維生素E（VitaminEVE）試劑盒說明書

第第頁維生素E（VitaminE，VE）試劑盒說明書維生素E（VitaminE，VE）試劑盒說明書微量法100T/48S測(cè)定意義：維生素E（VitaminE）是一種脂溶性維生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是生物體中最重要的抗氧化劑之一，能阻攔不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷，維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整性和正常功能，具有延緩變老、防備溶血性貧血作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食德行業(yè)具有較高的應(yīng)用價(jià)值。測(cè)定原理：VE還原Fe3+為Fe2+，F(xiàn)e2+與1,10菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物，在530nm有特征汲取峰。自備試驗(yàn)用品及儀器：天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、漩渦震蕩儀。試劑構(gòu)成和配制：提取液：液體100mL×1瓶，4℃保管。試劑一：液體2mL×1瓶，4℃避光保管。試劑二：液體2mL×1支，4℃保管。試劑三：液體2mL×1支，4℃保管。試劑四：液體6mL×1瓶，4℃保管。樣本處理：1.組織：依照質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，勻漿后用提取液定至1mL，定至在漩渦混勻儀上震蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取上層測(cè)定。2.細(xì)胞：依照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500～1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波碎裂細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）后在漩渦混勻儀上震蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取上層測(cè)定。3.血清：取0.1mL，加0.9mL提取液，漩渦儀混勻上震蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取上層測(cè)定。測(cè)定操作：對(duì)照管測(cè)定管樣品（μL）100100試劑一（μL）2020試劑二（μL）20試劑三（μL）20充分混勻，25℃反應(yīng)5min試劑四（μL）6060充分混勻，于微量石英比色皿/96孔板，無水乙醇調(diào)零，測(cè)定530nm處吸光值，記為A對(duì)照管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管A對(duì)照管。計(jì)算公式：a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.22x+0.0065R2=0.99781.依照蛋白含量計(jì)算VE含量（μg/mgprot）=（△A0.0065）÷0.22×V反總÷（V樣×Cpr）=9.09×（△A0.0065）÷Cpr2.依照樣本質(zhì)量計(jì)算VE含量（μg/g）=（△A0.0065）÷0.22×V反總÷（V樣×W÷V樣總）=9.09×（△A0.0065）÷W3.依照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算VE含量（μg/104cell）=（△A0.0065）÷0.22×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）=9.09×（△A0.0065）÷細(xì)胞數(shù)量4.依照液體體積計(jì)算VE含量（μg/mL）=（△A0.0065）÷0.22×V反總÷V樣×10=90.9×（△A0.0065）V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，gb.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.11x+0.0065R2=0.99781.依照蛋白含量計(jì)算VE含量（μg/mgprot）=（△A0.0065）÷0.11×V反總÷（V樣×Cpr）=18.18×（△A0.0065）÷Cpr2.依照樣本質(zhì)量計(jì)算VE含量（μg/g）=（△A0.0065）÷0.11×V反總÷（V樣×W÷V樣總）=18.18×（△A0.0065）÷W3.依照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算VE含量（μg/104cell）=（△A0.0065）÷0.11×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）=18.18×（△A0.0065）÷細(xì)胞數(shù)量4.依照液體體積計(jì)算VE含量（μg/mL）=（△A0.0065）÷0.11×V反總÷V樣×10=181.8×（△A0.0065）V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體