hplc法測定不同產地和不同采收期前胡藥材中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量

hplc法測定不同產地和不同采收期前胡藥材中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量

前胡是波形科植物的干燥根系。具有散風清熱、理氣散粘液的功效，并能治療風熱咳嗽、粘液多、粘液熱、呼吸困難和黃濃粘液。藥理研究表明,白花前胡具有鈣通道阻滯、降壓、抗腫瘤、抗病毒、抗炎及逆轉腫瘤多藥耐藥等多種生物活性。目前國內外對其藥理活性和鑒別研究較多,對其栽培品的采收期有報道,但對不同產地、不同采收期野生品與栽培品的系統(tǒng)質量評價研究未見報道。本研究利用HPLC測定不同產地、不同采收期野生與栽培品前胡藥材中白花前胡甲素(praeruptorinA)和白花前胡乙素(praeruptorinB)的含量,為其藥材的質量評價和資源合理利用提供科學依據(jù),并首次采用搖瓶法處理前胡樣品,提高了有效成分的可檢測性。1材料表面1.1色譜柱及清洗器高效液相色譜儀(島津LC-20A),DiamonsilC18(2)(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱,H.S.G-IC-2型電熱恒溫水浴鍋,KQ3200型超聲波清洗器,1/萬Sartorius型電子天平。1.2樣品前胡的制備前胡藥材均自江西、浙江、安徽、重慶等產地采集及深圳藥店購買,經(jīng)江西中醫(yī)藥大學范崔生教授鑒定為PeucedanumpraeruptiormDunn正品前胡。1.3藥品、試劑與儀器白花前胡甲素(國家食品藥品檢定研究院,批號MUST-12010307)、白花前胡乙素對照品(國家食品藥品檢定研究院,批號111904-201203),甲醇(色譜純,天津賽孚瑞科技有限公司),純凈水(杭州娃哈哈集團),甲醇、無水乙醇、三氯甲烷(以上均為分析純)。2方法和結果2.1對照溶液的制備取白花前胡甲素對照品和白花前胡乙素對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1mL各含55μg的混合溶液,即得。見圖1。2.2加甲醇回收及搖瓶制備取本品粉末(過60目篩)約0.1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25mL,搖瓶50min,搖勻,濾過,并轉移至25mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。見圖2。2.4標準曲線及線性回歸分析精密吸取上述對照品溶液0.5,10,20,30,40μL,注入液相色譜儀,進行分析。以進樣量(X,μg)為橫坐標對峰面積積分值(Y)為縱坐標作圖,用最小二乘法進行線性回歸,得標準曲線回歸方程,Y白花前胡甲素=114902X-5573.9(R2=1);Y白花前胡乙素=124857X-6567.5(R2=1)。結果表明白花前胡甲素、白花前胡乙素峰面積值與進樣量均有良好的線性關系。2.5含量測定次及測定次數(shù),計算峰面積、計算含量精密吸取上述對照品溶液10μL,于同一天內連續(xù)進樣5次,測定峰面積,計算含量。結果表明白花前胡甲素的日內精密度RSD0.14%,白花前胡乙素的日內精密度為RSD0.08%日內精密度良好,表明儀器較為穩(wěn)定。2.6穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液10μL分別于配制后的0,2,4,6,8,10h進樣,按上述色譜條件測定峰面積,計算含量,白花前胡甲素穩(wěn)定性的RSD0.17%,白花前胡乙素穩(wěn)定性的RSD0.5%,表明處理后的樣品在10h內穩(wěn)定。2.7樣品溶液的制備取同一產地白花前胡樣品6份,每份約0.5g,精密稱定,按樣品溶液制備方法制備樣品。精密吸取上述供試品溶液各10μL進行分析,測定其峰面積積分值,計算平均含量,白花前胡甲素RSD1.13%,白花前胡乙素RSD0.87%。2.8含量測定取樣品(甲素含量2.73%,)50mg,加入甲醇25mL,搖瓶結束后,過濾,取1mL定量,加對照品(3.3g·L-1)10μL加進1mL中,在上述色譜條件下測定。見表1。2.9樣品含量測定精密稱取10個產地的白花前胡藥材,按2.2項下方法操作制備供試品溶液,按上述液相色譜條件進樣10μL,進行含量測定,測定峰面積積分值,計算樣品含量,見表2。精密稱取不同采收期的白花前胡藥材,按2.2項下方法操作制備供試品溶液,按上述液相色譜條件進樣10μL,進行含量測定,測定峰面積積分值,計算樣品含量,結果見表3。3討論3.1樣品測定條件從贛、浙、皖、渝、湘等地所采集藥材樣品進行有效成分含量分析發(fā)現(xiàn),江西產野生與栽培品含量均明顯超過藥典標準1~3倍(只有一個樣的乙素含量未達標),重慶前胡樣品達標。而浙、皖、湘等地所采樣品,均有不同程度的白花前胡甲、乙素未達標。一些樣品達不到藥典標準可能原因如下:一是樣品的采集時間不一,儲存時間的不同,導致白花前胡乙素不達標;二是該樣品為前胡偽品,幾個湖南產地的樣品幾乎沒有檢測出白花前胡甲素比較可能的原因是誤將紫花前胡代替前胡正品來使用。3.2不同采收期的前胡藥材野生品測定結果從表3測定結果可以看出,江西產地栽培品與野生品的內在成分相近,栽培品有效成分含量顯著高于野生品,質優(yōu)。從表3含量分析結果可以看出,不同采收期的前胡藥材野生品中白花前胡甲素、乙素的含量存在較大差異,其中白花前胡甲素含量次年3月>10月>9月,白花前胡乙素含量次年1月>10月>9月。從有效成分累積總量看,江西產前胡藥材的最佳采收期為栽培次年的1~3月,而野生品的采收時間為當年的10~12月。3.3不同產地前胡藥材含量的比較從表2測定結果可以看出,收集不同產地前胡藥材中白花前胡甲素的含量存在顯著的差異。由于藥材的采收地的生長環(huán)境影響其化學成分,所以藥材的品質與產地存在著重要的關系,通過對不同產地的前胡樣品的分析,可以更全面地控制前胡的品質。江西栽培品有效成分含量明顯高于浙江、安徽等產區(qū)前胡藥材的40%~120%。通過含量的比較研究,江西、重慶等產地的白花前胡甲、乙素都符合藥典標準,而浙江、安徽等地前胡藥材中的白花前胡甲素符合藥典標準,白花前胡乙素含量不達標;深圳藥店購買的4批湖南產的白花前胡甲素、乙素均不符合藥典標準。由此可見,江西道