS波增寬、增高、心律失常等，說明心肌梗死模型建立成功。

研究結(jié)果：圖1正常大鼠心電圖圖2結(jié)扎成功缺血模型心電圖圖3室性早搏圖4室速圖5室顫研究結(jié)果：以大鼠心肌總RNA為模板，在同一反應(yīng)體系中以特異性引物同時(shí)擴(kuò)增Kv4.2和β-actin的特異片段，在1.0%瓊脂糖凝膠電泳后可見在345bp處及250bp處各出現(xiàn)條帶，與預(yù)期的目的條帶位置相符，結(jié)果見圖6.

研究結(jié)果：圖6.提總RNA電泳圖

500bp250bp345bp-kv4.2250bp-β-actinMarkerShamMICar圖6PCR產(chǎn)物電泳圖345bp研究結(jié)果：結(jié)果顯示，心肌梗死模型的大鼠心肌鉀通道Kv4.2mRNA表達(dá)低于假手術(shù)組（p<0.05，n=3），卡維地洛組Kv4.2mRNA表達(dá)低于假手術(shù)組（p<0.05，n=3），卡維地洛組Kv4.2mRNA表達(dá)比心肌梗死模型組稍高，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見圖7。研究結(jié)果：圖7.PCR產(chǎn)物電泳圖

研究結(jié)果：

以大鼠心肌總RNA為模板，在同一反應(yīng)體系中以特異性引物同時(shí)擴(kuò)增Kv4.2和β-actin的特異片段，在1.0%瓊脂糖凝膠電泳后可見在500bp處及345bp處各出現(xiàn)條帶，與預(yù)期的目的條帶位置相符，結(jié)果見圖8。

研究結(jié)果：圖8.大鼠MI后1小時(shí)Kv4.2mRNA表達(dá)水平的變化250bp500bp345bp-kv4.2500-β-actinMarkerShamMIPro圖8PCR產(chǎn)物電泳圖345bp研究結(jié)果：

結(jié)果顯示，心肌梗死模型的大鼠心肌鉀通道Kv4.2mRNA表達(dá)低于假手術(shù)組（p<0.01，n=4），普萘洛爾組Kv4.2mRNA表達(dá)高于心肌梗死模型組（p<0.05，n=4），但普萘洛爾組Kv4.2mRNA表達(dá)仍低于假手術(shù)組（p<0.05，n=4），結(jié)果見圖9。研究結(jié)果：圖9PCR產(chǎn)物電泳圖研究結(jié)論：卡維地洛，普萘洛爾作為β受體阻滯劑，通過阻斷β受體，降低胞內(nèi)cAMP水平，使PKA活性減弱，Raf-1的活性增強(qiáng)，從而使Kv4.2RNA表達(dá)量提高。但因卡維地洛作用時(shí)間僅1小時(shí)，現(xiàn)象不明顯。而普萘洛爾作用時(shí)間為48小時(shí)，因此Raf-1的活性增強(qiáng)較明顯，從而使Kv4.2mRNA表達(dá)量提高較多，但仍低于假手術(shù)組。研究結(jié)論：一、心肌梗死模型組Kv4.2mRNA表達(dá)與假手術(shù)組