醫(yī)學(xué)原癌基因Pim-3在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制以及分子靶向治

原癌基因Pim-3在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制以及分子靶向治療藥物的開發(fā)復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院實驗研究中心復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系

Pim-3激酶在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制以Pim-3為靶向治療分子的新型有效的抗腫瘤藥物的開發(fā)報告內(nèi)容Pim-3激酶在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制p34p34p34p37p40KinaseDomainPim-1Pim-2Pim-3DeneenB.etal.MolCellBiol2003;23:3897MikkersH.etal.MolCellBiol2004;24:6104Pim-3

與惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)Pim基因敲出的小鼠生命力旺盛且可繁殖后代Pim-3是原癌基因。研究背景Pim-3isaproto-oncogenewithserine/threonine

kinaseactivity.FujiiCetal.IntJCancer.2005Mar20;114(2):209-18.Pim-3激酶是否與肝臟以外的其它臟器腫瘤發(fā)生有關(guān)？

我們聚焦在同是內(nèi)胚層來源的器官，胰腺。NormalTissueCancerTissuesPim-3蛋白在人胰腺癌組織和胰腺癌細(xì)胞株中高表達(dá)PCI55PCI35α-Pim-3Actin3643kDaWCL

Pim-3shRNA

NonScramblePim-3PCI55Pim-3siRNA干擾Pim-3蛋白表達(dá)，導(dǎo)致人胰腺癌細(xì)胞株細(xì)胞凋亡，從而降低細(xì)胞活力ScrambleshRNAPim-3shRNADNAContentNoshRNASubG1AnnexinVPim-3shRNAScrambleshRNAPim-3shRNAScrambleshRNANo-shRNAScrambleshRNAPim3shRNA

012345

876543210CellviabilityratioTimeafterpassage(days)****Pim-1,Pim-2Pim-3?BadSer136＋SurvivalFactorPI3KAKTBad14-3-3SurvivalSer112Pim-1andPim-2CanInactiavtePro-apoptoticMolecule,Bad,byPhosphorylatingItsSerineResiduesApoptosisBadBcl-XL+Bcl-XLPim-3BadPim-3/BadPCI5520mmPim-3和

Bad

的相互作用a-Pim3HeLaa-Bada-IgGIP:

PCI35PCI55PCI552526kDaBadIgGBlot:anti-Pim3Blot:anti-Bad5036Pim-3IgGImmunoprecipitationwithanti-Pim-3Westernblottingwithanti-BadWashingwithStrippingbufferWesternblottingwithanti-Pim-3Pim-3pBad112Pim-3/pBad112PCI35PCI5520mmPim-3和磷酸化Bad在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)共定位ActinBadpBad112pBad136pBad155

Pim-32626262643KDa36shRNA

NonScramblePim-3PCI55降低Pim-3蛋白表達(dá)可以減少Bad112磷酸化小結(jié)〔1〕Pim-3對于難治性胰腺癌來說是一個很好的靶向治療分子以Pim-3為靶向治療分子的新型有效的抗腫瘤藥物開發(fā)胰腺癌是我國十大惡性腫瘤之一

〉早期診斷困難

〉晚期患者手術(shù)治療5年生存率低于5%，發(fā)病率等于死亡率傳統(tǒng)的化學(xué)治療存在抗腫瘤能力低，殺傷指數(shù)過小，副作用大等缺點分子靶向治療具有特異性強，效果顯著，正常組織損傷小等優(yōu)點現(xiàn)有的抑制增殖因子受體活性的分子靶向治療缺乏腫瘤治療的特異性，而且容易產(chǎn)生耐藥性研究背景Pim-3作為藥物靶點，特異性更強。

Pim-3與Pim-1具有高度的同源性〔70%〕和類似的生物功能推測Pim-3的立體空間結(jié)構(gòu)低分子化合物-Pim-3激酶復(fù)合物立體空間結(jié)構(gòu)從DrugBank和PubChem數(shù)據(jù)庫中篩選了23種類似低分子化合物低分子化合物的篩選選擇并合成了對Pim-3有高親和性的小分子化合物-蔓生百部堿〔stemonamide〕合成中間體蔓生百部堿是百部屬生物堿中的一種，其在中國和日本民間醫(yī)學(xué)中作為鎮(zhèn)咳藥。合成順序：T-10>T-6,T-10>T-4>T-5,T-10>T-2>T-3蔓生百部堿合成中間體結(jié)構(gòu)Pim-3Pim-1Pim-2T2,T5體外抑制Pim激酶活性IC50(mmol/L)Pim-3Pim-1Pim-2

AKT-1AKT-2

T2T5T10AKT1/27892>2000nd9056>2000nd3350>2000nd1934>2000

>2000>200031.5872.47345462T-2和T-5抑制Pim激酶活性，卻不抑制AKT/PKB的活性Timesaftertreatmentwithinhibitor(days)CellproliferationratioT-2T-5L3.6plT-10Miapaca-2T-2，T-5體外抑制人胰腺癌細(xì)胞株的細(xì)胞增殖Celllinename T-2 T-5L3.6pl 6.6 26.1MiaPaca-2

5.9 22.9IC50(mmol/L)過表達(dá)Pim-3可以局部逆轉(zhuǎn)由T-2引起的細(xì)胞活力下降RelativeOD450MiaPaca-2T-2引起人胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞凋亡T-2抑制Pim-3激酶活性，阻止pBad112,減少Bcl-XL的表達(dá)，依賴細(xì)胞色素C和Caspase-3途徑導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。-DMSOT-2+12h+48h+24hpBad112BadBcl-XLCytochromeCCleaved-caspase-3L3.6plActinpBad136Caspase-3Cdc25APIM-3pBad1555X105L3.6plSubcutaneousinjection3615daysSacrify↓:Intraperitonealinjection151617181929303132332223242526(days)T-2(20mg/kg)T-2抑制裸鼠皮下胰腺腫瘤的生長T-2引起裸鼠皮下胰腺腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞增殖T-2抑制腫瘤新生血管形成**

T-2對裸鼠血清中的一些生化指標(biāo)沒有影響DMSO(N=5)T2(N=5)20DMSOT2051015ALT(U/l)NSNa(mEq/l)144148152DMSOT2156160NS02468DMSOT2K(mEq/l)10NSDMSOT2Cl(mEq/l)0108112116120NS

DMSO

T2

(n=5)

(n=6)Hematologicalparameters9.3±0.07

8.08±0.3349.88±3.06

46.72±1.9030.04±3.84

9.9±1.70＊84.2±1.90

81.17±1.100±0

0.17±0.070±0

0±013.40±1.83

16.67±1.002.40±0.46

2.00±0.15RBCPlateletsWBCNeutrophilEosinophilsBasophilLymphocytesMonocytes〔×106/ml〕〔×104/ml〕〔×103/ml〕〔%〕〔%〕〔%〕〔%〕〔%〕BALB/C裸鼠全血中白細(xì)胞正常值3.84±1.64〔×103/ml〕T-2抑制荷瘤小鼠全血中白細(xì)胞的數(shù)量增多，使其恢復(fù)到正常蔓生百部堿可以作為設(shè)計Pim-3激酶抑制劑的先導(dǎo)化合物開發(fā)新藥，應(yīng)用臨床，為難治性胰腺癌提供新的治療方法小結(jié)〔2〕線粒體謝謝！1、病毒性肝炎：由病毒造成的肝炎按照其病毒系列不同分為甲、乙、丙、丁、戊和庚共六種類型病毒性肝炎。能引起肝臟細(xì)胞腫脹，是世界上流傳廣泛，危害很大的傳染病之一。1908年，才發(fā)現(xiàn)病毒也是肝炎的致病因素之一。1947年，將原來的傳染性肝炎〔infectioushepatitis〕稱為甲型肝炎〔HepatitisA,HA〕；血清性肝炎〔serumhepatitis〕稱為乙型肝炎〔HepatitisB,HB〕。1965年人類首次檢測到乙型肝炎的外表抗原。我國經(jīng)濟(jì)和科學(xué)技術(shù)日益開展，學(xué)術(shù)文化領(lǐng)域百家爭鳴，〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕特別是思想家的革新精神，為中醫(yī)學(xué)理論的創(chuàng)新和突破性進(jìn)展，提供了有利的文化背景。宋代陳無擇著?三因極一病證方論?一書，〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕提出三因?qū)W說；并產(chǎn)生了最具盛名四大學(xué)派，劉完素倡導(dǎo)熾熱論；張從正力倡“攻邪論〞；李杲提出“內(nèi)傷脾胃，百病由生〞的理論；朱震亨創(chuàng)造性地說明了相火的演變規(guī)律。編輯本段明清時期〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕是中醫(yī)學(xué)理論綜合匯編、深化開展，臨床各科辨證體系豐富、提高階段。如明代樓英的?醫(yī)學(xué)綱目?和王肯堂的?證治準(zhǔn)繩?，清代吳謙等編著的?醫(yī)宗金鑒?和陳夢雷主編的?古今圖書集成·醫(yī)部全錄?等。王清任著?醫(yī)林改錯?，注重實證研究，〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕糾正了古醫(yī)籍中關(guān)于解剖知識的某些錯誤，肯定了“腦主思維〞，開展了瘀血理論。溫病學(xué)說的形成和開展，標(biāo)志著中醫(yī)理論的創(chuàng)新與突破，吳有性著?溫疫論?，葉天士著?溫?zé)岵∑?，吳鞠通著?溫病條辨?等，在藥物學(xué)研究方面，〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕李時珍著的?本草綱目?，總結(jié)了16世紀(jì)以前我國藥物學(xué)研究的成就。醫(yī)的診察疾病能參考現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的微觀分析，將辨證與辨病相結(jié)合，實現(xiàn)宏觀與微觀的統(tǒng)一，使中醫(yī)診斷客觀化，即把分析與綜合相結(jié)合的方法引入中醫(yī)理、法、方、藥的研究，使二者有機(jī)結(jié)合，互相借鑒、補充，防止各自的片面性、局限性，這將有利于中西醫(yī)學(xué)的優(yōu)勢互補，“和而不同〞，多元開展。近年來，中醫(yī)藥在防治非典、禽流感和艾滋病方面發(fā)揮的獨特作用也證實了二者的有機(jī)結(jié)合，具有肯定的臨床療效。編輯本段東西方醫(yī)學(xué)交融不管是中醫(yī)學(xué)還是西醫(yī)學(xué)，從二者現(xiàn)有的思維方式的開展趨勢來看，均是走向現(xiàn)代系統(tǒng)論思維，中醫(yī)藥學(xué)理論與現(xiàn)代科學(xué)體系之間具有系統(tǒng)同型性，屬于本質(zhì)相同而描述表達(dá)方式不同的兩種科學(xué)形式?？赏诂F(xiàn)代系統(tǒng)論思維上實現(xiàn)交融或統(tǒng)一，成為中西醫(yī)在新的開展水平上實現(xiàn)交融或統(tǒng)一的支撐點，希冀籍此能給中醫(yī)學(xué)以至生命科學(xué)帶來良好的開展機(jī)遇，進(jìn)而對醫(yī)學(xué)理論帶來新的革命。編輯本段現(xiàn)代中醫(yī)史上個世紀(jì)末,本世紀(jì)初，1996年,清華學(xué)界對中醫(yī)氣本質(zhì)，經(jīng)絡(luò)實質(zhì)，陰陽，五行，藏象，中醫(yī)哲學(xué)觀等都有了新的全面整體創(chuàng)造性的認(rèn)識和解說。如，鄧宇等發(fā)現(xiàn)的:氣是流動著的‘信息－能量－物質(zhì)’的混合統(tǒng)一體；分形分維的經(jīng)絡(luò)解剖結(jié)構(gòu)；數(shù)理陰陽；中醫(yī)分形集：分形陰陽集－陰陽集的分形分維數(shù)，五行分形集－五行集的分維數(shù)；分形藏象五系統(tǒng)－暨心系統(tǒng)、肝系統(tǒng)、脾系統(tǒng)