氨基糖苷類藥物有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法研究

氨基糖苷類藥物有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法研究

1944年，wakmaran等人在鏈霉菌中發(fā)現(xiàn)了鏈霉菌，報(bào)告了3000多種天然和半合成氨基糖苷類抗生素，其中微生物生產(chǎn)的天然氨基糖苷類抗生素近200種。氨基糖苷類(aminoglycosides)抗生素是臨床上重要的一類抗感染藥物,具有水溶性好、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、抗菌譜廣、抗菌能力強(qiáng)和吸收排泄良好等特點(diǎn),雖然近年受到β內(nèi)酰胺類和喹諾酮類抗感染藥物的挑戰(zhàn),但仍是治療G菌和結(jié)核桿菌感染的首選藥物一。根據(jù)氨基糖苷類抗生素的抗菌特性及結(jié)構(gòu)特點(diǎn),此類抗生素可分為3個(gè)發(fā)展階段。以卡那霉素為代表的第一代氨基糖苷類抗生素,其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是完全羥基化的氨基糖與氨基環(huán)醇相結(jié)合,不抗綠膿桿菌;第二代以慶大霉素為代表,其結(jié)構(gòu)中均含有脫氧氨基糖并具有抗綠膿桿菌的特點(diǎn);第三代則是氨基環(huán)醇上氮位取代衍生物,品種有阿米卡星、阿司米星和我國(guó)創(chuàng)新的一類新藥依替米星等,其特點(diǎn)是保留了母體的抗菌活性,耳腎毒性小,抗耐藥性等。根據(jù)氨基糖數(shù)目分為假三糖類和假二糖類,氨基含量越多,抗菌能力越強(qiáng)。臨床應(yīng)用的主要品種可分為耐酶品種和不耐酶品種。1微生物效價(jià)法正是由于氨基糖苷類的結(jié)構(gòu)和臨床應(yīng)用特點(diǎn),為了科學(xué)合理、安全有效地使用這類抗生素,AGs的定量和痕量分析受到了臨床醫(yī)學(xué)和藥物分析工作者的重視,特別是對(duì)有關(guān)物質(zhì)的分析更是近年來(lái)的熱點(diǎn)。因?yàn)榘被擒疹惪股亟^大多數(shù)無(wú)特征的紫外吸收,因此微生物效價(jià)法是當(dāng)前各國(guó)藥典測(cè)定該類抗生素含量的主要方法。同時(shí),微生物法檢測(cè)成本相對(duì)低廉,適于推廣使用。但微生物法測(cè)定的是總效價(jià),不能分別測(cè)定主成分和相關(guān)組分或有關(guān)物質(zhì)的含量,不能準(zhǔn)確反應(yīng)氨基糖苷類抗生素的內(nèi)在質(zhì)量,且影響因素復(fù)雜,操作費(fèi)時(shí)。隨著對(duì)抗生素結(jié)構(gòu)及其物理化學(xué)性質(zhì)的進(jìn)一步了解,對(duì)于含有抗菌活性的雜質(zhì)或多組分的抗生素,輔以控制組分及雜質(zhì)的方法,以彌補(bǔ)效價(jià)法測(cè)定含量專屬性不強(qiáng)的缺點(diǎn),達(dá)到監(jiān)控藥品質(zhì)量的目的?，F(xiàn)介紹目前已應(yīng)用于氨基糖苷類抗生素質(zhì)量控制的幾種方法。1.1氨基糖苷類化學(xué)成分的色譜檢測(cè)薄層色譜法操作簡(jiǎn)單,耗時(shí)短,所需設(shè)備價(jià)廉,在氨基糖苷類抗生素的鑒別及有關(guān)物質(zhì)檢查中占有主要地位,《中國(guó)藥典)2005年版收載的l2種氨基糖苷類抗生素中有8種采用薄層色譜鑒別方法。1.2高效液鉻hplc法由于氨基糖苷類抗生素沒有特征的紫外吸收,采用通常的UV檢測(cè)器檢測(cè)較困難,故該類藥物的HPLC法以衍生化與非衍生化法為主。1.2.1熒光物質(zhì)檢測(cè)衍生化方法可分為柱前衍生和柱后衍生兩種。利用氨基糖苷類抗生素結(jié)構(gòu)中的活潑基團(tuán)(如氨基、羰基)與衍生化試劑形成紫外區(qū)有吸收或有熒光的物質(zhì),以便于紫外檢測(cè)或熒光檢測(cè)。柱前衍生化方法較簡(jiǎn)單;柱后衍生化采用在線技術(shù),便于自動(dòng)化測(cè)定,但需要有特殊的衍生化反應(yīng)裝置,因此柱前衍生化方法較多被采用。但由于衍生化法供試品制備步驟繁瑣,色譜條件多選用含鹽較多的流動(dòng)相,必要時(shí)需加入離子對(duì)試劑,長(zhǎng)期應(yīng)用有損色譜柱及進(jìn)樣器的使用壽命;同時(shí)影響試驗(yàn)結(jié)果因素較多,重現(xiàn)性差。因此,非衍生化方法的開發(fā)則更具有實(shí)用價(jià)值。1.2.2檢測(cè)法elsd氨基糖苷類抗生素的非衍生化分析通常采用了新的檢測(cè)技術(shù):如示差折光檢測(cè)法、UV末端吸收法、間接測(cè)定法、脈沖電化學(xué)檢測(cè)器法、質(zhì)譜檢測(cè)法和蒸發(fā)光散射檢測(cè)法(ELSD)等。新型檢測(cè)器的使用擴(kuò)大了HPLC非衍生化方法在氨糖類抗生素中的應(yīng)用,相比之下,各有特點(diǎn)。近年來(lái),在藥學(xué)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用的蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)是一種通用型質(zhì)量檢測(cè)器,對(duì)任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品均能被檢測(cè),并且在一定條件下物理性質(zhì)相似的物質(zhì)其響應(yīng)因子基本一致,可以滿足樣品有關(guān)物質(zhì)檢查和含量測(cè)定等多項(xiàng)藥物質(zhì)量控制的要求,專屬性強(qiáng)、靈敏度高,在氨基糖苷類抗生素的分析中占有重要的地位。1.3衍生化gc分析氨基糖苷類抗生素不具揮發(fā)性,需要提高溫度用硅烷化試劑衍生化后進(jìn)行GC分析。《USP》26版、《BP》2002年版中鹽酸大觀霉素的測(cè)定即采用六甲基硅烷衍生化后FID檢測(cè)。1.4高效液相色譜圖--hpce法毛細(xì)管電泳是上世紀(jì)80年代后期發(fā)展起來(lái)的一種分離分析技術(shù),HPCE是一類以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的新型液相色譜分離技術(shù)。1.5氨基糖曾類化合物質(zhì)譜特性電噴霧離子阱多級(jí)質(zhì)譜法(ESI-MS)技術(shù)屬于軟電離方式,可在溫和的條件下獲得待測(cè)物的準(zhǔn)分子離子峰。氨基糖昔類化合物在結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)伯胺或仲胺基團(tuán)顯弱堿性,在質(zhì)譜上具有較強(qiáng)的正離子響應(yīng)。ESI-MS法不需要標(biāo)準(zhǔn)品即可對(duì)混合物中除同分異構(gòu)體外的各組分進(jìn)行定性和半定量分析,方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便。2氨基糖苷類抗生素檢測(cè)方法對(duì)比氨基糖苷類抗生素有關(guān)物質(zhì)主要為合成前體、異構(gòu)化產(chǎn)物、其它副產(chǎn)物和儲(chǔ)存期降解物,其結(jié)構(gòu)與主成分較為相似。故能用于測(cè)量氨基糖苷類抗生素含量的靈敏度高、專屬性強(qiáng)的方法,基本都可用于其有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)?；跈z測(cè)方法的實(shí)用性和普及性,目前國(guó)內(nèi)制藥行業(yè)用于檢測(cè)該類抗生素有關(guān)物質(zhì)的最為常用方法主要為色譜法(TLC法,柱前衍生HPLC法、柱后衍生HPLC法,HPLC-ELSD法),查閱了近幾年國(guó)家藥品審評(píng)中心對(duì)氨基糖苷類抗生素已批質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)檢查方法與限度,歸納總結(jié)(見表1)。從上表氨基糖苷類抗生素已批質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)檢查方法與限度的變化上可以看出,氨基糖苷類抗生素的有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法正逐漸從經(jīng)典的TLC法和影響因素眾多的HPLC衍生化法