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文檔簡介
錄目(一)中文摘要(二)英文摘要(一)剛錄目(一)中文摘要(二)英文摘要(一)剛舌(二)材料和方法1.材料2.方法1.胃腸大體形態(tài)觀察2.免疫熒光共聚焦顯微鏡檢測3.透射電鏡觀測(五)結(jié)論(六)參考文獻(xiàn)三、綜述(一)綜述要摘背景:脾氣虛證(syndromeofdeficiencyofspleen—qi,SDSQ吸收、內(nèi)分泌和免疫等功能,可有效防治脾氣虛證。Cajal間質(zhì)細(xì)胞nervous要摘背景:脾氣虛證(syndromeofdeficiencyofspleen—qi,SDSQ吸收、內(nèi)分泌和免疫等功能,可有效防治脾氣虛證。Cajal間質(zhì)細(xì)胞nervoussystem,ENS)與平滑肌細(xì)胞參與胃腸運(yùn)動的調(diào)節(jié)。同時,臨床和動物實驗研究都表明針刺足三里和天樞穴糾正胃腸運(yùn)動功能紊亂,從而有效治療脾氣虛證作用的影響,探討脾氣虛證致胃腸運(yùn)動障礙的產(chǎn)生機(jī)制及針刺足三里穴和天樞治療脾氣虛證的機(jī)理方法:選取清潔級成年Wistar大鼠60只,體重1809-2209,雌雄各半,隨分組:①正常對照組(10只);②脾氣虛證組(10只);③自然恢復(fù)組(10只④針刺足三里穴治療組(10只);⑤針刺天樞穴治療組(10天樞穴治療組(10只)。正常對照組每只大鼠按照脾氣虛證組灌服等量生理鹽水飲食不限。脾氣虛證大鼠動物模型建立依據(jù)陳小野的方法。針刺“足三里1胃腸大體形態(tài)觀正常對照組:胃腸蠕動良好,腸管色澤紅潤,無擴(kuò)張、1胃腸大體形態(tài)觀正常對照組:胃腸蠕動良好,腸管色澤紅潤,無擴(kuò)張、水腫,形態(tài)完好。氣虛證組:腸管呈暗紅色,漿膜充血、水腫,胃腸蠕動波少見,針刺足三里穴療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組針灸治療后,腸管呈紅色腸蠕動基本正常,粘膜水腫基本減退2免疫熒光共聚焦顯微鏡檢相互間的連接正常,形成完整的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)。脾氣虛證組大鼠與正常對照組相比PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)纖維數(shù)量均明顯減少(P<0.05),熒光氣虛證組無差異。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天對照組無明顯差異,各針灸組之間無明顯差異常。造模成功后,脾氣虛證組與正常對照組相比,ICC數(shù)量明顯減少,熒光值均明顯下降(P<0.05),ICC網(wǎng)絡(luò)明顯受到破壞。自然恢復(fù)組較之正常對照組小腸ICC數(shù)量減少,熒光IOD值均明顯下降(尸<o.05),ICC網(wǎng)絡(luò)受損,較之脾虛證組無明顯差別。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+樞穴治療組較之于脾氣虛證組和自然恢復(fù)組,ICC數(shù)量明顯增加,熒光IOD值明顯上升(尸<0.05),ICC網(wǎng)絡(luò)基本保持完整,與正常對照組無明顯差異,各針構(gòu)受損,較之脾氣虛證組無明顯差別。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療2針灸組之間無差別細(xì)胞器針灸組之間無差別細(xì)胞器數(shù)量較正常對照組減少,細(xì)胞核電子密度不勻,形態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂。針刺足里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組ICC胞漿內(nèi)細(xì)胞數(shù)量較多,形態(tài)結(jié)構(gòu)較為清楚,細(xì)胞核基本正常(2)脾氣虛時,小腸PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)纖維數(shù)量明顯減少腸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重;針刺足三里穴及天樞穴能夠減輕腸神經(jīng)的損壞,維腸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的完整inandSmoothinRatCajDeficiencyofSpleen—SANinSupervisor:ProfessorQiQing— Syndromeofdeficiencyofspleen- characterized distensioninandSmoothinRatCajDeficiencyofSpleen—SANinSupervisor:ProfessorQiQing— Syndromeofdeficiencyofspleen- characterized distensionandinducestofunctiongastrointestinalmotility.Thereforetherecoveryofthefirstandsteptoremedythe distributedingastrointestinaltissueswhichshowahi曲lyand tractwhichmotility.ICCisthemediumofthenervesignalconveyingfromtheentericnervegastrointestinaltract.ENS,ICCsmoothmuscleofsmoothtonetworkstructureandconstitutethefunctionalunitandSMCgastrointestinaldysfunction.Theresultsof andrelationshipwithstudyshowedthatthereseriousgastrointestinalmotilitydysfunctioninthewithSDSQ,andacupunctureincorrecttreattheSDSQ.Butthegastrointestinalmotilitydysfunctionwasnot4makethemodeldobserveinand‘smoothmusclecellsinratsofinst36andeffectsdisordersbyinst36ands25wouldWistarratsofboth180Sixtyrandomlydividedintoinst36group(n:1recoverygroup(n_1inst36andmakethemodeldobserveinand‘smoothmusclecellsinratsofinst36andeffectsdisordersbyinst36ands25wouldWistarratsofboth180Sixtyrandomlydividedintoinst36group(n:1recoverygroup(n_1inst36ands25ins25group(n_1(n=lO).Themodelofwasestablishedaccordingtonormalsalinefortheratsinestablishment10 successful,thecmdistalthebeginningwastakedandWasstudied9.5(PGP9.5),vesicularproteintransporter(VAChT),substanceneuronalnitricwithandconfocalpreparationdouble-andtransmission Comparedwiththoseincontrolgroup,thetractsweredistendedandintestinalobstructionsignificantlyintheratsinalleviatedinthedistentionCompared、 SDSQacupunctureNerve:BeforemodelnumberofintegratedopticalmodelinstatisticallynumberandIODvalueandNOnumberwiththedecreasedinvalueandNOrecoverygroupcomparedwithcontrolgroup妒<O。05).AfterofthenumberandIODofPGP9.5,Ach,SP,VIPandinthewithandgroupbetweenthegroup伊statisticallygroupandthreetreatedvalueofinthe numberofofICC:BeforetheSDSQmodelwastheandvalueofICCweredecreasedinvalueandNOrecoverygroupcomparedwithcontrolgroup妒<O。05).AfterofthenumberandIODofPGP9.5,Ach,SP,VIPandinthewithandgroupbetweenthegroup伊statisticallygroupandthreetreatedvalueofinthe numberofofICC:BeforetheSDSQmodelwastheandvalueofICCwere eachandIODvalueofICCmodeldecreasedcompared invalueofICCrecoveryICCinincreasedcomparedwithacupunctureandstatisticallygroup儼andthreenumberandIODvalueintheIODvalueofSMCmodelWastheinIODvalueofSMCwithofSMCingroup(P<0.05).TheIODtreatmentofMthgroup儼IODvalueofSMCintheacupunctureandwaswithrecoverygroup伊SDSQstatisticallysignificancebetweentheandthreetreatedgroupsthevalueofTheICCandovalnucleuswithreticulumnucleus.Mitochondria,smootharound6bodieswereabundant.ComparedtheultrastructuralfeaturesofICCofSDSQwiththegroup,ICCultrastructuralfeaturesofICCnucleiofintheperinuclearandtheWasobserved.Mitochondriamembraneshrunken,andthethefeaturesofICCofandgroup,the significantlybodieswereabundant.ComparedtheultrastructuralfeaturesofICCofSDSQwiththegroup,ICCultrastructuralfeaturesofICCnucleiofintheperinuclearandtheWasobserved.Mitochondriamembraneshrunken,andthethefeaturesofICCofandgroup,the significantlyofConclusions:(1)Grossintheratsrevealedaintestinaldistentionands25couldalleviatetheindecreasedinSDSQ.TheentericandNOofinst36ands25enteticnerveandtheentericnervenetwork.(3)ThenumberandIODofICC andtheinratsands25infeaturesofICCenhancetheandIODoftheICCandrepairtheICCnetwork.(4)Theseverelydamagedthesignificantlyinst36ands25featuresofinratsenhancetheIODoftheICC ICC-SMCnetwork.(5)Thedamagedinst36andfeaturesofICCcouldmaintaintheultrastructuralfeaturesof spleen7賓吉吉刖宣脾氣虛證以疲乏,納少,便溏等為主要臨床表現(xiàn)。中西醫(yī)結(jié)合臨床研究表脾氣虛證賓吉吉刖宣脾氣虛證以疲乏,納少,便溏等為主要臨床表現(xiàn)。中西醫(yī)結(jié)合臨床研究表脾氣虛證表現(xiàn)有消化道運(yùn)動功能紊亂、消化道吸收功能障礙、內(nèi)分泌功能低下多種改變【11。同時有動物實驗結(jié)果顯示:脾氣虛證大鼠胃電波異常,胃排空出現(xiàn)顯延遲,動力低下;脾氣虛證表現(xiàn)為胃腸運(yùn)動功能失調(diào)[1】。改善胃腸動力可有效恢復(fù)消化道吸收、內(nèi)分泌和免疫等功能,從而有效防治脾氣虛證ofCajal,ICC)是胃腸運(yùn)動的起搏細(xì)胞,產(chǎn)Cajal間質(zhì)細(xì)胞慢波電位【3】,有神經(jīng)信息的輸送作用,將腸神經(jīng)系發(fā)來的信號輸送給平滑肌細(xì)胞 cells,SMC),從而參與胃腸動力調(diào)節(jié)【4】。ICC通過突觸相互連接成網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu),廣泛存在于胃腸道中[21腸神經(jīng)通過釋放相應(yīng)的神經(jīng)遞質(zhì)作用于ICC,ICC將其整合后的信號發(fā)SMC,引起平滑肌的收縮與舒張。腸神經(jīng)、ICC、平滑肌三者相互聯(lián)系,參與胃同時,臨床和動物實驗研究都表明針刺足三里穴和天樞穴可糾正胃腸運(yùn)動能紊亂,從而有效治療脾氣虛證【5,6】本實驗旨在以脾氣虛證大鼠模型為實驗對象,觀測脾氣虛證大鼠小腸ENSICC和SMC的形態(tài)學(xué)變化以及針刺足三里穴、天樞穴修復(fù)作用的影響,探討脾1.實驗儀II激光掃描共聚焦顯微鏡(徠卡,德國SPSSl9.0數(shù)據(jù)分析軟1.實驗儀II激光掃描共聚焦顯微鏡(徠卡,德國SPSSl9.0數(shù)據(jù)分析軟件(美國尼康SMZ800體視顯微鏡(日本2.實驗試劑和藥小鼠抗大鼠Q.a(chǎn)ctin多克隆抗體(圣克魯斯生物技術(shù)公司羊抗大鼠c.Kit多克隆抗體(圣克魯斯生物技術(shù)公司,美國)山羊抗大鼠UCH.L1多克隆抗體(圣克魯斯生物技術(shù)公司,美國羊抗大鼠VAChT多克隆抗體(圣克魯斯生物技術(shù)公司,美國羊抗大鼠SP多克隆抗體(圣克魯斯生物技術(shù)Tris.Hcl(Amresco,美國TritonX.100(Amresco,美國多聚賴氨酸(Sigma,熒光封片劑(Vecter,美國25%戊二醛,抗體稀釋液,磷酸鹽緩沖液等均為國造模方藥:方①:番瀉葉、厚樸、枳實(2:1:1)制成200%濃度煎劑。方廣豆根、造模方藥:方①:番瀉葉、厚樸、枳實(2:1:1)制成200%濃度煎劑。方廣豆根、旋覆花、檳榔(3:l:1)制成250%濃度煎劑。造模用藥購自大連同仁堂3.選取60只清潔級成年Wistar大鼠,雌雄各30只,體重180.2209。購自醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心,合格證號:SCXK(遼)2008.0002刺足三里+天樞穴治療組(10只)1建立脾氣虛模野的方法【7】,用體質(zhì)篩選、苦寒瀉下和耗氣破氣相結(jié)合方法,建立脾氣虛證大鼠物模型。選用:①生大黃、厚樸、枳實(2:1:1)制成200旋覆花、檳榔(3:1:1)制成250%濃度煎劑。①和②輪換灌胃,前18d,每天清瘦,乏力畏寒,毛色無光或行走歪斜,腹瀉,體重下降等表現(xiàn),說明脾氣虛造模成功。正常對照組灌生理鹽水30d“足三里”和“天樞”取穴方法依據(jù)《實驗針灸學(xué)》【81。選用30號0.5寸針,針刺深度0.3.0.5cm。針刺后接穴位神經(jīng)刺激儀。取疏密波,頻率2/15Hz;出電流從0.1mA開始逐漸增大至0.4mA,以毫針明顯顫動,且大鼠能耐受為度每日上午7點.9點電針20min,每日1次,連續(xù)15天。造模成功一整天后完整白基因產(chǎn)物9.5抗體,乙酰膽堿抗體、P物質(zhì)抗體、血管活性腸肽抗體、神經(jīng)性氧化氮合酶抗體,及c.Kit和SMC行免疫熒光雙標(biāo)共聚焦顯微鏡檢測。制作標(biāo)用于透射電鏡觀測2激光掃描共聚焦顯微鏡分2.1制備小腸肌層全厚標(biāo)聚甲醛浸泡,4。C下置24h。解剖顯微鏡下,去除黏膜和黏膜下層,制備小全厚標(biāo)本【9】2.2免疫熒光聚甲醛浸泡,4。C下置24h。解剖顯微鏡下,去除黏膜和黏膜下層,制備小全厚標(biāo)本【9】2.2免疫熒光標(biāo)參照Brehmer等【10(1)標(biāo)本浸泡在PH7.6的0.05MTris—HCL液中,浸泡4h(溫度(2)抗體.a(chǎn)ctin抗體(1:200稀釋),山羊抗大鼠c.Kit抗體(1:200稀釋),山羊抗大PBS沖洗標(biāo)本3次X(6)0.05MPBS沖洗全厚標(biāo)本3次X采用免疫熒光標(biāo)記方法,分別利用囊泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)體(VAChT)抗體、物質(zhì)(SP)抗體、血管活性腸肽(VIP)和一氧化氮合酶(nNOS)標(biāo)記相應(yīng)纖維;UCH.L1特異性標(biāo)記PGP9.5小腸神經(jīng)纖維;c.Kit特異性標(biāo)記特異性標(biāo)記SMC。利用40x油鏡,數(shù)值孔徑為1.3。c.Kit、PGP9.5、VAChT、SP、VIP和nNOS陽性熒本隨機(jī)采集2個區(qū)域,用Image.ProPlus6.0進(jìn)行半定量分33.1電鏡標(biāo)本取材和固造模成功后,取距幽f-j10cm上段小腸,PBS本隨機(jī)采集2個區(qū)域,用Image.ProPlus6.0進(jìn)行半定量分33.1電鏡標(biāo)本取材和固造模成功后,取距幽f-j10cm上段小腸,PBS1xlx2mm3長方體。以上操作10min內(nèi)完成3.2電鏡標(biāo)本制(1)標(biāo)本4%戊二醛固定(2)0.05MPBS沖洗X10min,乙醇梯度脫水PBS沖洗X(4)鋨酸固定、梯度酒精脫水、環(huán)氧丙烷置換、EPon812(5)切片厚度為1.2lam,染色用2%甲苯胺藍(lán),光鏡下定位環(huán)形肌和縱的位置,行超薄切片(6)200目銅柵網(wǎng)固定切片(7)行醋酸鈾.檸檬酸鉛雙染色(8)分組標(biāo)記后保溫控濕封存(9)JEM.2000EX4數(shù)據(jù)處小腸肌層全厚標(biāo)本采用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察并采集圖像,以軟件進(jìn)行半定量分析。SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,計量資料用X±s表示方差分析。以P<0.05表示有顯著差異1胃腸解剖形態(tài)觀察正常對照組:胃腸形態(tài)完好,色澤紅潤,無擴(kuò)張、水腫,可見蠕動波。脾虛證組:腸管呈暗紅色,伴擴(kuò)張,漿膜充血、水腫,組織脆弱,胃腸蠕動波少見自然恢復(fù)組:腸管色澤灰暗,蠕動減弱,漿膜水腫、充血。針刺足三里穴治療組針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組:腸管呈紅色,腸蠕動基本正常粘膜水腫基本減退2免疫熒光共聚焦顯微鏡分析2.1小腸肌層腸神2.1.1小腸肌層PGP9.5神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)正常對照組大鼠2.1小腸肌層腸神2.1.1小腸肌層PGP9.5神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)正常對照組大鼠小腸PGP9.5神經(jīng)纖維網(wǎng)9.5神結(jié)構(gòu)完好,相互間的連接正常。脾氣虛證組大鼠與正常對照組相比狀結(jié)構(gòu)消失。自然恢復(fù)組大鼠較之正常對照組,小腸9.5神經(jīng)纖維數(shù)量減少<0.05),熒光IOD值降低(尸<0.05),彼此間的連接不連續(xù),網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)受損,里+天樞穴治療組大鼠較之于脾氣虛證組和自然恢復(fù)組,PGP9.5神經(jīng)纖維數(shù)量多(P<0.05),熒光IOD值明顯上升(尸<0.05),基本保持網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu),與l:正常對照:脾氣虛證:自然恢復(fù):針刺足三里穴治療:針刺天樞穴治:針刺足三里+天樞穴5O^斷器、牛。捌斟v裁蠹蝌嵌捌量}兮.暈2圖1.1:各組大鼠小腸PGP9.5神經(jīng)纖維計數(shù)分鯽:正常對照:脾氣虛證砌:自然恢復(fù)∞:針刺足三里穴治療:針刺天樞穴治∞:針刺足三里+天鯽:正常對照:脾氣虛證砌:自然恢復(fù)∞:針刺足三里穴治療:針刺天樞穴治∞:針刺足三里+天樞穴∞_單??贖∞.6融)d062345圖1.2:各組大鼠小腸PGP9.5熒光IOD值2.1.2小腸肌層ACh神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)實驗結(jié)果與PGP9.5具有相同趨勢(表2,圖2.2,圖2)ACh神經(jīng)纖維計數(shù)(個/視組注:與正常對照組比較,a尸<0.05;與脾氣虛證組和自然恢復(fù)組比較,叩<0.051:正常對照∞2瀝3約4:針刺足三里穴治療5:針刺天樞穴治療嵋6:針刺足三里+天樞∞^奇_霹十。捌斟v搽右蝌☆捌露嗣31rO34562圖2.1:各組大鼠小腸Aeh神經(jīng)纖維計數(shù)分1:正常對照234:針刺足三里穴治療5:針刺天樞穴治療6:針刺足三里+天樞穴警0I∞伯∞∞們∞嬲m345注:與1:正常對照234:針刺足三里穴治療5:針刺天樞穴治療6:針刺足三里+天樞穴警0I∞伯∞∞們∞嬲m345注:與正常對照組比較,a尸<o.05;與脾氣虛證組和自然恢復(fù)組比較,b尸<O.059.5具有相同趨勢(表3,圖3.2,圖3)正常對照^棗脾氣虛證自然恢復(fù)針刺足三里穴治療舞針刺天樞穴治V自針刺足三里+天樞療0l23456圖3.1:各組大鼠小腸SP神經(jīng)纖維計數(shù)分正常對照脾氣虛證自然恢復(fù)蓍蓉:針刺足三里穴治療:針刺天樞穴治:針刺足三里+天樞穴06345l29。5具有相同趨勢(表4,圖4。2.1。4小腸正常對照脾氣虛證自然恢復(fù)蓍蓉:針刺足三里穴治療:針刺天樞穴治:針刺足三里+天樞穴06345l29。5具有相同趨勢(表4,圖4。2.1。4小腸肌層VIP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)實驗結(jié)果與4.2,圖4)VIP神經(jīng)纖維計數(shù)(個/視正常對照27.60-脾氣虛證2308.80-19.50士2091.10士19.20-士5337.80士針刺足三里穴治26.30-針刺天樞穴治25.20-x3.97“4393.80-針刺足三里+天樞穴治療4962.70士25.10士正常對照脾氣虛證畬是專劃雹蒙煮自然恢復(fù)針刺足三里穴治療針刺天樞穴治針刺足三里+天樞穴療莒0623451圖4.1:各組大鼠小腸VIP神經(jīng)纖維計數(shù)分正常對照脾氣虛證自然恢復(fù)針刺足三里穴治療針刺天樞穴治刪蓄oH蓉^針刺足三里+天樞療正常對照脾氣虛證自然恢復(fù)針刺足三里穴治療針刺天樞穴治刪蓄oH蓉^針刺足三里+天樞療0456239.5具有相同趨勢(表5,圖2.1.5小腸肌層NO神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)實驗結(jié)果與5.2,圖5)表5大鼠小腸肌層NO神經(jīng)纖維表達(dá)分析(x士l:正常對照跖脾氣虛證自然恢復(fù)∞針刺足三里穴治療針刺天樞穴治針刺足三里+天樞加埒療^幽_日零÷。捌斟v“誓蜊露盆O235641:正常對照脾氣虛自然恢復(fù)針刺足三里穴治療1:正常對照脾氣虛自然恢復(fù)針刺足三里穴治療針刺天樞穴治掣量泉粼針刺足三里+天樞療蛞∞囂∞翁∞坯如02.2ICC網(wǎng)絡(luò)正常對照組大鼠小腸ICC相互間連接完好,ICC脾氣虛證組與正常對照組相比,ICC數(shù)量明顯減少(尸<0.05),熒光IOD值均明下降(氏0.05),相互間連接出現(xiàn)斷裂,ICC完整的網(wǎng)絡(luò)消失。自然恢復(fù)組較之常對照組,小腸ICC計數(shù)下降(P<0.05),熒光IOD值均明顯下降(火網(wǎng)絡(luò)受損,與脾氣虛證組差別不明顯。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療以及針刺足三里+天樞穴治療組較之于脾氣虛證組和自然恢復(fù)組,大鼠小腸ICC量明顯增加(P<O.05),熒光IOD值均明顯升高(P<O.05),ICC網(wǎng)絡(luò)基本保持整,與正常對照組無明顯差異,各針灸治療組之間無明顯差異(表6,圖圖6)2.3SMC實驗結(jié)果SMC細(xì)胞熒光IOD值與ICC具有相同趨勢(表6,圖圖6)正常對照弱脾氣虛證自然恢復(fù)∞針刺足三里穴治療針刺天樞穴治∞針刺足三里+天樞b療^幽警;I,牛。捌斟v弼墨苗冒0234561圖6.1:各組大鼠小腸ICC計數(shù)正常對正常對照弱脾氣虛證自然恢復(fù)∞針刺足三里穴治療針刺天樞穴治∞針刺足三里+天樞b療^幽警;I,牛。捌斟v弼墨苗冒0234561圖6.1:各組大鼠小腸ICC計數(shù)正常對照脾氣虛證自然恢復(fù)針刺足三里穴治療針刺天樞穴治針刺足三里+天樞遙白o(hù)H習(xí)lIW療034562正常對脾氣虛∞∞自然恢復(fù)∞∞針刺足三里穴治療針刺天樞穴治∞∞針刺足三里+天樞∞∞刪萏oH攀∞曾i啊療023456色質(zhì)主要分布在細(xì)胞核周邊,細(xì)胞質(zhì)少。有正常的線粒體和成熟的內(nèi)質(zhì)色質(zhì)主要分布在細(xì)胞核周邊,細(xì)胞質(zhì)少。有正常的線粒體和成熟的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)器。脾氣虛證組ICC數(shù)量減少,胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量明顯減少,細(xì)胞質(zhì)電子密度均,細(xì)胞核皺縮,基底膜不完整。線粒體嚴(yán)重水腫,可見破裂。細(xì)胞結(jié)構(gòu)明顯損。自然恢復(fù)組ICC胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量較正常對照組減少,細(xì)胞核電子密度不勻形態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞治療組ICC胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量較多,形態(tài)結(jié)構(gòu)較為清楚,基底膜較為正常,細(xì)核形態(tài)基本正常,超微結(jié)構(gòu)較脾氣虛證組和自然恢復(fù)組損傷明顯減輕,與正常照組無差別,各針灸組之間無差異(圖7)。論飲食不節(jié),勞逸失當(dāng)?shù)瓤芍缕獠蛔悖\(yùn)化水谷精微及運(yùn)化水濕功能減弱臨床以納少,腹脹,便溏,疲乏,食后胃脘不舒等為主要表現(xiàn)。脾氣虛常見于脘痛、脘腹脹滿,甚至大便溏薄,肢體疲乏。宋金時代李東垣創(chuàng)立“脾胃學(xué)說并著有《脾胃論》,提出“內(nèi)傷脾胃,百病由生”的論點。脾主運(yùn)化,脾氣主升脾氣虛證有腹脹便溏,食欲不振的特點。有實驗顯示,脾氣虛證可體現(xiàn)為腸運(yùn)在消化道全程壁內(nèi),腸神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元及神經(jīng)纖維有廣泛分布[12】。通過神substance,SP)等;抑制性遞質(zhì)以非腎上腺素非膽堿能noncholinergic,NANC)神經(jīng)遞質(zhì)為主,有一氧化氮(nitrogen,NO)、血管活腸肽peptide,VIP)、三磷酸腺營(adenosineATP)等【131。興奮性神經(jīng)肽與抑制性神經(jīng)遞質(zhì)一起對胃腸運(yùn)動的收縮與舒張起介作用,對胃腸道運(yùn)動功能也有重要影響[1419.5)是ENS神經(jīng)元和膠質(zhì)蛋白基因產(chǎn)物9.5(proteingene表達(dá)的一種蛋白酶,存在于中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)中。在研究腸神經(jīng)系統(tǒng)的形態(tài)征及結(jié)構(gòu)特點中 9.5有優(yōu)越的標(biāo)記功能,通過對其進(jìn)行標(biāo)記,可特異性地示ENS神經(jīng)元形態(tài)【14】膽堿能神經(jīng)元在腸神經(jīng)系統(tǒng)中貯備豐富【15】。腸神經(jīng)主要釋放的興奮性遞質(zhì)VIP,該遞質(zhì)主要表現(xiàn)為抑制作用,在胃腸道中的效應(yīng)主要是參與胃VIP,該遞質(zhì)主要表現(xiàn)為抑制作用,在胃腸道中的效應(yīng)主要是參與胃腸運(yùn)動的調(diào)控產(chǎn)生分段性運(yùn)動,腸道的過度收縮減弱了推進(jìn)性運(yùn)動的有效性116】。NANC的神從而調(diào)控胃腸舒張與黏膜分泌【17】。有文獻(xiàn)顯示,ICC表面有NO受體【18】,對出慢波電位【3】,有神經(jīng)信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)作用,參與胃腸動力的發(fā)生與調(diào)節(jié)【4】。ICC胞;ICC.DMP和ICC—IM的作用主要是轉(zhuǎn)導(dǎo)神經(jīng)信號賴ICC及神經(jīng)胃腸激素外,還需平滑肌的結(jié)構(gòu)、功能完好。平滑肌細(xì)胞呈長梭形長約40.60um系,介導(dǎo)胃腸動力的發(fā)生和調(diào)控足三里為足陽明胃經(jīng)合穴,是胃的下合穴?!夺樉募滓医?jīng)》中有“胃病者,等脾氣虛癥狀。《靈樞》:邪在脾胃,則病肌肉痛??皆調(diào)于足三里??梢娖饫飳ξ改c動力的修復(fù)有積極作用【22】。另有文獻(xiàn)報道,針刺大鼠足三里穴,中樞天樞是足陽明胃經(jīng)位于腹部的穴位,為大腸的募穴,是大腸腑氣輸注于腹的穴位天樞是足陽明胃經(jīng)位于腹部的穴位,為大腸的募穴,是大腸腑氣輸注于腹的穴位。《扁鵲神應(yīng)針灸玉龍經(jīng)》有“瀉泄??脾泄為災(zāi)若有余,天樞妙穴刺無虞明確提出“脾泄”可用針刺天樞治療。臨床實踐證明對胃腸功能紊亂所表現(xiàn)的秘、腹瀉等癥狀,針刺天樞穴可有效治療[24-251。同時,有研究顯示針刺足三里和天樞穴可糾正胃腸運(yùn)動功能紊亂,從而有效治療脾氣虛證【5,6]本實驗應(yīng)用共聚焦顯微鏡和透射電鏡,觀測脾氣虛證致胃腸動力障礙以及刺足三里穴和天樞穴修復(fù)大鼠小腸神經(jīng)、ICC和平滑肌細(xì)胞的形態(tài)變化。探討脾虛證胃腸運(yùn)動障礙的生理過程及針刺足三里穴和天樞穴治療脾氣虛證的機(jī)理9.5、ACh、SP、VIP和為研究腸神經(jīng)形態(tài)學(xué)變化,本實驗對大鼠小腸抗體進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記。共聚焦顯微鏡收集圖像,檢Nd,腸神經(jīng)形態(tài)學(xué)變化。果顯示,正常對照組9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)正常,神經(jīng)絡(luò)結(jié)構(gòu)完好。脾氣虛證組和自然恢復(fù)組9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)結(jié)受損,完整的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)消失。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)基本保持網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)刺足三里+天樞穴治療組本實驗提示,脾氣虛證大鼠小腸神經(jīng)的9.5,ACh,SP,VIP和NO結(jié)NO和VIP神經(jīng)通路同樣受損,胃腸蠕動不但沒有因為抑制性腸神經(jīng)的損傷而增強(qiáng)反而減弱。可能是由于抑制性神經(jīng)結(jié)構(gòu)的破壞使腸管出現(xiàn)過度收縮,而有效的腸運(yùn)動減,弱128J。針刺足三里和天樞穴可修復(fù)腸神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。提示針灸足三和天樞穴可通過保護(hù)腸神經(jīng)系統(tǒng)修復(fù)脾氣虛證胃腸運(yùn)動功能在胃腸道,c.Kit免疫活性只表達(dá)于ICC和肥大細(xì)胞【”-29],成為胃腸道ICC特征性標(biāo)志物。應(yīng)用c-Kit抗體的免疫組化檢測,可以選擇性標(biāo)識ICC,具有較的特異性【27】。近來,免疫雙標(biāo)記c—Kit和平滑肌,聯(lián)合共聚焦顯微鏡,為胃腸ICCSMC研究提供了新的思路【301為進(jìn)一步觀測ICC、SMC形態(tài)學(xué)變化,本實驗免疫熒光雙標(biāo)記c.Kit和抗體,在共聚焦顯微鏡下收集圖像,觀察其形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果顯示,正常對照大鼠小腸ICC之間相互聯(lián)系緊密,構(gòu)成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),SMC結(jié)構(gòu)完好。脾氣虛證組療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組ICC數(shù)量明顯增加舒張和神經(jīng)傳導(dǎo)活動因此受到影響,導(dǎo)致胃舒張和神經(jīng)傳導(dǎo)活動因此受到影響,導(dǎo)致胃腸運(yùn)動功能紊亂。提示針刺足三里ICC的超微結(jié)構(gòu)特征為體積小,細(xì)胞核較大,細(xì)胞質(zhì)少。細(xì)胞器豐富。脾氣針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組ICC細(xì)胞器數(shù)量較多,形態(tài)較持ICC結(jié)構(gòu)的完整,從而修復(fù)ICC基本功能共聚焦顯微鏡結(jié)合電鏡顯示,ICC網(wǎng)絡(luò)破壞、超微結(jié)構(gòu)受損,二者檢測結(jié)果互驗證,均表明脾氣虛證ICC網(wǎng)絡(luò)形態(tài)學(xué)明顯破壞。ICC作為聯(lián)系腸神經(jīng)和平肌結(jié)構(gòu)的損傷機(jī)制尚不明確。脾氣虛證對腸神經(jīng)、ICC、平滑肌細(xì)胞間信號擴(kuò)大足三里穴及天樞穴治療適應(yīng)癥有所裨益1.脾氣虛時,大鼠小腸充1.脾氣虛時,大鼠小腸充血水腫,小腸動力功能障礙:針刺足三里穴及天樞治療能夠顯著減輕小腸充血水腫,改善小腸功能2.脾氣虛時,小腸PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)纖維數(shù)量減少,腸經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重;針刺足三里穴及天樞穴能夠減輕腸神經(jīng)的損壞,維持腸經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的完整3.脾氣虛時,ICC數(shù)量減少,完整的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)明顯損壞;針刺足三里穴及樞穴可減輕ICC形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷,基本保持ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的完4.脾氣虛時,SMC結(jié)構(gòu)明顯損壞;針刺足三里穴及天樞穴可減輕SMC形壞,保持SMC結(jié)構(gòu)基本完整5.脾氣虛時,ICC超微結(jié)構(gòu)受損;針刺足三里穴及天樞穴能夠減輕ICC超微構(gòu)的破壞,維持ICC形態(tài)的基本完整HR.InterstitialcellsCajal—roleof3.Rui—mingLi,Yan-disordermodelsbasedontheabnormalinterstitialcellsJournalTraditionalChineseMedicine,2008,17(1ofinterstitialcellsinSM,SandersHR.InterstitialcellsCajal—roleof3.Rui—mingLi,Yan-disordermodelsbasedontheabnormalinterstitialcellsJournalTraditionalChineseMedicine,2008,17(1ofinterstitialcellsinSM,Sanders6華消化雜志,2007,27:748-雜志,2003,9(1):3-8.余曙光,郭義.實驗針灸學(xué),上海科學(xué)技術(shù)出版社,第一版,2009Y.Interstitial innitricguanylatetract.Neuroscience,2008,152(2):437-guinea-pigW.Twosubmucosalin10.Brehmerintestines.HistochemCellBiol,2010,133(2):149-11development:recent51:61-challenges.Autou13.Mitolo-ChieppaD,MansiG,RinaldiMA,GenualdoVM,MitoloCI,RinaldiM,Altomarerelaxationofhumancoloniccircularmuscle Sci,1998,43(12):2719-14.劉麗,施誠仁,張忠德,李敏,張文竹9.5在SD大鼠腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞成熟評價中的作用.中華4,)L夕I-科雜志,2003,24(3):254-1ST,Sigge彤Ktihnel彤ofrelaxationofhumancoloniccircularmuscle Sci,1998,43(12):2719-14.劉麗,施誠仁,張忠德,李敏,張文竹9.5在SD大鼠腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞成熟評價中的作用.中華4,)L夕I-科雜志,2003,24(3):254-1ST,Sigge彤Ktihnel彤ofoftheentericnervoussysteminwhole-mountpreparationsofthehumanJPediatrSurg,1994,4(5):274—1H,LiZ,YamatakaGJ,YokotaH,Watanabedistribution refractoryconstipation—diagnosisandmanagement.PediatrInt,2002,18(5-6):349—1YR,EdwardsintramuscularininhibitioninthePhysiol,2003,546(Pt3):751—18.SanderKM.AcaseforandmediatorscellsCajalas tract.Gastroenterology,1996,1119.KitoYH.ElectrophysiologicalpropertiesofgastricpacemakerSmoothMuscleRes,2003,39(5):163-20.WangSM.Intimaterelationshipbetweeninterstitialcellsandentericnervesinsmallintestine.CellRes,1295:247-2N6meth,P6ter networknormalhumanbowelandSzegediensis,2001,45(1-4):57-22.李瑞午,李翠紅,郭瑩,葛文津,夏立營.針刺對大鼠胃腸肌間神經(jīng)叢NO能經(jīng)元的影響.上海針灸雜志,2002,21(4):40—23.展淑琴,趙晏,郭新奎,王會生.電針對大鼠腦內(nèi)P物質(zhì)基礎(chǔ)表達(dá)的影響.山中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2007,31(6):492—24.聶紅梅,王富春.電針天樞穴治療老年人慢性腹瀉(脾胃虛弱型)臨床研究.老年學(xué)雜志,2004,24(11):1075-臨床觀察.中國誤診學(xué)雜志,2008,8(26):6335-P,CroweR,KammMA,Lennard-Joneslevelscolonidiopathicdisease.Gastroenterology,1990,99(3):666-SD,TorihashiS,WardSM.Developmentand27.Sanders老年學(xué)雜志,2004,24(11):1075-臨床觀察.中國誤診學(xué)雜志,2008,8(26):6335-P,CroweR,KammMA,Lennard-Joneslevelscolonidiopathicdisease.Gastroenterology,1990,99(3):666-SD,TorihashiS,WardSM.Developmentand27.SandersAJ,Torihashiofc-kitofinterstitialcellsandinPhysiol,1994,480:91-J,MikkelsenL,Kluppelandforinterstitialcellsgene30.李麗.多器官功能障礙綜合征炎癥機(jī)制的研究進(jìn)展.現(xiàn)代診斷與治療(3):164-ICC.SMC網(wǎng)絡(luò)與胃腸動力關(guān)系研究進(jìn)馬綜審胃腸道是人體消化吸收的主ICC.SMC網(wǎng)絡(luò)與胃腸動力關(guān)系研究進(jìn)馬綜審胃腸道是人體消化吸收的主要場所,為機(jī)體的新陳代謝提供所需的物質(zhì)和量【11。胃腸動力良好是人體正常的消化功能保持正常的基礎(chǔ)。胃腸動力障礙性疾臨床較常見,患病人群較多。因此,對胃腸動力產(chǎn)生及調(diào)節(jié)進(jìn)行探討有著深遠(yuǎn)義。研究胃腸動力產(chǎn)生及調(diào)節(jié)的具體機(jī)制,為進(jìn)一步治療胃腸動力障礙相關(guān)疾鋪平道路胃腸動力由胃腸平滑肌收縮和舒張產(chǎn)生,包括胃腸道平滑肌收縮的強(qiáng)弱和數(shù)。胃腸動力障礙主要是因為機(jī)體存在干擾胃腸道收縮與舒張的不利條件。有道,在胃腸平滑肌細(xì)胞可記錄到慢波,影響平滑肌收縮【2胃腸動力障礙性疾病臨床多見,有腸易激綜合征、痙攣性腹痛、惡心、嘔吐腹瀉和便秘等。當(dāng)機(jī)體胃腸運(yùn)動功能紊亂時,表現(xiàn)為消化不良癥狀,如腹脹、酸及食欲不振等;也可合并神經(jīng)系統(tǒng)病癥,如睡眠欠佳、頭暈、不安、頭痛等胃腸動力紊亂主要見于胃腸道消化功能障礙、胃腸道蠕動減弱、胃酸分泌過多胃食管反流等疾病患者,干擾病人日常生活習(xí)慣。同時,胃腸動力障礙性疾病某些癥狀如腹脹等,減少病人的飲食量,進(jìn)一步影像消化道對食物中所含機(jī)體胃腸動力的體液調(diào)節(jié)主要通過胃腸激素實現(xiàn):①以內(nèi)分泌途徑效應(yīng)于平滑表面的受體;②通過分布在胃腸道的神經(jīng)所產(chǎn)生的遞質(zhì),介導(dǎo)胃腸蠕動。同時,腸動力還受神經(jīng)支配調(diào)節(jié):①內(nèi)在神經(jīng)稱腸神經(jīng)系統(tǒng)(entericnervous2Cajal間質(zhì)細(xì)1893年,西班牙神經(jīng)解剖學(xué)家Cajal在胃腸道內(nèi)發(fā)現(xiàn)Cajal間質(zhì)細(xì)胞ofCajal,ICC)[31。近年來的研究表明其在胃腸動力的發(fā)生以及運(yùn)動障礙機(jī)中扮演重要角色【4】Ambache等【2】首次發(fā)現(xiàn)慢波電節(jié)律控制小腸收縮活動,并提出,慢波的產(chǎn)生ICC.DMP和ICC.IM的作用主要是轉(zhuǎn)導(dǎo)神經(jīng)信Ambache等【2】首次發(fā)現(xiàn)慢波電節(jié)律控制小腸收縮活動,并提出,慢波的產(chǎn)生ICC.DMP和ICC.IM的作用主要是轉(zhuǎn)導(dǎo)神經(jīng)信平滑肌之間。小腸的起搏點則主要分布在系膜的環(huán)肌與縱肌間【6】,分散的存在于腸各部。結(jié)腸的起搏區(qū)有兩個,一個位于結(jié)腸環(huán)肌淺層的粘膜下,由ICC.SM此之間相互連接形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)在此分布,另一個位于ICC.MY所在的系膜ICC.DMP因變異小鼠ICC.DMP參與神經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo),同時,ICC.DMP可敏感感受胃腸道的擴(kuò)張,產(chǎn)生由擴(kuò)張刺激所引起的慢波樣動倒7】。有文獻(xiàn)指出似,細(xì)胞之間相互連接形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),其排列與相鄰的肌纖維走行相平行,這細(xì)胞緊密連接于腸運(yùn)動神經(jīng)末端,介導(dǎo)神經(jīng)信號的傳導(dǎo)[9-10]平滑肌細(xì)胞(smoothmusclecells,SMC)是胃腸道的主要構(gòu)成成分,也是尚未明確,歸根結(jié)底胃腸道運(yùn)動紊亂應(yīng)是不利條件影響下平滑肌功能紊亂的所致平滑肌細(xì)胞的收縮需要諸多信號傳遞途徑彼此協(xié)調(diào)和溝通,是繁瑣多級別(calmodulin,CaM)結(jié)合激活肌球蛋白輕鏈激酶(myosinchainMLCK),活化的MLCK磷酸化肌球蛋白輕鏈激活肌球蛋白ATP酶,引起平滑的收(calmodulin,CaM)結(jié)合激活肌球蛋白輕鏈激酶(myosinchainMLCK),活化的MLCK磷酸化肌球蛋白輕鏈激活肌球蛋白ATP酶,引起平滑的收縮【13】。胞內(nèi)儲存鈣的釋放或胞外Ca2+的轉(zhuǎn)入可引起[Ca2+]i的上升。在胃腸滑肌舒張的過程中,細(xì)胞內(nèi)的Ca2+廣泛介導(dǎo)細(xì)胞功能活動,如分泌、運(yùn)動、分和代謝等功能,作為的第二信使有重要作用【14'1514胃腸動力與平滑肌、ICC、胃腸神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控有著密切聯(lián)系。消化道的多種能維持正常有賴于胃腸道平滑肌有效的的收縮和舒張。ICC主要控制平滑肌的基電活動,維持胃腸動力的起搏,胃腸神經(jīng)系統(tǒng)則對平滑肌的收縮或舒張主要起控作用ICCs具有自律性和興奮性是通過將電流傳導(dǎo)至相鄰的SMC,達(dá)到電流產(chǎn)生需的閾值,從而產(chǎn)生起搏電流。ICCs去極化時,Ca2+通道開放,產(chǎn)生向內(nèi)電流同時使胃腸道平滑肌發(fā)生超閾值去極化。所有ICC的電流的相加之和小于起搏流,傳播電流變大是通過眾多ICC之間的聯(lián)系傳遞和擴(kuò)大來實現(xiàn)之間的縫隙連接中分布著一種連接素蛋白,無機(jī)離子和部分小分子可自由經(jīng)過是細(xì)胞之間物質(zhì)和電擴(kuò)布的途徑【16】。有研究,在ICCs與SMC之間需要開放20通道方能傳遞去極化的SMC電流【17細(xì)胞溝通方式。連接蛋白(connexin,Cx)構(gòu)成連接通道??p隙Cx是一種結(jié)構(gòu)功能蛋白,構(gòu)成細(xì)胞之間的縫隙連接(gapjunction,GJ),有連接蛋白息主要是通過縫隙連接來實現(xiàn),縫隙連接在細(xì)胞間信號傳遞的電偶聯(lián)和物質(zhì)交的化學(xué)偶聯(lián)中起重要作用。有研究,Cx43較多分布在小腸內(nèi)c.kit陽性細(xì)胞上,經(jīng)纖維和肌細(xì)胞之間有較多CX[20]。Cx45則只位于ICC.DMP之間的縫隙連接內(nèi)【18】有文獻(xiàn)提出,在犬的小腸有數(shù)量不多的縫隙連接在ICC.MP與縱行肌或環(huán)肌之間有表達(dá)[19】。在細(xì)胞內(nèi)加入有色分子,從而有效顯示有色分子在細(xì)胞與細(xì)之間蔓延,結(jié)果顯示僅存在數(shù)量不多的染料在ICC.MP和平滑肌間擴(kuò)布。實驗..察ICC.SM和臨近的平滑肌細(xì)..察ICC.SM和臨近的平滑肌細(xì)胞間還存在其他形式的連接方式[201。ICC插入神經(jīng)肌之間,與SMC形成縫隙連接【21】,與神經(jīng)末端構(gòu)成突觸樣連接[22】。胃腸神經(jīng)的經(jīng)由ICC傳遞給SMC,對胃腸道SMC的運(yùn)動起介導(dǎo)【23】,可自助產(chǎn)生慢波,慢波維持胃腸平滑肌運(yùn)動的節(jié)律,是胃腸運(yùn)動的緣由【2】IICC.SMC網(wǎng)絡(luò)與胃腸動力的關(guān)系密切。ICC.SMC網(wǎng)絡(luò)的破壞,必將導(dǎo)致胃腸力性疾病的發(fā)生。ICC.SMC間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路網(wǎng)絡(luò)錯綜復(fù)雜,共同協(xié)調(diào)胃腸運(yùn)動1.朱大年.生理學(xué),北京人民衛(wèi)生出版社,2008年,第7版2.AmbacheN.Theofisolatedmammalian1947,106:139—Caj3.DanielEE.Communicationbetweeninterstitial18—GDS.RoleofinterstitialcellsincontrolMotil,2004,1(Suppl.1):112—targetsofentericcellsof6.Sander1.朱大年.生理學(xué),北京人民衛(wèi)生出版社,2008年,第7版2.AmbacheN.Theofisolatedmammalian1947,106:139—Caj3.DanielEE.Communicationbetweeninterstitial18—GDS.RoleofinterstitialcellsincontrolMotil,2004,1(Suppl.1):112—targetsofentericcellsof6.SanderKM.Acaseforinterstitialcellsandmediatorsneurotransmissionin996,11JandH,F(xiàn)arrugiaG,HananiofinterstitialcellsofCaMinNeurogastroenterolMotil,2003,15(6):635—XJinnervationY ICC-DMPandICC-IMinthehuman2003,15(5):531-motorneurons synaptic—1KM.Interstitial
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