法醫(yī)物證學課件

第一章概論第一節(jié)法醫(yī)學概念一、法醫(yī)學定義法醫(yī)學(forensic,legalmedicine)是應用醫(yī)學、生物學及其他自然科學的理論與技術，研究并解決法律實踐中有關醫(yī)學問題的一門醫(yī)學科學?，F(xiàn)代法醫(yī)學以醫(yī)學、生物學及物理學、化學等自然科學為基礎，研究與解決涉及法律的人身死傷病殘、生理狀態(tài)、個體認定及其他醫(yī)學問題，為法律工作提供證據和資料，是有獨立的理論體系和專門檢驗技術、多科性的應用科學，是法學與醫(yī)學交叉的邊緣學科。二、法醫(yī)學基礎醫(yī)學：基礎醫(yī)學類：解剖、組胚、病理等臨床醫(yī)學類：內科、外科、婦產科等生物學：動物學、植物學、人類學、遺傳學、生化學、免疫學等物理、化學及其他：力學、電學、光學，有機化學、無機化學、分析化學，數(shù)學等法學：刑法學、訴訟法學、民商法學三、法醫(yī)學的研究對象和研究方法（一）研究對象

人體活體：生命活動全過程遇到涉及法律的傷、病、殘問題，生理功能狀況，個體特征及其相關的專門性問題，生命科學的相關問題等。尸體（尸塊、尸骨）：深入地研究其變化規(guī)律，研究死亡原因、死亡過程的規(guī)律及鑒定方法，研究個體識別的專門技術，研究死亡鑒定的其他專門性問題。人體物質（血、分泌物、組織塊等）：是法醫(yī)學的具體研究對象。（一）研究對象相關場所：研究發(fā)現(xiàn)、提取、識別與傷亡有關的各種信息及物質，為查清案件事實提供的科學幫助和證據。

相關資料：涉及法醫(yī)學專門性問題的各種資料（如視聽、圖片、影像、軟件等資料），是現(xiàn)代法醫(yī)學必須研究的對象。

（二）研究方法

例如臨床檢查、實驗室檢查、電生理檢查等概括了醫(yī)學、生物學、化學、物理學的研究方法四、法醫(yī)學的服務對象為偵查破案、審判、仲裁、治安處罰等執(zhí)法工作服務為立法工作服務為處理內部關系，構建社會主義和諧社會服務“云都”案件：1999年1月24日新加坡籍華人沈京在云都浴場死亡，3月29日向一中院提起300萬民事賠償?shù)脑V訟。原告舉證死亡系觸電的證據１沈京在云都浴室死亡２服務員的證詞有電３多名浴客的證詞有電４死者朋友右臂的青紫淤血５醫(yī)院醫(yī)生診斷結論為觸電６不同意解剖：滿族＋超過

24h被告否認死亡系觸電的證據１死亡不排除心臟病２高溫射水流＋恐慌誤認３有利害關系，３人未感到４觸電不會引起青紫淤血。５此為根據病人的述說診斷６市勞動保護檢測站：電器不漏電＋大樓接地“云都”案件：尸體解剖結論：①死者臀部有一電流斑，鏡檢亦支持②電流斑上有金屬微粒（同現(xiàn)場金屬）法院的判決：

①死因與觸電有關

②賠償56萬五、法醫(yī)學與相鄰學科的關系與司法鑒定學的關系

司法鑒定學是自然科學與社會科學（法學）相交叉的邊緣科學，屬邊緣法學，是法學的二類學科。法醫(yī)學是司法鑒定學歷史最悠久、基礎最厚實、應用最廣泛、技術最成熟、作用最突出的骨干學科。與法科學的關系我國譯為“法庭科學”。其研究的范圍比司法鑒定學廣泛，除鑒定外，還為控辯雙方提供科學咨詢和技術理論分析，為法院作情況鑒定。分科很多，國外有的學者羅列了三十多個法科學分科，法醫(yī)學是其中第一位的分學科。五、法醫(yī)學與相鄰學科的關系與刑事偵查學的關系

刑事偵查學是研究偵查策略和偵查技術，發(fā)現(xiàn)、提取、檢驗、識別、鑒定證據為揭露犯罪、證實犯罪的科學。其任務比法醫(yī)學狹小。與法學的關系法醫(yī)學要研究法學理論、研究實體法學、程序法學的立法要求，實現(xiàn)立法要求所賦予法醫(yī)學的任務。而法學也必須研究法醫(yī)學，了解法醫(yī)學的技術進展，并以新成果不斷豐富法學有關證據學方面的內容。第二節(jié)法醫(yī)學的分類法醫(yī)學有“小百科全書”之稱，有二十多個分科，一般分為基礎法醫(yī)學和應用法醫(yī)學。一、應用法醫(yī)學的主要分科法醫(yī)病理學主要研究涉及法律專門性問題的人體組織解剖病理、病理生理的改變及其規(guī)律，死亡原因及機理、死后的變化等一門學科。其分支有猝死及其他正常的死亡病理、暴力死死亡病理學，以及窒息病理、損傷病理、中毒病理、死亡學、尸變征象學等。一、應用法醫(yī)學的主要分科法醫(yī)損傷學主要研究外力（主要是物理性外力）作用而發(fā)生組織完整性破壞及功能障礙的理論及鑒定技術方法的一門學科。法醫(yī)臨床學主要研究活體涉及法律專門性問題的傷、病、殘、生理功能狀態(tài)、勞動能力等的相關理論、臨床檢驗及判定的一門學科。法醫(yī)毒理學主要研究毒（藥）物毒品的性狀及作用，中毒原因及癥狀，檢驗方法及判定的一門學科。一、應用法醫(yī)學的主要分科法醫(yī)物證學主要研究人體物質的生物學特性及檢驗、識別方法的學科。法醫(yī)精神病學主要研究涉及法律的精神活動異常的各種表現(xiàn)及判定、判明責任能力、行為能力、性自衛(wèi)能力、其他與法律有關的能力及精神障礙傷殘等的專門學科。法醫(yī)人類學主要研究以體質人類學的理論及技術方法解決個體認定問題的檢驗與判定，包括個體識別（人身的同一認定）、法醫(yī)骨科學、法醫(yī)齒科學等學科。一、應用法醫(yī)學的主要分科法醫(yī)物證學主要研究人體物質的生物學特性及檢驗、識別方法的學科。法醫(yī)精神病學主要研究涉及法律的精神活動異常的各種表現(xiàn)及判定、判明責任能力、行為能力、性自衛(wèi)能力、其他與法律有關的能力及精神障礙傷殘等的專門學科。法醫(yī)人類學主要研究以體質人類學的理論及技術方法解決個體認定問題的檢驗與判定，包括個體識別（人身的同一認定）、法醫(yī)骨科學、法醫(yī)齒科學等學科。一、應用法醫(yī)學的主要分科醫(yī)學賠償學主要研究人身各種傷害的經濟賠償問題的科學。涉及醫(yī)學、法學、經濟學、社會科學等方面諸多問題，急待研究解決。必須以構建社會主義和諧社會高度給予重視。醫(yī)事法學主要研究衛(wèi)生及診療防疫、預防等的法律問題，范圍很廣，如醫(yī)療事故的鑒定問題，衛(wèi)生法律的制定問題。死亡判定與安樂死問題，人工授精，代孕的父權及母權問題，性轉換、遺傳工程、衛(wèi)生防疫、性病傳播等的法律問題。二、法醫(yī)學鑒定的種類死因鑒定經過對尸體、尸塊、尸骨、人體物質及其他相關物體（質）的檢驗，分析研究，確定死亡種類及死亡原因，判定死亡性質，分析死亡經過，推斷死亡時間，評斷致傷工具（物），認定死者身份及其他與死亡有關的問題。傷殘、傷情鑒定確定損傷事實（有無傷）；判斷損傷原因及經過；評析損傷與疾病的關系，判定傷害程度及后遺障礙、評定傷殘等級及休息、營養(yǎng)、護理期限；分析人身傷害的其他有關問題。二、法醫(yī)學鑒定的種類勞動能力鑒定人身傷害（包括疾?。┖舐殬I(yè)勞動能力、謀生勞動能力、特殊勞動能力等的鑒定。生理功能狀態(tài)鑒定評定各組織器官系統(tǒng)結構及功能狀態(tài)；評定性及生殖功能狀態(tài)等。幫助各類訴訟（包括行政訴訟）、治安管理、性病防治、戒毒、勞動仲裁、保險賠償、傳染病管理等提供事實基礎。二、法醫(yī)學鑒定的種類人體物質及血緣關系鑒定個體識別、親子鑒定、DNA檢測等。精神活動狀態(tài)鑒定根據醫(yī)學要件確定精神活動障礙狀態(tài)；根據醫(yī)學及法學要件評定刑事責任能力或民事行為能力；評定精神損傷程度；判斷受審能力、作證能力、服刑能力；評定性自衛(wèi)能力；評定行使婚姻權、生育權能力；評定心理活動特征等。第三節(jié)法醫(yī)學的任務基本任務為刑事訴訟及時提供證據為民事訴訟提供科學的事實基礎為行政訴訟的當事雙方舉證提供科學幫助為非訴訟執(zhí)法活動提供科學意見第三節(jié)法醫(yī)學的任務具體任務（一）發(fā)現(xiàn)證據應盡技術之能、經驗之智，全力的發(fā)現(xiàn)證據主動發(fā)現(xiàn)證據細致觀察是發(fā)現(xiàn)證據的基本要領運用技術手段發(fā)現(xiàn)證據

及時發(fā)現(xiàn)證據延時發(fā)現(xiàn)證據檢查發(fā)現(xiàn)證據要合法具體任務（二）提取證據記錄證據科學的提取證據

及時提取準確完整提取分別包裝保全盡快送檢驗、鑒定具體任務（三）分析識別證據分析證據與案件的關聯(lián)性分析證據有無鑒定的必要識別證據，為辦案工作及時提供科學技術分析資料

提供偵查線索提供案發(fā)時間提供案件發(fā)生過程的資料分析證據意義具體任務（四）鑒定證據證據與鑒定人體物質同一的鑒定認定客體種類屬性鑒定事件原因鑒定事實客觀性鑒定事實程度鑒定證據的來源和出處三、為其他法律工作提供科學意見為預防重大災害事故、人生傷亡事故提供科學信息為預防犯罪及社會治安綜合治理工作提供資料為法學研究、立法提供資料第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗法醫(yī)現(xiàn)場勘驗根據刑事訴訟法規(guī)定，法醫(yī)可參加有人身傷亡的案件現(xiàn)場的勘驗或調查。勘驗的任務確證死亡搶救未死亡者獲取傷亡者原始狀態(tài)資料發(fā)現(xiàn)與收集建材或痕跡監(jiān)察傷亡者幫助分析案情勘驗步驟先靜勘后動勘，保護現(xiàn)場第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗法醫(yī)現(xiàn)場勘驗基本原則法醫(yī)是以鑒定人身份參加勘驗的，在偵查員或主持人的統(tǒng)一指揮下進行工作。2.細致耐心，不怕臟不怕累，嚴防走馬觀花，要“蹲下去定眼看”。3.要用專業(yè)知識、科技手段發(fā)現(xiàn)與提取檢材和物證。4.整個勘驗過程應充滿信心，沉著冷靜，有無收獲表情如一，對所看所聞，不隨便發(fā)表看法。

第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗法醫(yī)尸體檢驗尸體檢驗是法醫(yī)學最常見最主要的檢驗，需要查清的事實和鑒定的專門性問題，一般都是案件中最關鍵的問題。確定死因，分清正常還是非正常死亡，判定何種暴力死。判斷死亡時間或死亡經過時間。分析死亡經過，判定自殺、他殺或意外災害事故致死的死亡性質。推斷暴力死的致傷工具。尸源認定，對無名尸塊、尸骨，經檢驗提供尸源認定的依據。第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗法醫(yī)尸體檢驗身長性別年齡營養(yǎng)尸斑尸僵尸溫頭部顏面頸部胸部腹部背部上肢下肢外陰肛門法醫(yī)尸體檢驗法醫(yī)檢驗普及的重要性犯罪分子以欺騙性隱蔽性更大的科學技術手段作案。如不針鋒相對地以科學技術手段收集犯罪信息，獲取證據，難以查清案件的真實情況。健全法規(guī)、規(guī)章。加強科學觀念，提高有關人員對法醫(yī)尸檢重要性的認識，克服過分相信自己的經驗、群眾反映、審訊筆錄的現(xiàn)象。法醫(yī)工作者隊伍的建設，提供必要的物質條件，提高法醫(yī)的社會地位。減少阻撓解剖的迷信及情感上的因素。切實執(zhí)行對于死因不明的尸體公安機關有權決定解剖的有關規(guī)定。第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗法醫(yī)活體檢驗損傷檢驗性及生殖器官的檢驗血型及親子代遺傳關系檢驗：疾病的檢驗勞動能力的認定殘廢的等級認定第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗人體物質的檢驗

又稱法醫(yī)物證檢驗，主要檢驗對象是組織細胞、體液、分泌液、排泄物等，目的在于查清物質的本質特性及個體特異性。案件資料的法醫(yī)學復核又稱文證審查。對有關法醫(yī)學專門性問題的書面材料(含圖片、音像資料)進行鑒識和分析。第一章概論第一節(jié)法醫(yī)學概念一、法醫(yī)學定義法醫(yī)學(forensic,legalmedicine)是應用醫(yī)學、生物學及其他自然科學的理論與技術，研究并解決法律實踐中有關醫(yī)學問題的一門醫(yī)學科學。現(xiàn)代法醫(yī)學以醫(yī)學、生物學及物理學、化學等自然科學為基礎，研究與解決涉及法律的人身死傷病殘、生理狀態(tài)、個體認定及其他醫(yī)學問題，為法律工作提供證據和資料，是有獨立的理論體系和專門檢驗技術、多科性的應用科學，是法學與醫(yī)學交叉的邊緣學科。二、法醫(yī)學基礎醫(yī)學：基礎醫(yī)學類：解剖、組胚、病理等臨床醫(yī)學類：內科、外科、婦產科等生物學：動物學、植物學、人類學、遺傳學、生化學、免疫學等物理、化學及其他：力學、電學、光學，有機化學、無機化學、分析化學，數(shù)學等法學：刑法學、訴訟法學、民商法學三、法醫(yī)學的研究對象和研究方法（一）研究對象

人體活體：生命活動全過程遇到涉及法律的傷、病、殘問題，生理功能狀況，個體特征及其相關的專門性問題，生命科學的相關問題等。尸體（尸塊、尸骨）：深入地研究其變化規(guī)律，研究死亡原因、死亡過程的規(guī)律及鑒定方法，研究個體識別的專門技術，研究死亡鑒定的其他專門性問題。人體物質（血、分泌物、組織塊等）：是法醫(yī)學的具體研究對象。（一）研究對象相關場所：研究發(fā)現(xiàn)、提取、識別與傷亡有關的各種信息及物質，為查清案件事實提供的科學幫助和證據。

相關資料：涉及法醫(yī)學專門性問題的各種資料（如視聽、圖片、影像、軟件等資料），是現(xiàn)代法醫(yī)學必須研究的對象。

（二）研究方法

例如臨床檢查、實驗室檢查、電生理檢查等概括了醫(yī)學、生物學、化學、物理學的研究方法四、法醫(yī)學的服務對象為偵查破案、審判、仲裁、治安處罰等執(zhí)法工作服務為立法工作服務為處理內部關系，構建社會主義和諧社會服務“云都”案件：1999年1月24日新加坡籍華人沈京在云都浴場死亡，3月29日向一中院提起300萬民事賠償?shù)脑V訟。原告舉證死亡系觸電的證據１沈京在云都浴室死亡２服務員的證詞有電３多名浴客的證詞有電４死者朋友右臂的青紫淤血５醫(yī)院醫(yī)生診斷結論為觸電６不同意解剖：滿族＋超過

24h被告否認死亡系觸電的證據１死亡不排除心臟病２高溫射水流＋恐慌誤認３有利害關系，３人未感到４觸電不會引起青紫淤血。５此為根據病人的述說診斷６市勞動保護檢測站：電器不漏電＋大樓接地“云都”案件：尸體解剖結論：①死者臀部有一電流斑，鏡檢亦支持②電流斑上有金屬微粒（同現(xiàn)場金屬）法院的判決：

①死因與觸電有關

②賠償56萬五、法醫(yī)學與相鄰學科的關系與司法鑒定學的關系

司法鑒定學是自然科學與社會科學（法學）相交叉的邊緣科學，屬邊緣法學，是法學的二類學科。法醫(yī)學是司法鑒定學歷史最悠久、基礎最厚實、應用最廣泛、技術最成熟、作用最突出的骨干學科。與法科學的關系我國譯為“法庭科學”。其研究的范圍比司法鑒定學廣泛，除鑒定外，還為控辯雙方提供科學咨詢和技術理論分析，為法院作情況鑒定。分科很多，國外有的學者羅列了三十多個法科學分科，法醫(yī)學是其中第一位的分學科。五、法醫(yī)學與相鄰學科的關系與刑事偵查學的關系

刑事偵查學是研究偵查策略和偵查技術，發(fā)現(xiàn)、提取、檢驗、識別、鑒定證據為揭露犯罪、證實犯罪的科學。其任務比法醫(yī)學狹小。與法學的關系法醫(yī)學要研究法學理論、研究實體法學、程序法學的立法要求，實現(xiàn)立法要求所賦予法醫(yī)學的任務。而法學也必須研究法醫(yī)學，了解法醫(yī)學的技術進展，并以新成果不斷豐富法學有關證據學方面的內容。第二節(jié)法醫(yī)學的分類法醫(yī)學有“小百科全書”之稱，有二十多個分科，一般分為基礎法醫(yī)學和應用法醫(yī)學。一、應用法醫(yī)學的主要分科法醫(yī)病理學主要研究涉及法律專門性問題的人體組織解剖病理、病理生理的改變及其規(guī)律，死亡原因及機理、死后的變化等一門學科。其分支有猝死及其他正常的死亡病理、暴力死死亡病理學，以及窒息病理、損傷病理、中毒病理、死亡學、尸變征象學等。一、應用法醫(yī)學的主要分科法醫(yī)損傷學主要研究外力（主要是物理性外力）作用而發(fā)生組織完整性破壞及功能障礙的理論及鑒定技術方法的一門學科。法醫(yī)臨床學主要研究活體涉及法律專門性問題的傷、病、殘、生理功能狀態(tài)、勞動能力等的相關理論、臨床檢驗及判定的一門學科。法醫(yī)毒理學主要研究毒（藥）物毒品的性狀及作用，中毒原因及癥狀，檢驗方法及判定的一門學科。一、應用法醫(yī)學的主要分科法醫(yī)物證學主要研究人體物質的生物學特性及檢驗、識別方法的學科。法醫(yī)精神病學主要研究涉及法律的精神活動異常的各種表現(xiàn)及判定、判明責任能力、行為能力、性自衛(wèi)能力、其他與法律有關的能力及精神障礙傷殘等的專門學科。法醫(yī)人類學主要研究以體質人類學的理論及技術方法解決個體認定問題的檢驗與判定，包括個體識別（人身的同一認定）、法醫(yī)骨科學、法醫(yī)齒科學等學科。一、應用法醫(yī)學的主要分科法醫(yī)物證學主要研究人體物質的生物學特性及檢驗、識別方法的學科。法醫(yī)精神病學主要研究涉及法律的精神活動異常的各種表現(xiàn)及判定、判明責任能力、行為能力、性自衛(wèi)能力、其他與法律有關的能力及精神障礙傷殘等的專門學科。法醫(yī)人類學主要研究以體質人類學的理論及技術方法解決個體認定問題的檢驗與判定，包括個體識別（人身的同一認定）、法醫(yī)骨科學、法醫(yī)齒科學等學科。一、應用法醫(yī)學的主要分科醫(yī)學賠償學主要研究人身各種傷害的經濟賠償問題的科學。涉及醫(yī)學、法學、經濟學、社會科學等方面諸多問題，急待研究解決。必須以構建社會主義和諧社會高度給予重視。醫(yī)事法學主要研究衛(wèi)生及診療防疫、預防等的法律問題，范圍很廣，如醫(yī)療事故的鑒定問題，衛(wèi)生法律的制定問題。死亡判定與安樂死問題，人工授精，代孕的父權及母權問題，性轉換、遺傳工程、衛(wèi)生防疫、性病傳播等的法律問題。二、法醫(yī)學鑒定的種類死因鑒定經過對尸體、尸塊、尸骨、人體物質及其他相關物體（質）的檢驗，分析研究，確定死亡種類及死亡原因，判定死亡性質，分析死亡經過，推斷死亡時間，評斷致傷工具（物），認定死者身份及其他與死亡有關的問題。傷殘、傷情鑒定確定損傷事實（有無傷）；判斷損傷原因及經過；評析損傷與疾病的關系，判定傷害程度及后遺障礙、評定傷殘等級及休息、營養(yǎng)、護理期限；分析人身傷害的其他有關問題。二、法醫(yī)學鑒定的種類勞動能力鑒定人身傷害（包括疾病）后職業(yè)勞動能力、謀生勞動能力、特殊勞動能力等的鑒定。生理功能狀態(tài)鑒定評定各組織器官系統(tǒng)結構及功能狀態(tài)；評定性及生殖功能狀態(tài)等。幫助各類訴訟（包括行政訴訟）、治安管理、性病防治、戒毒、勞動仲裁、保險賠償、傳染病管理等提供事實基礎。二、法醫(yī)學鑒定的種類人體物質及血緣關系鑒定個體識別、親子鑒定、DNA檢測等。精神活動狀態(tài)鑒定根據醫(yī)學要件確定精神活動障礙狀態(tài)；根據醫(yī)學及法學要件評定刑事責任能力或民事行為能力；評定精神損傷程度；判斷受審能力、作證能力、服刑能力；評定性自衛(wèi)能力；評定行使婚姻權、生育權能力；評定心理活動特征等。第三節(jié)法醫(yī)學的任務基本任務為刑事訴訟及時提供證據為民事訴訟提供科學的事實基礎為行政訴訟的當事雙方舉證提供科學幫助為非訴訟執(zhí)法活動提供科學意見第三節(jié)法醫(yī)學的任務具體任務（一）發(fā)現(xiàn)證據應盡技術之能、經驗之智，全力的發(fā)現(xiàn)證據主動發(fā)現(xiàn)證據細致觀察是發(fā)現(xiàn)證據的基本要領運用技術手段發(fā)現(xiàn)證據

及時發(fā)現(xiàn)證據延時發(fā)現(xiàn)證據檢查發(fā)現(xiàn)證據要合法具體任務（二）提取證據記錄證據科學的提取證據

及時提取準確完整提取分別包裝保全盡快送檢驗、鑒定具體任務（三）分析識別證據分析證據與案件的關聯(lián)性分析證據有無鑒定的必要識別證據，為辦案工作及時提供科學技術分析資料

提供偵查線索提供案發(fā)時間提供案件發(fā)生過程的資料分析證據意義具體任務（四）鑒定證據證據與鑒定人體物質同一的鑒定認定客體種類屬性鑒定事件原因鑒定事實客觀性鑒定事實程度鑒定證據的來源和出處三、為其他法律工作提供科學意見為預防重大災害事故、人生傷亡事故提供科學信息為預防犯罪及社會治安綜合治理工作提供資料為法學研究、立法提供資料第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗法醫(yī)現(xiàn)場勘驗根據刑事訴訟法規(guī)定，法醫(yī)可參加有人身傷亡的案件現(xiàn)場的勘驗或調查?？彬灥娜蝿沾_證死亡搶救未死亡者獲取傷亡者原始狀態(tài)資料發(fā)現(xiàn)與收集建材或痕跡監(jiān)察傷亡者幫助分析案情勘驗步驟先靜勘后動勘，保護現(xiàn)場第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗法醫(yī)現(xiàn)場勘驗基本原則法醫(yī)是以鑒定人身份參加勘驗的，在偵查員或主持人的統(tǒng)一指揮下進行工作。2.細致耐心，不怕臟不怕累，嚴防走馬觀花，要“蹲下去定眼看”。3.要用專業(yè)知識、科技手段發(fā)現(xiàn)與提取檢材和物證。4.整個勘驗過程應充滿信心，沉著冷靜，有無收獲表情如一，對所看所聞，不隨便發(fā)表看法。

第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗法醫(yī)尸體檢驗尸體檢驗是法醫(yī)學最常見最主要的檢驗，需要查清的事實和鑒定的專門性問題，一般都是案件中最關鍵的問題。確定死因，分清正常還是非正常死亡，判定何種暴力死。判斷死亡時間或死亡經過時間。分析死亡經過，判定自殺、他殺或意外災害事故致死的死亡性質。推斷暴力死的致傷工具。尸源認定，對無名尸塊、尸骨，經檢驗提供尸源認定的依據。第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗法醫(yī)尸體檢驗身長性別年齡營養(yǎng)尸斑尸僵尸溫頭部顏面頸部胸部腹部背部上肢下肢外陰肛門法醫(yī)尸體檢驗法醫(yī)檢驗普及的重要性犯罪分子以欺騙性隱蔽性更大的科學技術手段作案。如不針鋒相對地以科學技術手段收集犯罪信息，獲取證據，難以查清案件的真實情況。健全法規(guī)、規(guī)章。加強科學觀念，提高有關人員對法醫(yī)尸檢重要性的認識，克服過分相信自己的經驗、群眾反映、審訊筆錄的現(xiàn)象。法醫(yī)工作者隊伍的建設，提供必要的物質條件，提高法醫(yī)的社會地位。減少阻撓解剖的迷信及情感上的因素。切實執(zhí)行對于死因不明的尸體公安機關有權決定解剖的有關規(guī)定。第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗法醫(yī)活體檢驗損傷檢驗性及生殖器官的檢驗血型及親子代遺傳關系檢驗：疾病的檢驗勞動能力的認定殘廢的等級認定第四節(jié)法醫(yī)學基本檢驗人體物質的檢驗

又稱法醫(yī)物證檢驗，主要檢驗對象是組織細胞、體液、分泌液、排泄物等，目的在于查清物質的本質特性及個體特異性。案件資料的法醫(yī)學復核又稱文證審查。對有關法醫(yī)學專門性問題的書面材料(含圖片、音像資料)進行鑒識和分析。

(一)尸臭尸臭是腐敗的早期征象，因腐敗氣體硫化氫、氨氣等散發(fā)出的臭味所致。春秋季節(jié)，一般死后24小時可嗅及。即使是解剖完洗完澡后，家人也會聞得出來。尸體的臭味極其特殊，聞到一次就終生不忘。二、腐敗的主要征象(二)尸綠又稱為腐敗綠斑。尸綠是由腐敗氣體中的硫化氫與血紅蛋白及其衍生物結合生成硫化血紅蛋白，或生成硫化變性血紅蛋白，或與鐵離子結合形成硫化鐵，使皮膚呈現(xiàn)污綠色的腐敗綠斑。尸綠是晚期尸變的重要征象。一旦發(fā)現(xiàn)，即可判斷此尸體已開始腐敗。尸綠出現(xiàn)的時間：在夏天，于死后12-24小時可見；春秋天氣，死后一晝夜出現(xiàn)。細菌感染、發(fā)高熱死者，腐敗較早，尸綠出現(xiàn)亦較早；若死前患化膿性病性，則腐敗亦快，尸綠出現(xiàn)亦早。

腐敗綠斑與生前皮下出血的青紫色極相似，應注意鑒別。最好的鑒別方法是切開該處皮膚，尸綠處的皮膚下呈污綠色，無凝血塊；皮下出血處的皮下見有凝血塊，擦洗不去。腐敗綠斑尸表出現(xiàn)腐敗綠斑(三)腐敗血管網腐敗血管網是由于腐敗氣體把體內血管里的一些已腐敗的血液擠壓到體表血管內，腐敗血液到這些血管后，又向管外浸潤，形成以血管為中心的粗線條。常先出現(xiàn)于胸上部、頸部等，指壓不褪色。切勿誤認為生前有發(fā)炎充血現(xiàn)象所致。腐敗血管網

(四)腐敗水氣泡隨著腐敗的發(fā)展，體內各器官組織間、各體腔的腐敗氣體越來越多，皮膚下層也充滿氣體，摸之似海綿，有捻發(fā)音，氣體把表皮鼓起成泡，泡里除氣體外還有腐敗液，稱為水氣泡。這種泡的泡蓋、泡液及泡底全呈污暗紅色，大小不等，表面皺縮，易破，惡臭。常見于高度腐敗的尸體。注意不要把腐敗水氣泡誤認為燒燙傷水泡。后者泡周與泡底均充血，泡液清，含豐富的蛋白質。腐敗水氣泡(五)腐敗液體流出尸體內腐敗氣體多，壓力大，把與外相通的各臟器內的腐敗液體(污暗紅色)壓向體外，可見于口、鼻、耳、眼、陰道、尿道、肛門，流出的污暗紅色液體，有惡臭，且冒氣泡。見于高度腐敗尸體。

(六)巨人觀尸體高度腐敗，大量的腐敗氣體充盈整個尸體，形成頭大頸粗、眼突唇翻、舌伸口外、胸隆腹鼓，男尸陰囊如氣球、陰莖粗，女尸大陰唇肥大、四肢粗圓。整個尸體變大，故稱“巨人”。此時，面貌已無法辨認，表皮極易剝落，暴露污紫色真皮。頭發(fā)亦易脫落。各臟器充滿氣體，肚臟如海綿，有些器官軟化甚至液化。在此種情況下，對其損傷的形態(tài)、臟變化等檢驗條件就比較差。中度腐敗，腫脹中度腐敗，開始出現(xiàn)巨人觀巨人觀巨人觀

(七)腐敗的其他征象死后嘔吐：氣體可把胃內容物壓向食道、喉頭、口鼻孔外，稱死后嘔吐，嘔吐物可倒流入氣管，切不要誤認為是生前吸人致死。死后分娩：孕婦尸體，氣體可把胎兒壓出，故稱死后分娩。氣體還可擠壓直腸、子宮使其脫出、腹壁炸裂。泡沫器官：高度腐敗的尸體，其內臟器官(如肝、脾等)內，可形成大小不一的液體氣泡，稱為泡沫器官。死后分娩泡沫器官泡沫器官（八）腐敗的法醫(yī)學意義根據腐敗的發(fā)生，有時可推斷死亡時間及死因的參考。認識腐敗的各種征象，如尸綠、口腔及鼻腔血水溢出等，可避免誤為機械性窒息或中毒死。高度腐敗，甚至只剩骨骼、毛發(fā)、指(趾)甲者，仍可檢測金屬性中毒及骨損傷等情況；仍可使其軟組織受損，故須爭取及早作尸體檢驗。

尸體被置于潮濕的環(huán)境中，在適宜真菌生長的條件下，在尸體裸露部位或尸體的全身表面滋生一層白色霉斑和霉絲，稱霉尸。法醫(yī)學意義

(1)根據霉尸可推測尸體所處的環(huán)境條件，從而在一定程度上有利于分析案情。

(2)認識霉尸變化，注意與某些損傷和疾病相鑒別。

(3)霉變尸體有時影響容貌的辨認，尸檢時應更加認真仔細地進行個人識別。

(4)某些金屬毒物可從霉尸中取材進行毒物分析。三、霉尸

尸體軟組織經腐敗而逐漸軟化、液化，直至完全溶解消失，毛發(fā)和指甲脫落，最后僅剩下骨骼，稱為白骨化。檢驗白骨有著重要的法醫(yī)學意義

(1)白骨化雖可破壞尸體軟組織和器官的病變與損傷，但尸骨上的損傷痕跡有些可長期保存。

(2)某些毒物(如重金屬毒物)在骨髓或骨質內可長久保存，故仍可做中毒的化驗檢材。

(3)死后白骨化時間不長的骨髓可用于硅藻檢查。

(4)骨骼在個人識別方面具有重要意義。根據骨骼的結構特征，可推測死者的性別、年齡。四、白骨化一、干尸干尸即為木乃伊，尸體因水分迅速蒸發(fā)而不發(fā)生腐敗，以干枯狀態(tài)保存下來，稱木乃伊。尸體水份迅速減少，以致于尸體濕度過低，細菌生長繁殖條件差，甚至無法繁殖，尸體進一步干燥而干癟。尸體置于高溫、干燒、通風環(huán)境，或放置吸濕物質，水份蒸發(fā)消失快，尸體逐漸干枯，腐敗停止，易成干尸。馬王堆古尸、江陵古尸第四節(jié)特殊尸體現(xiàn)象1972年出土于新疆某地，葬于公元562年長沙馬王堆古尸馬王堆女尸系西漢時長沙國丞相利蒼的夫人，距今已將近2200年。世界上首次發(fā)現(xiàn)古代濕尸據史料記載，利蒼夫人名叫辛追，死時約50歲。1972年，辛追的墓葬被發(fā)現(xiàn)。辛追尸體出土時，全身潤澤，皮膚覆蓋完整，毛發(fā)尚在，指、趾紋路清晰，肌肉尚有彈性。這是世界上首次發(fā)現(xiàn)濕尸，出土后震驚世界。

頭像復原第一步：是將辛追的顱骨x光片掃描進電腦，然后根據繪畫中的“三庭五眼”理論，用4橫5縱的9條直線確定五官位置和大小，第二步：參考出土時為辛追尸體拍攝的照片，以及馬王堆的相關文獻資料和出土帛畫，將相關信息輸入趙成文教授自己研制的“警星cck-3型人像模擬組合系統(tǒng)”內，第三步：按照人體解剖學和人類學原理，從這個系統(tǒng)的部件庫中尋找與辛追顱骨相匹配的五官部件。然后再運用美術、醫(yī)學等相關領域的知識進行制作。圖為復原的長沙國丞相夫人50歲（死亡之前）的正面模擬像30歲時的模擬畫像

18歲的模擬畫像

7歲2002年7月，江蘇省連云港考古工作者在海州區(qū)雙龍村搶救性發(fā)掘出一漢代墓葬群，其中一具保存完好的漢代女尸凌惠平，被國內考古專家稱作迄今為止長江以北惟一保存完好的濕尸。(1)干尸可能保持生前的某些損傷，如索溝、刺創(chuàng)、骨折等，對追查尸源、揭露犯罪和分析死因具有一定意義。(2)干尸可能保持某些個人特征，有助于進行個人識別。(3)干尸可能保持生前的某些病變，如動脈粥樣硬化、風濕小結、結核結節(jié)、寄生蟲卵等，有助于分析死者生前健康狀況和死亡原因。法醫(yī)學意義

尸蠟：尸體長期浸在空氣不足的水中獲埋在空氣不足的濕土里，腐敗進展緩慢而停止，尸體的脂肪組織因皂化或氫化作用，形成污黃白色的蠟樣物質，使部分或全部尸體得以保存，稱尸蠟。尸體在水份豐富的環(huán)境里，如泡在水中、埋在水多的墓穴里尸蠟呈灰白色或淡黃色，能透視皮下較粗的血管，在脂肪豐富的部份較易形成。

二、尸蠟一無頭尸體被水煮后存放80天一青年男子被人殺害后，拋入化糞池內6個月，全身軟組織皂化，形成尸蠟。(1)尸蠟可能保存某些生前損傷痕跡，如索溝、扼痕和骨折等，對揭露犯罪、分析死因有一定意義。(2)尸蠟有助于進行個人識別、查找尸源。法醫(yī)學意義亦稱軟尸（泥炭鞣尸），浸于富含多種腐植酸和單寧物質的酸性泥沼中的尸體，因酸性物質的作用，腐敗停止發(fā)展，皮膚鞣化，肌肉與其他組織蛋白逐漸溶解，骨骼和牙齒脫鈣，而使尸體顯著縮小，重量減輕，變軟易曲，這種保存型尸體稱泥炭鞣尸。三、鞣尸一老年婦女尸體，于1975年發(fā)掘于湖北漢陽某地

浸軟：８周以上的胎兒，在子宮內死亡后，不能被完全吸收，浸泡于無菌的羊水中，發(fā)生自溶改變，成為浸軟，或稱浸軟兒。一度：水泡形成二度：水泡破裂，表皮剝脫三度：累及深部組織四、浸軟(1)浸軟胎兒是死胎，死后已在宮內一段時間，在此期間母體受傷不是引起胎兒死亡的原因。(2)浸軟胎兒一旦暴露于空氣中極易發(fā)生腐敗，故應盡早進行法醫(yī)學檢驗。法醫(yī)學意義人死后，?？稍馐軇游锏氖墒场⒖幸?，而形成各種形態(tài)的死后損傷。尸體遭各種動物的破壞，形成各種形狀的毀損痕跡。有的損傷具有特殊形態(tài)，可供推斷動物種類，或與暴力作用引起的損傷相區(qū)別。又可依據尸體上昆蟲生長發(fā)育情況，推斷死后時間，有助于偵破工作。第五節(jié)昆蟲對尸體的破壞蠅對尸味極敏感。在蠅盛季節(jié)，人死后1小時左右，蠅就順味而來，在眼角、鼻孔、口角、外露創(chuàng)口、外耳等處產卵，春秋季節(jié)(溫度在20度左右)1日、夏天半日內便變成蛆，也有些蠅產下的已是蛆。蛆分泌消化液，液化破壞組織。成年尸在夏天經3-4周就可被蠅蛆吃剩骨架，蛆速成長，長到1.2cm左右時成蛹。夏天，蛆每日長0.24-0.3cm，約經4-5日成蛹，蛹經1周左右破殼成蠅。春秋季節(jié)，蛆每日長0.1cm左右，經10-12日成蛹，蛹經過2周左右成蠅。所以，如果發(fā)現(xiàn)尸體旁邊有一代蛹殼，在夏天，估計死亡已近2周，春秋天氣，估計將近4周。一、蠅蛆對尸體的破壞螞蟻、蟑螂對尸體的破壞多在身體露出部位。皮膚的嚙痕、邊緣不整齊，深淺不一，但均較淺，無出血現(xiàn)象，易與生前傷區(qū)別。一般螞蟻能在4至8周之內將地面上的尸體軟組織噬食殆盡。二、螞蟻、蟑螂對尸體的嚙食常見單個鼠咬痕成新月狀，每個咬痕有2只牙印，大多是上領牙所成。整個咬傷凌亂，無固定的方向。較大的咬傷面邊緣不齊，呈鋸齒狀。三、鼠類對尸體的破壞野外尸體易發(fā)生此種情況。尸體破壞嚴重，四肢、頭頸可被咬掉，胸腹腔被咬開。咬痕不整齊，肌肉、筋膜斷面可見撕裂狀，骨骼咬痕明顯。認真檢驗不難與鈍器銳器傷痕相區(qū)別。四、狗、狼、鳥類等對尸體的破壞犬咬尸體水中交通工具如船漿、船篙等，亦都可破壞尸體。五、魚蝦蟹類對尸體的破壞魚蝦毀壞尸體現(xiàn)象判斷死亡時間是命案偵查開始階段的重要基礎工作，一般應從尸體檢驗所見、現(xiàn)場及案情提供的信息，經綜合分析作出判斷。判斷死亡時間也是法醫(yī)鑒定人的責任。第六節(jié)判斷死亡時間尸體變化征象與死亡經過時間有關系，同時也受環(huán)境條件和尸體內在因素等影響。估計死亡時間時，最好結合幾種征象進行分析。例如：尸體松軟，外露面部、手腳有冷感，尸斑未出現(xiàn)，可估計死后1小時左右；尸斑見有片狀，壓迫尸斑立即全退色，下頜僵硬，上肢輕度硬感，可估計死后經過時間為5—6小時；全身硬如木緣不整齊，深淺不一，但均較淺，無出血現(xiàn)象，易與生前傷區(qū)別。一般螞蟻能在4至8周之內將地面上的尸體軟組織噬食殆盡。一、根據尸體變化征象估計死亡時間食物未消化，飯粒成形，蔬菜切緣清晰，餐后不久死亡。食物已與胃液混合，開始消化，但仍成形，蔬菜纖維不松散，餐后1-2小時。食物已經明顯消化，飯粒變碎，不成形，有些已成糜狀，蔬菜纖維松，已開始進人十二指腸，為餐后2-3小時。食物部份排入十二指腸，為餐后3-4小時。胃內容全部排空，一般于餐后5-6小時。二、根據胃內容消化情況判斷最后一餐后的死亡時間根據尸體組織的生物化學變化程度作死亡經過時間的判斷，此方法準確度較高。以尸體血液的生物化學測定，推斷死亡時間，不同作者采用的測定方法不同，結果可不完全相同。同一尸體的各個不同部位，其變化亦可有差異，然而此種差異變化具有一定的規(guī)律性三、尸體組織生物化學的測定人死后于一定的短時間內，受到感應電刺激或者機械性刺激的肌肉，可引起該肌肉的收縮。可依此來推斷死亡時間。四、死后肌肉收縮電生理檢測阿托品的縮瞳反應五、死后瞳孔、眼底變化檢測DNA多態(tài)性分析技術長度多態(tài)性序列多態(tài)性VNTR/小衛(wèi)星DNASTR/微衛(wèi)星DNASNPmtDNARFLP-PCR、ASO-PCRDHPLC、SSCPMALDI-TOFMVR-PCR、DNAChipSequencing，etalRFLPDNA指紋Amp-FLPMVR-PCRAmp-FLP/STR-PCRDNA提取/純化/定量，PCR及其產物的檢測TheProcessofDNATypingviaPCRSourcesofBiologicalEvidence

生物檢材多種多樣，常見有血痕、精斑、唾液斑、毛發(fā)、骨骼、指甲、組織碎片等。一、DNA提取原理溶解胞、核膜消化、去除蛋白分離DNA純化DNA1、酚/氯仿法[原理]

真核細胞在去垢劑SDS(十二烷基硫酸鈉)和蛋白酶K作用下消化破裂真核細胞膜與核膜，核蛋白質變性并降解，釋放DNA。通過有機溶劑酚和氯仿，除去蛋白成分，用乙醇沉淀收集DNA。

溶血消化DNA提取沉淀DNA溶解DNA[提取步驟]2.Chelex-100快速抽提法[原理]

Chelex-100是一種螯合樹脂，由苯乙烯和二乙烯苯的共聚體組成，含有成對的亞氨基二乙酸鹽離子，能夠螯合二價金屬離子，抑制DNA酶，保護DNA分子。在低離子強度、堿性及100℃煮沸條件下，可以使細胞膜裂解，并使與DNA結合的蛋白質變性，游離DNA。[提取步驟]

溶血，然后加入Chelex-100，56℃孵育0.5~2h，離心2min，保存上清液。

3.堿性裂解法提取生物檢材DNA[原理]

在強堿作用下，使構成細胞膜的蛋白質變性，肽鍵斷裂快速破壞蛋白質的一級結構(水解蛋白質)。因而在強堿性及一定溫度狀況下能迅速破碎細胞及核膜，并使核酸酶變性，釋放DNA。[提取步驟]

溶血，然后加入NaOH，80℃孵育10min，離心，保存上清液。

酚/氯仿法：穩(wěn)定，純度高；繁復，試劑毒性，檢材用量大，樣本DNA損失多，樣本差錯概率大。

Chelex-100法：操作簡單快速，檢材用量少，一管到底，樣本DNA損失小，樣本差錯概率小；不能用紫外法和凝膠電泳法定量，干擾抑制物未去除。二、DNA定量

1.分光光度計分析原理：核酸于260nm波長為吸收峰，1OD值為50μg/μl雙鏈核酸（40μg/μl單鏈核酸）根據OD值可計算DNA含量。

蛋白于280nm波長為吸收峰，260/280比檢測核酸純度（1.6-1.8）。20ng10ng5ng2.5ng1.25ng0.63ng20ng10ng5ng2.5ng1.25ng0.63ngCalibrationstandardsCalibrationstandardsUnknownSamples~2.5ng瓊脂糖凝膠電泳結合GoldView熒光燃料測定2.凝膠電泳半定量分析法：標準參照分析三、DNA純化1.經典簡單的方法:重復有機溶劑萃取和乙醇沉淀。2.目前在法醫(yī)DNA分析中常使用柱層析、過濾技術：如Microcon100，Centricon30等純化DNA裝置。都是利用不同微孔孔徑的濾膜所具有的吸附和超濾作用，達到純化DNA目的。PCR技術簡史DNA的復制核酸體外擴增的設想聚合酶鏈反應的發(fā)明1985年，美國PE-Cetus公司的Mullis等人發(fā)明了聚合酶鏈反應（PCR）,基本原理是在試管中模擬細胞內的DNA復制。最初采用E-coliDNA聚合酶進行PCR，由于該酶不耐熱，使這一過程耗時，費力，且易出錯。耐熱DNA聚合酶的應用使得PCR能高效率的進行，隨后PE-Cetus公司推出了第一臺PCR自動化熱循環(huán)儀。

1993年，Mullis等因此獲得諾貝爾化學獎。四、聚合酶鏈式反應(polymerasechainreaction，PCR)

PCR擴增DNA過程類似體內DNA半保留復制的機制。以基因組DNA為模板，以一對寡核苷酸為引物，dNTP

為合成DNA原料，在DNA聚合酶的催化下，經過變性、退火和引物延伸三步驟的循環(huán)，使靶DNA片段得到復制。是體外擴增特異性DNA片段的技術，在數(shù)小時內獲得上百萬靶DNA片段的拷貝，擴增產物長度一般在2kb以下。1.PCR基本原理中溫延伸(72℃)低溫退火(50～60℃)高溫變性(95℃)25～35In32cyclesat100%efficiency,1.07billioncopiesoftargetedDNAregionarecreated

變性(denaturation)

加熱至95℃，使模板DNA雙鏈解離成兩條單鏈。

退火(annealing)

降溫至55℃左右，引物寡核苷酸與模板DNA的互補序列復性，形成模板-引物雜交雙鏈，兩引物的3’端彼此相對。

延伸(extension)

升溫至72℃，在耐熱DNA聚合酶的作用下，按照堿基配對原則，dNTP逐個連接在引物的3’端。引物由5’端→3’端方向被延伸、合成與靶DNA序列互補的DNA新鏈。(c)(b)引物25’3’3’3’5’5’(d)新引物5’3’靶DNA的擴增(a)5’3’引物13’5’3’5’引物2互補鏈引物1互補鏈單位長度的鏈不同長度的鏈5’3’3’5’引物1互補鏈引物2互補鏈目的片段（不同長度的鏈未示出）聚合酶鏈式反應示意圖(e)(f)(g)溫度（℃）時間（min）94726094℃變性（1min）60℃退火（1min）72℃延伸（1.5min）循環(huán)1循環(huán)2循環(huán)3PCR反應的溫度循環(huán)周期PCR反應的每一個溫度循環(huán)周期都是由DNA變性、引物退火和反應延伸三個步驟完成的。圖中設定的反應參數(shù)是94℃變性1min，60℃退火1min，72℃延伸1.5min。如此周而復始，重復進行，直至擴增產物的數(shù)量滿足實驗需求為止。①模板DNA（templateDNA）:0.1-100ng,PCR對模板的要求不高；②寡核苷酸引物（primers）：

0.1～0.5μmol/L③dNTP

：50～200μmol/L；④BufferwithMg2+:10Xbuffer(10mmol/LTris-HCl，pH8.3，50mmol/LKCl，1.5mmol/LMg2+)，Mg2+:0.5～2.5mmol/L；⑤TaqDNA聚合酶：0.5～2U。2、PCR反應體系移液器3.PCR循環(huán)參數(shù)溫度、時間1）變性溫度和時間:92-95℃,2-12min對于富含G和C的序列，可適當提高，但過高或時間過長都會導致酶活性損失。2）退火溫度與時間:50～60℃,30-60s退火溫度決定PCR的擴增特異性，確定退火溫度常依據引物的堿基組成、引物長度和濃度。引物長度在15～25堿基時，可根據公式Tm＝4(G＋C)＋2(A＋T)估計退火溫度。3）延伸溫度和時間：72℃，45s-2min4）循環(huán)次數(shù):25～35次循環(huán)過多，非特異性產物大量增加1.高靈敏度，適于陳舊、降解、腐敗檢材；2.特異性高；3.可復合擴增；4.混合檢材的個體識別；5.種屬特異性；6.實驗周期短，設備條件和操作相對簡單。PCR技術用于法醫(yī)學的特點PCR產物檢測方法-DNADNA-DNA-DNADNA-原理瓊脂糖電泳-EB染色聚丙烯酰胺凝膠電泳-銀染、熒光顯色毛細管電泳-熒光顯色+①.瓊脂糖凝膠電泳與EB染色法

(agrosegelelectrophoresisandEB-stain,AE)1）配置瓊脂糖凝膠：

T：1％～2％，凝膠buffer：0.5×TBE，L：>14cm2）上樣：5～15ulPCR擴增產物與loadingbuffer混合加樣。電泳buffer：0.5×TBE，電壓：100～200V0.5～1.0h;3）EB染色，紫外燈觀察，照相記錄。

EB的替代物：

SYBRGreen，Goldview等。常用的電泳緩沖液4℃保存?zhèn)溆贸Ｓ玫?X載樣緩沖液Ⅰ0.25%溴酚藍，0.25%二甲苯青，40%蔗糖水溶液

Ⅱ0.25%溴酚藍，0.25%二甲苯青，30%甘油水溶液溴乙錠染色溴乙錠（ethidiumbromide，EB）是一種小分子熒光染料，可以嵌入雙鏈DNA配對堿基之間，在紫外線激發(fā)下發(fā)出紅色的熒光；發(fā)出的熒光與DNA含量成正比；由于EB-DNA復合物中的熒光強度比溶液中游離的EB熒光大10倍左右，被染色的DNA電泳區(qū)帶很容易鑒別；將電泳后的凝膠直接放入0.5μl/ml溴乙錠溶液染色10min后，在紫外線照射下觀察并判定基因型別；也可以在凝膠中加入0.5μl/ml濃度的溴乙錠；溴乙錠是強致變劑，操作中應加強自我保護。瓊脂糖電泳的優(yōu)點（1）瓊脂糖含液體量大，可達98-99%，近似自由電泳，但是樣品的擴散度比自由電泳小。（2）電泳速度快。（3）透明而不吸收紫外線，可以直接用紫外檢測儀作定量測定。（4）樣品易回收，可重復利用。缺點：分辨率不高聚丙烯酰胺凝膠(PAG)由丙烯酰胺(Acr)和亞甲基雙丙烯酰胺(Bis)聚合而成。原理：在凝膠聚合中，丙烯酰胺單體分子中的雙鍵先打開，相互連接形成脂肪族長鏈分子，再由交聯(lián)劑亞甲基雙丙烯酰胺隨機地與長鏈上的游離功能機團反應，構成三維網狀結構的凝膠。打開丙烯酰胺雙鍵必需的自由基由引發(fā)劑過硫酸銨(APS)提供。凝膠聚合反應的催化劑為四乙基乙二胺(TEMED)。兩個技術參數(shù)：凝膠濃度(T)和交聯(lián)度(C)

②.聚丙烯酰胺凝膠電泳及銀染聚丙烯酰胺凝膠的制備丙稀酰胺（單體）＋N,N-甲叉雙丙稀酰胺（交聯(lián)劑）→（催化劑）→聚合催化劑：過硫酸銨＋四甲基乙二胺（TEMED）T(6％)、C(3％)使用TBE電泳緩沖液。凝膠在垂直裝置中制備成分量30％丙烯酰胺貯存液(Acr︰Bis=29：1)7ml5×TBE7ml10％過硫酸銨(APS)150μl四甲基乙二胺(TEMED)15μlDDH2O補至35ml聚丙烯酰胺凝膠制膠裝置電泳參數(shù)：500-550V,2-7h銀染法原理：銀染液中的Ag+與DNA形成穩(wěn)定的復合物，在甲醛的作用下，Ag+被還原成銀顆粒，DNA譜帶呈黑褐色。分成5個基本步驟：

1）浸入10%乙醇：固定10min，用蒸餾水清洗1次；

2）1％HNO3：1-5min，用蒸餾水清洗1次；

3）0.1%AgNO3：染色20min，蒸餾水清洗2次；

4）顯色液（Na2CO3和甲醛）：顯帶約5～10min，至譜帶清晰。

5）10%乙酸中停顯30s-1min，水漂洗。凝膠干燥后，分型結果可以長期保存。聚丙烯酰胺凝膠電泳及銀染ABI377：變性聚丙烯酰胺凝膠電泳ABI310016-capillaryarrayABI310singlecapillary③.毛細管電泳-熒光顯色法CE電泳、收集信號GeneMapperIDsoftwareABI3130遺傳分析儀FTA卡FTA卡在室溫下對各種生物樣品進行收集、運輸、存檔和純化其核酸并進行PCR、SNP、RFLP以及限制酶解作用等分析而設計的?？蓱玫臉悠钒ǎ貉?、口腔細胞、組織細胞、培養(yǎng)細胞、微生物以及植物組織等。FTA卡經過專利的化學配方浸漬，能溶解細胞膜并改變蛋白質特性,核酸被固定下來,并可保護共免于UV光線損害、以及微生物和真菌的侵蝕，F(xiàn)TA是目前唯一的在實驗室外收集樣品的遺傳分析工具?；駾NA在FTA卡上可在室溫下儲存14年以上而不會減少PCR效率。FTA卡進行PCR操作步驟點樣取樣洗滌沖洗干燥PCRDNA多態(tài)性分析技術長度多態(tài)性序列多態(tài)性VNTR/小衛(wèi)星DNASTR/微衛(wèi)星DNASNPmtDNARFLP-PCR、ASO-PCRDHPLC、SSCPMALDI-TOFMVR-PCR、DNAChipSequencing，etalRFLPDNA指紋Amp-FLPMVR-PCRAmp-FLPSTR-PCR

限制性片段長度多態(tài)性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP)：指不同個體基因組內的核苷酸序列因某種原因產生堿基突變后，改變了某種限制性內切酶的剪切位點，使此酶在該位點不能剪切，形成了長度不等的限制性片段。這些限制性片段在人類不同個體間呈現(xiàn)的多態(tài)性現(xiàn)象稱為限制片段長度多態(tài)性。

第一節(jié)限制性片段長度多態(tài)性RFLP不同個體提取的基因組DNA限制性內切酶酶切凝膠電泳分開DNA片段印跡轉移southernblot探針雜交、放射自顯影顯示圖譜及數(shù)據分析一、RFLP技術實驗流程RFLPusingSouthernblot酶切電泳探針雜交顯帶限制性核酸內切酶及作用原理識別特定DNA序列（4-6bp)-回文結構

水解序列內磷酸二酯鍵

DNA雙鏈斷裂

長度不同的DNA片段

兩斷端分別有突出的數(shù)個堿基兩斷端沒有伸出的單鏈堿基酶切影響因素DNA方面

純度、量、甲基化、分子結構特征。酶因素種類、活性、用量。酶切條件反應體系、溫度、時間。單基因座探針（與單個小衛(wèi)星具有同源性）

--DNA紋印(DNAprofile)多基因座探針（與多個小衛(wèi)星具有同源性）

DNA指紋(DNAfingerprint)探針（probe）33.6、33.15、α珠蛋白-3’-HVRMyo、MZ13等常用的多基因座探針探針的標記

非同位素標記物有生物素，半抗原地高辛，熒光素以及酶標記等。

同位素標記檢測的優(yōu)點是靈敏度高，分辨率高，但因為放射性污染、同位素半衰期限制等原因，目前已較少應用。分子雜交：預雜交，雜交和洗膜三個步驟譜帶顯示：酶反應偶聯(lián)化學發(fā)光--光學顯影RFLP技術優(yōu)缺點

優(yōu)點：

數(shù)據多態(tài)信息量大，結果穩(wěn)定，重復性好，探針多。缺點：

技術復雜，周期長，費用高；檢測中需放射性物質，限制了廣泛應用；檢測多態(tài)性水平過分依賴限制性內切酶，使多態(tài)性降低；DNA模板用量大，分析速度慢。二、DNA紋印?

單基因座探針識別特異基因座?雜交錯配低?檢測單個VNTR基因座的等位基因?清楚分別雜合子/純合子?可獲得明確的群體“等位基因頻率”

?共顯性遺傳標記，遵循孟德爾遺傳規(guī)律?多態(tài)性較好?具有種屬特異性和組織同一性?突變率偏高：基因座突變率超過0.002，則考慮不能用于親子鑒定DNA紋印結果分析中可能出現(xiàn)的問題多余譜帶酶切不全突變混合樣本譜帶丟失DNA降解電泳分辨率低污染片段在電泳中泳出凝膠?探針識別多個同源基因座?低強度雜交錯配高

?個體可檢出多至30條譜帶?多態(tài)性非常高?不能判斷譜帶來源和分別雜合子/純合子?不能獲得明確的群體“等位基因頻率”?片段傳遞符合孟德爾遺傳規(guī)律?具有組織同一性?突變率偏高三、DNA指紋?靈敏度低?對基因組DNA的質量要求高?操作煩瑣、費時，技術要求嚴格?沒有種屬特異性?統(tǒng)計學方法與傳統(tǒng)的遺傳統(tǒng)計學不同，存在爭議?非同一凝膠上的樣本之間，難于比較?不能用于混合斑檢測?標準化困難DNA指紋技術特點RFLP技術分析層現(xiàn)的圖譜，稱為RFLP圖譜；核心技術：DNA分子雜交；RFLP圖譜個體特異性因素：限制性內切酶和探針的特異性；基因組DNA、不同人存在不同的酶切位點；探針：單基因座探針和多基因座探針；圖譜：DNA紋印和DNA指紋圖譜。DNA指紋DNA紋印靶DNA多個VNTR位點等位基因,探針無位點特異性單個VNTR位點等位基因探針有位點特異性檢材DNA量至少需要0.5～1ug不少于10-50ng，部分降解檢材可用混合DNA檢材不能檢測混合DNA檢材能檢測混合DNA檢材片段特征檢出片段15條以上，片段長度3-30kb,小片段分辨率低檢出片段1-2條，分辨率好片段長度0.5-4kb雜交條件低強度雜交條件高強度雜交條件概率計算無群體頻率分布資料可用于群體資料種屬特異性探針與多種動物DNA有交叉反應,無種屬特異性探針具有種屬特異性信息量單次檢測信息量大，只需1-2個探針單次檢測信息量小，需要4個以上探針聯(lián)合檢測DNA指紋和DNA紋印的區(qū)別不同個體提取的基因組DNA限制性內切酶酶切凝膠電泳分開DNA片段印跡轉移southernblot探針雜交、放射自顯影顯示圖譜及數(shù)據分析PCR擴增目的片段PCR-RFLPAmp-FLP技術第四章DNA長度多態(tài)性教學要求：掌握：Amp-FLP技術分型原理;STR-PCR分型技術；實驗室常用的STR遺傳標記；X-STR及Y-STR的遺傳特點及常用遺傳標記。熟悉：VNTR-PCR分型技術的優(yōu)勢及局限性。第二節(jié)擴增片段長度多態(tài)性

(amplifiedfragmentlengthpolymorphism,Amp-FLP)一、概述1.概念：根據VNTR或STR基因座側翼序列，設計、合成與側翼互補的寡核苷酸作為PCR引物，應用PCR技術擴增包含VNTR或STR基因座側翼和重復單位序列，凝膠電泳分離片段長度不同的擴增產物，根據擴增片段長度差異確定其基因型。因此，稱這種用PCR技術檢測VNTR或STR基因座長度多態(tài)性的分析方法稱為AMP-FLP。

PCR-STR

主要特點：快速、高效擴增

第二代DNA分型技術PCR擴增+電泳+顯帶檢測VNTR或STR基因座二、小衛(wèi)星VNTR分型(一）小衛(wèi)星VNTR基因座分型基本技術DNA提?。悍樱确路?，Chelex－100法等DNA定量：PCR擴增:50ul或25ul；電泳分離：瓊脂糖凝膠電泳與EB染色垂直非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳與銀染顯色基因型判定：基因型判定Amp-FLP分析VNTR基因座，等位基因按長度命名，有兩種命名方式；

1）直接用片段長度bp命名，在加樣電泳分離時，同時加DNA片段長度標準物(molecularmarker)。顯帶后參照分子量標準確定靶基因的長度，命名等位基因；

2）按照重復單位的重復次數(shù)命名，命名參照等位基因分型標準物(alleleladder)，在同一電泳條件下，等位基因與標準物比對即可確定等位基因和基因型。（二）主要的VNTR基因座D1S80基因座（PMCT118）基因定位染色體1p，Coresequence：GNNGACCACCGGNAAC(16bp）常規(guī)的D1S80檢測引物序列為：

forward:5’-GAAACTGGCCTCCAAACACTGCCCGGCG-3’reverse:5’-GTCTTGTTGGAGATGCACGTGCCCCTTGC-3’PCRthermalcycle：

95℃預變性2min，然后95℃1min，65℃1min，70℃3min，30個循環(huán)，最后72℃,延伸7min。Alleles：36個（13～45，50）Size：260～900bp中國漢族人群:發(fā)現(xiàn)29個等位基因，基因座雜合度0.84，Dp值0.96，具有高度多態(tài)性。gaaactggcctccaaacactgcccgccgtccacggccggccggtcctgcgtgtgaatgactcaggagcgtattccccacgcgccagcactgcattcagataagcgctggctcagtgtcagcccaaggaagacagaccacaggcaaggaggaccaccggaaaggaagaccaccggaaaggaagaccaccggaaaggaagaccacaggcaaggaggaccaccggaaaggaagaccaccggcaaggaggaccaccggcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccagcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccagcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccggcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccagcaaggaggaccaccagcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccggcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccggcaaggaggaccaccaggaaggagaaccaccaggaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccaggaaggaggaccactggcaaggaagaccaccggcaagcctgcaaggggcacgtgcatctccaacaagacD1S80基因座AB121716.1GI:39748687

D1S80分型結果圖

應用Amp-FLP方法檢測的小衛(wèi)星VNTR基因座還有ApoB，D17S30、D1S111、D1S118、D4S95、COL2A1基因座等。(二）小衛(wèi)星VNTR分型常用基因座(三）小衛(wèi)星VNTR分型的局限性及注意事項1.污染2.模板DNA:qualityandquantity3.優(yōu)先擴增4.降解DNA樣本大片段等位基因的丟失5.試劑、儀器質量和性能三、STR-PCR

短串聯(lián)重復序列，又稱微衛(wèi)星DNA或簡單重復序列。是目前在法醫(yī)物證中應用最廣泛的長度多態(tài)性遺傳標記，它的重復單位短，僅2～6bp，其長度多態(tài)性來源于重復單位串聯(lián)重復次數(shù)的個體差異。4bp重復的STR基因座最常用。STR適用于法醫(yī)學檢驗的特點和優(yōu)點廣泛存在于人類基因組，數(shù)目眾多，是個體識別的豐富資源；片段長度短(約200bp)，易于擴增，適用于陳舊、降解生物檢材的DNA分析；靈敏度高，所需檢材量少，適用于微量、超微量檢材的鑒定；Allele長度差異小(2-6bp)，優(yōu)先擴增現(xiàn)象不明顯；STR基因座擴增片段相近，擴增條件類似，能夠進行多個位點的復合擴增，一次檢驗能獲得較多的多態(tài)性信息，節(jié)省檢材和試劑，提高工作效率；分型程序簡便、明確、規(guī)范，有利于實現(xiàn)分型標準化、自動化和DNA數(shù)據庫的建立。（一）基本分型技術（單基因座）

1.模板DNA提取：常采用Chelex-100提取DNA法。2.PCR擴增

：采用標準的25μl體積PCR擴增體系，模板DNA用量10～100ng，常能夠得到滿意的擴增產物；3.電泳分離：常用T6%、C3%的PAG電泳，凝膠厚1mm，擴增產物加等體積的載樣緩沖液混合后點樣，同時加樣等位基因分型標準物(allelicladder)；4.顯帶與基因型判定：常用銀染法顯示基因條帶，參照分型標準物確定樣本的基因型。PCR擴增反應體系成分終濃度1×buffer量10×buffer（withMg2+）

2.5μl單核苷酸（dNTPs）0.2mol/L2.5μl引物（Primer）各0.1μmol/L2μlTaqDNA聚合酶0.5u0.25μl模板DNA10-100ng5μl超純水H2O

加至25μl1）標記離心管；2）確定反應管數(shù)；3）加樣：超純水、緩沖液、dNTPs、引物、酶；4）按（25－X）μl分裝到每一離心管，X為模板DNA用量；5）加入模板DNA;6）設定PCR熱循環(huán)參數(shù)，擴增。Ladder5-12Ladder5-12Ladder5-12123456基因型1:(8,8);2:(8,10)3:(8,8);4:(7,9)5:(8,8);6:(8,9)HX76110534710710412空白HX76:(7,13);HX110:(8,12)HX53:(9,11);HX47:(10,12)HX107:(11,11);HX12:(13,14)基因型單位點STR擴增、分型（熒光標記）87654321Sample+in-lanestd.AllelicLadder160bp200bpFlFl4bp（二）多基因座復合擴增（multiplexamplification）在一個PCR體系中同時擴增多個基因座的方法稱為復合擴增。如果同時檢測8～16個STR基因座，鑒別能力能夠達到DNA指紋的水平。優(yōu)點：高效，經濟，快速。目前常用的復合擴增方法有兩種：

銀染系統(tǒng)：各基因座等位基因片段范圍不重疊。

多色熒光自動檢測系統(tǒng)：不同顏色熒光染料標記可以有重疊。1.銀染系統(tǒng)復合擴增方法用銀染顯示各基因座等位基因沒有基因座特異性，所以復合擴增體系中多個基因座的基因長度范圍必須互不重疊，也就是經PAG電泳分離后銀染，各基因座的等位基因分別在不同片段長度范圍內顯示，互不干擾；例如CTTv四基因座復合擴增系統(tǒng)。銀染復合擴增技術的優(yōu)點是操作比較簡單，經濟實用;但是，片段長度范圍選擇的限制，能夠同時擴增的基因座個數(shù)有限，一般3-4個；CTTv295～327bp224～252bp179～203bp134～170bp例如CTTv四基因座復合擴增系統(tǒng)是由CSF1PO，TPOX，TH01和vWA構成。CTTCTTvFFFLGammaSTR2.熒光染料標記復合擴增熒光染料通常標記在每個基因座中一條引物的5’端，不同基因座引物標記不同的熒光標識物；經過擴增后的等位基因產物均攜有熒光，電泳分離長度等位基因，用熒光掃描系統(tǒng)對凝膠檢測；按照熒光的顏色區(qū)別基因座，根據片段的遷移率確定片段長度等位基因；熒光標記復合擴增系統(tǒng)不受各基因座基因長度重疊的影響，可以設計更多的基因座復合擴增，明顯提高了檢測信息量；常用的熒光復合擴增試劑盒。FluorescentDyesUsedin4-ColorDetectionFAM(Blue)JOE(Green)TAMRA(Yellow)ROX(Red)NEDFLCXREmission520

Emission548Emission580Emission605ScannedGelImageCapillaryElectropherogram1)熒光復合擴增特點8repeats10repeatsLocus18repeats9repeatsLocus2靈敏度高:低至0.01ng；混合和降解生物檢材；不同顏色熒光染料標記可以有重疊。Identifiler?kit(AppliedBiosystems)multiplexSTRresultAMELD3TH01TPOXD2D19FGAD21D18CSFD16D7D13D5VWAD8PowerPlex?16kit(PromegaCorporation)multiplexSTRresultAMELD3TH01TPOXPentaDPentaEFGAD21D18CSFD16D7D13D5VWAD8CommercialSTR16plexKitsAMELD3S1358TH01TPOX