醫(yī)療器械無(wú)菌和初始污染菌檢驗(yàn)

醫(yī)療器械無(wú)菌和初始污染菌檢驗(yàn)國(guó)家食品藥品監(jiān)視管理局北京醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)視檢驗(yàn)中心用于檢查要求無(wú)菌的醫(yī)療器械能否無(wú)菌的一種方法。假設(shè)供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅闡明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。無(wú)菌實(shí)驗(yàn)的目的：將醫(yī)療器械或其浸提液接種于培育基內(nèi)，以檢驗(yàn)供試品能否有細(xì)菌和真菌污染。什么是無(wú)菌檢查法？醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)規(guī)范GB/T14233.2-2005醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第2部分：生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法2021年版<中國(guó)藥典>無(wú)菌檢查法醫(yī)療器械無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南〔2021版〕無(wú)菌檢驗(yàn)是無(wú)菌醫(yī)療器械產(chǎn)品消費(fèi)控制過(guò)程中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。其檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果斷定及檢驗(yàn)人員業(yè)務(wù)才干等要素直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和平安。作為無(wú)菌醫(yī)療器械消費(fèi)企業(yè)，其無(wú)菌檢驗(yàn)任務(wù)應(yīng)由本企業(yè)獨(dú)立完成。并要求企業(yè)的檢驗(yàn)人員能當(dāng)場(chǎng)操作或口述無(wú)菌檢驗(yàn)的過(guò)程。

培育基:是人工配制的生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，即用人工的方法將多種物質(zhì)按各種微生物生長(zhǎng)繁衍的需求配成的一種混合營(yíng)養(yǎng)物。微生物:必需用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才干察看到的微小生物。微生物具有一定的形狀與構(gòu)造,并能在適宜的環(huán)境中迅速地生長(zhǎng)和繁衍,如細(xì)菌、病毒、真菌等。無(wú)菌：是指某一物體或某一環(huán)境中不含有活的微生物。凡能殺滅物體中一切活的微生物的作用稱為滅菌。

細(xì)菌：為單細(xì)胞微生物,其細(xì)胞分化不完善，無(wú)完好細(xì)胞核及核膜、核仁，直徑普通為1μm~10μm。

真菌：為多細(xì)胞或單細(xì)胞微生物，其細(xì)胞分化完善，有細(xì)胞核和各種細(xì)胞器，故易在體外生長(zhǎng)繁衍，直徑普通為10μm~100μm。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備超凈任務(wù)臺(tái)醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備恒溫培育箱〔至少2臺(tái)〕醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備壓力蒸汽滅菌器醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備電熱枯燥箱醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備集菌儀醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備生物平安柜:〔從實(shí)驗(yàn)平安性思索，建議陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)運(yùn)用生物平安柜〕醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備電子天平醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備光學(xué)顯微鏡醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備過(guò)濾安裝〔無(wú)油真空泵、濾杯、濾頭、濾瓶、微孔濾膜、夾子〕無(wú)菌檢查應(yīng)在環(huán)境干凈度10000級(jí)下的部分干凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)展，其全過(guò)程必需嚴(yán)厲遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、任務(wù)臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按<醫(yī)藥工業(yè)干凈室〔區(qū)〕懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法>的現(xiàn)行國(guó)家規(guī)范進(jìn)展干凈度驗(yàn)證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)展驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的干凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。無(wú)菌檢查人員必需具備微生物專業(yè)知識(shí)，并經(jīng)過(guò)無(wú)菌技術(shù)的培訓(xùn)。還應(yīng)該具有高度的責(zé)任心和嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的任務(wù)作風(fēng)。環(huán)境及人員要求

無(wú)菌檢查法環(huán)境要求隔離系統(tǒng)無(wú)菌檢查法環(huán)境要求無(wú)菌室在消毒處置終了后，應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)。無(wú)菌檢查法環(huán)境要求TSA瓊脂平皿在30℃~35℃培育48h證明無(wú)菌取3只放無(wú)菌操作臺(tái)或超凈任務(wù)臺(tái)平均位置翻開(kāi)上蓋，暴露30min后蓋好3只培育皿上生長(zhǎng)的菌落數(shù)平均應(yīng)不超越1個(gè)無(wú)菌實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)，方法要求同上無(wú)菌檢查法實(shí)驗(yàn)前預(yù)備器具滅菌：與供試液接觸的一切器具應(yīng)采用可靠方法滅菌，置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃30min，或置電熱枯燥箱內(nèi)160℃2h。培育基：可按藥典中的處方制備培育基，亦可運(yùn)用按該處方消費(fèi)的符合規(guī)定的脫水培育基。應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培育基應(yīng)保管在2℃~25℃，普通在3周內(nèi)運(yùn)用。無(wú)菌檢查法實(shí)驗(yàn)前預(yù)備配制培育基所需器具:

無(wú)菌檢查法實(shí)驗(yàn)前預(yù)備常用器具與稀釋液:

無(wú)菌檢查法實(shí)驗(yàn)前預(yù)備培育基:

無(wú)菌檢查法實(shí)驗(yàn)前預(yù)備硫乙醇酸鹽流體培育基:在供試品接種前,培育基氧化層的高度不得超越培育基深度的1/5，否那么,須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消逝〔不超越20分鐘〕迅速冷卻,只限加熱一次，并應(yīng)防止被污染。其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培育終了后培育基氧化層〔粉紅色〕不超越培育基深度的1/2。30℃~35℃培育14天。需氧菌生長(zhǎng)厭氧菌生長(zhǎng)無(wú)菌檢查法實(shí)驗(yàn)前預(yù)備培育基:

無(wú)菌檢查法實(shí)驗(yàn)前預(yù)備

改良馬丁培育基：23℃~28℃培育14天無(wú)菌檢查法實(shí)驗(yàn)前預(yù)備培育基:

無(wú)菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培育基及改良馬丁培育基等應(yīng)符合培育基的無(wú)菌性檢查及靈敏度檢查的要求。

無(wú)菌性檢查

每批培育基隨機(jī)不少于5支〔瓶〕，培育14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。培育基的適用性檢查靈敏度檢查：

菌種

培育基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超越5代〔從菌種保管中心獲得的冷凍枯燥菌種為第0代〕，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證實(shí)驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。金黃色葡萄球菌〔Staphylococcus

aureus)［CMCC〔B〕26

003］

銅綠假單胞菌

(Pseudomonas

aeruginosa)

［CMCC〔B〕10

104］

枯草芽孢桿菌

(Bacillus

subtilis

)

［CMCC〔B〕63

501］

生孢梭菌

(Clostridiumsporogenes)

[CMCC(B)

64

941]

白色念珠菌

(Candidaalbicans)

[CMCC(F)

98

001]黑曲霉

(Aspergillus

niger

)

[CMCC(F)

98

003]培育基的適用性檢查培育基應(yīng)符合無(wú)菌性檢查及靈敏度檢查的要求。檢查可在供試品的無(wú)菌檢查前或與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)展。靈敏度檢查所用菌種〔藥典2021版規(guī)定〕金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉分別接種各菌種新穎培育物至相應(yīng)培育基中培育，將培育物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成菌懸液〔濃度小于100cfu/mL〕硫乙醇酸鹽流體培育基〔12mL〕9支：分別接種小于100cfu的金葡、銅綠、枯草、生孢各2支，另一支不接種做空白對(duì)照，培育3天改良馬丁培育基〔9mL〕5支：分別接種小于100cfu的白念、黑曲霉各2支，另1支不接種做空白對(duì)照，培育5天逐日察看結(jié)果：空白對(duì)看管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，假設(shè)加菌的培育基管均生長(zhǎng)良好，那么靈敏度符合規(guī)定。無(wú)菌檢驗(yàn)有兩種方法：直接接種法、薄膜過(guò)濾法直接接種法:將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培育基內(nèi)培育。薄膜過(guò)濾法:含抗菌、抑菌成分的供試品會(huì)抑制某些微生物的生長(zhǎng)繁衍,所以用常規(guī)方法檢查會(huì)出現(xiàn)假陰性的結(jié)果,但并不等于產(chǎn)品中沒(méi)有微生物甚至是致病性微生物。所以采用薄膜過(guò)濾法來(lái)去除供試品中可溶的抑菌性成分,把細(xì)菌等微生物截留在濾膜上,然后再經(jīng)過(guò)處置培育使所含微生物生長(zhǎng)繁衍,從而使微生物檢出。方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)當(dāng)建立產(chǎn)品的無(wú)菌檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)展方法的驗(yàn)證，以證明所采用的方法適宜于該產(chǎn)品的無(wú)菌檢查。假設(shè)產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改動(dòng)時(shí)，檢查方法應(yīng)重新驗(yàn)證。

驗(yàn)證時(shí)，按“供試品的無(wú)菌檢查〞的規(guī)定及以下要求進(jìn)展操作。對(duì)每一實(shí)驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)展驗(yàn)證。方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)菌種及菌液制備：除大腸埃希菌〔Escherichiacoli〕[CMCC(B)44102〕外，金黃色葡萄球菌

、

枯草芽孢桿菌

、

生孢梭菌、

白色念珠菌、黑曲霉同培育基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)與靈敏度檢驗(yàn)一切菌種區(qū)別：大腸埃希菌替代銅綠假單胞菌。方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)取每種培育基規(guī)定接種的供試品總量按薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中參與小于100cfu的實(shí)驗(yàn)菌，過(guò)濾。取出濾膜接種至硫乙醇酸鹽流體培育基或改良馬丁培育基中，或?qū)⑴嘤又翞V筒內(nèi)。另取一裝有同體積培育基的容器，參與等量實(shí)驗(yàn)菌，作為對(duì)照。按規(guī)定溫度培育3天~5天。各實(shí)驗(yàn)菌同法操作。方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：薄膜過(guò)濾法方法驗(yàn)證所用菌種〔藥典2021版規(guī)定〕金黃色葡萄球菌大腸埃希菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉分別接種各菌種新穎培育物至相應(yīng)培育基中培育，將培育物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成菌懸液〔濃度小于100cfu/mL〕硫乙醇酸鹽流體培育基8支：分別接種小于100cfu的金葡、大腸、枯草、生孢各2支，其中1管接入每支培育基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為對(duì)照，培育3天。改良馬丁培育基4支：分別接種小于100cfu的白念、黑曲霉各2支，其中1管接入每支培育基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為對(duì)照，培育5天。方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：直接接種法與對(duì)看管比較，如含供試品各容器中的實(shí)驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，那么闡明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查法和檢查條件進(jìn)展供試品的無(wú)菌檢查。如含供試品的任一容器中微生物生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)，那么闡明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，可采用添加沖洗量，或添加培育基的用量，或運(yùn)用中和劑或改換濾膜種類等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)展方法驗(yàn)證。

方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)也可與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)展。方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：結(jié)果判別供試品包裝須完好無(wú)損，尤其是只需一層包裝的樣品。進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室的樣品假設(shè)有兩層〔或兩層以上〕包裝的，需將外包裝在傳送窗〔或緩沖間〕撤除后，傳入實(shí)驗(yàn)室。

操作人員預(yù)備：帶口罩、帽子、穿公用無(wú)菌服、鞋進(jìn)入無(wú)菌室。供試品的無(wú)菌檢查

供試品的無(wú)菌檢查在100級(jí)超凈臺(tái)內(nèi)，酒精燈火焰周圍，以無(wú)菌操作法將規(guī)定量的供試品分別接種至含硫乙醇酸鹽流體培育基〔不少于15ml/管〕和改良馬丁培育基〔不少于10ml/管〕的容器中。正確的無(wú)菌操作，既不能引入外來(lái)菌污染培育物呵斥假陽(yáng)性，也要留意接觸供試品的實(shí)驗(yàn)器具溫度不可過(guò)高以免將能夠存在的菌燙死。陰性對(duì)照〔目的是驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)?zāi)芊翊嬖谖廴尽常汗┰嚻窡o(wú)菌檢查時(shí)，應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋液同法操作，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。陽(yáng)性對(duì)照〔目的是驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)可靠性，防止假陰性〕：應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽(yáng)性對(duì)照菌；無(wú)抑菌作用供試品以金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性對(duì)照菌。陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)的菌液制備同方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無(wú)菌檢查每份培育基接種的樣品量。陽(yáng)性對(duì)看管培育48~72小時(shí)應(yīng)生長(zhǎng)良好。供試品的無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查法-直接接種法供試品數(shù)量：同一批號(hào)3個(gè)~11個(gè)單位供試品優(yōu)先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培育基內(nèi)培育。如：棉簽、導(dǎo)尿包中的導(dǎo)尿管、注射器中的液體等無(wú)菌檢查法-薄膜過(guò)濾法2021年版<中國(guó)藥典>規(guī)定:只需供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過(guò)濾法。供試品無(wú)菌檢查所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法一樣。在蠕動(dòng)泵的作用下，被測(cè)產(chǎn)品經(jīng)過(guò)裝有帶空氣過(guò)濾器的針頭及無(wú)菌管路直接從樣品容器中進(jìn)入濾筒中，免去了通常膜轉(zhuǎn)移過(guò)程中易產(chǎn)生的污染。無(wú)菌檢查法中薄膜過(guò)濾法所用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm，直徑約為50mm。水溶液供試品取規(guī)定量的供試液，直接過(guò)濾，或混合至含適量稀釋液的無(wú)菌容器內(nèi)，混勻，立刻過(guò)濾。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，假設(shè)需求用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml，總沖洗量不得超越1000mL，以免濾膜上微生物受損傷。無(wú)菌檢查法-薄膜過(guò)濾法沖洗后分別將100mL硫乙醇酸鹽流體培育基及改良馬丁培育基參與相應(yīng)的濾筒內(nèi)，培育。無(wú)菌檢查法培育及察看上述含培育基的容器按規(guī)定的溫度培育14天。培育期間應(yīng)逐日察看并記錄能否有菌生長(zhǎng)。如在參與供試品后或在培育過(guò)程中，培育基出現(xiàn)渾濁，培育14天后，不能從外觀上判別有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培育液適量轉(zhuǎn)種至同種新穎培育基中，細(xì)菌培育2天、真菌培育3天，察看接種的同種新穎培育基能否再出現(xiàn)渾濁；或取培育液涂片，染色，鏡檢，判別能否有菌。假設(shè)供試品管均廓清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；假設(shè)供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。實(shí)驗(yàn)假設(shè)經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，假設(shè)無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；假設(shè)有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。陽(yáng)性對(duì)看管應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。否那么，實(shí)驗(yàn)無(wú)效。無(wú)菌檢查法結(jié)果判別

當(dāng)符合以下至少一個(gè)條件時(shí)，方可判實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效：

〔1〕無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求；

〔2〕回想無(wú)菌實(shí)驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有能夠引起微生物污染的要素。

〔3〕供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌實(shí)驗(yàn)中所運(yùn)用的物品和〔或〕無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。無(wú)菌檢查法結(jié)果判別實(shí)驗(yàn)假設(shè)經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，假設(shè)無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；假設(shè)有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。無(wú)菌檢查法結(jié)果判別醫(yī)療器械無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南〔2021版〕

由于無(wú)菌檢驗(yàn)時(shí)間跨度較長(zhǎng)，因此過(guò)程的記錄應(yīng)可以完好表達(dá)實(shí)驗(yàn)的全過(guò)程，對(duì)于在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的各種情況，均應(yīng)在記錄中客觀反映。

直接接種法實(shí)驗(yàn)結(jié)果

薄膜過(guò)濾法實(shí)驗(yàn)結(jié)果

無(wú)菌檢查法斷定實(shí)驗(yàn)報(bào)告中宜給出以下信息：供試品稱號(hào)；消費(fèi)批號(hào)和〔或〕滅菌批號(hào)；供試液制備方法；接種方式；每日察看結(jié)果〔包括陰、陽(yáng)性對(duì)照〕；結(jié)果斷定實(shí)驗(yàn)報(bào)告GB15979-2002一次性運(yùn)用衛(wèi)生用品衛(wèi)生規(guī)范初始污染菌的檢驗(yàn)初始污染菌：產(chǎn)品消毒、滅菌前的細(xì)菌總數(shù)，可判明檢品受細(xì)菌污染的程度以及消費(fèi)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、消費(fèi)人員的衛(wèi)生情況，是對(duì)檢品進(jìn)展衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合根據(jù)。部分一次性運(yùn)用衛(wèi)消費(fèi)品微生物學(xué)目的要求產(chǎn)品種類微生物指標(biāo)初始污染菌cfu/g細(xì)菌菌落總數(shù)cfu/g或cfu/mL大腸菌群致病性化膿菌真菌菌落總數(shù)cfu/g或cfu/mL口罩普通級(jí)消毒級(jí)—≤10000≤200≤20不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出≤100不得檢出尿布等普通級(jí)消毒級(jí)—≤10000≤200≤20不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出≤100不得檢出注：致病性化膿菌指綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌與溶血性鏈球菌。初始污染菌的檢驗(yàn)預(yù)備：平皿洗凈、烘干；牛皮紙包好滅菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂培育基配制、滅菌。步驟：采樣，供試液制備，培育，菌落計(jì)數(shù)在100級(jí)凈化條件下用無(wú)菌方法翻開(kāi)至少3個(gè)包裝；從每個(gè)包裝中取樣，準(zhǔn)確稱取10g±1g樣品；剪碎后參與200mL無(wú)菌生理鹽水中，充分混勻。液體產(chǎn)品用原液直接做樣液。初始污染菌的檢驗(yàn)取上清液共接種5個(gè)平皿，每個(gè)平皿中參與1mL供試液用冷卻至45℃左右的熔化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培育基〔15~20〕mL，倒入每個(gè)平皿內(nèi)混合均勻。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置35℃±2℃培育48h后，計(jì)算平板上的菌落數(shù)。稀釋度5細(xì)菌菌落總數(shù)=5塊平板上的細(xì)菌菌落總數(shù)×〔cfu/g或cfu/mL〕如：取10g樣品入200mL生理鹽水中，那么稀釋20倍當(dāng)菌落數(shù)在100以內(nèi)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)采用二位有效數(shù)字。初始污染菌的檢驗(yàn)計(jì)數(shù)方法：將平板置菌落計(jì)數(shù)器或從平板的反面直接以肉眼用標(biāo)志筆點(diǎn)計(jì)，以投射光襯以暗色背景，仔細(xì)察看，計(jì)數(shù)。必要時(shí)可以借助于放大鏡、菌落計(jì)數(shù)器。菌落特征：⑴形狀特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黃色。⑵邊緣整齊或不整齊，外表有光滑、粗糙，皺褶、突起或扁平。⑶大小差別很大。初始污染菌的檢驗(yàn)假設(shè)樣品菌落總數(shù)超越本規(guī)范的規(guī)定，應(yīng)將留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測(cè)2次，2次結(jié)果平均值都到達(dá)本規(guī)范的規(guī)定，那么斷定被檢樣品合格；其中有任何一次結(jié)果平均值超越本規(guī)范的規(guī)定，那么斷定被檢樣品不合格。醫(yī)療器械的無(wú)菌和初始污染菌檢驗(yàn)相關(guān)規(guī)范GB/T14233.2-2005醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第2部分：生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法2021年版<中國(guó)藥典>無(wú)菌檢查法GB15979-2002一次性運(yùn)用衛(wèi)生用品衛(wèi)生規(guī)范GB/T15980-1995一次性運(yùn)用醫(yī)療用品衛(wèi)生規(guī)范YY0033-2000無(wú)菌醫(yī)療器具消費(fèi)管理規(guī)范〔1〕培育基配制記錄〔2〕滅菌器、天平等儀器的運(yùn)用記錄〔3〕培育基無(wú)菌性檢查、靈敏度檢查記錄〔4〕菌種購(gòu)買、傳代、運(yùn)用記錄〔5〕方法學(xué)驗(yàn)證記錄〔6〕無(wú)菌實(shí)驗(yàn)記錄〔7〕滅菌物品制造〔8〕廢棄物處置記錄〔9〕干凈間監(jiān)測(cè)記錄醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)應(yīng)有記錄一、適用范圍二、檢查內(nèi)容1.選擇的無(wú)菌檢驗(yàn)方法2.檢驗(yàn)人員資質(zhì)3.現(xiàn)場(chǎng)察看無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室環(huán)境4.設(shè)備和器具5.管理制度、操作規(guī)程等相關(guān)技術(shù)文件6.查閱實(shí)驗(yàn)記錄三、其它應(yīng)留意的問(wèn)題醫(yī)療器械無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南〔2021版〕〔1〕培育基制備〔2〕供試品的無(wú)菌檢查〔3〕培育及察看〔4〕結(jié)果判別〔1〕樣品記錄〔2〕滅菌物品制造記錄〔3〕原始實(shí)驗(yàn)記錄〔4〕廢棄物處置記錄醫(yī)療器械無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南〔2021版〕其它應(yīng)留意的問(wèn)題還包括：消費(fèi)企業(yè)應(yīng)確保樣品具有代表性：實(shí)驗(yàn)樣品應(yīng)從常規(guī)產(chǎn)品中可以代表加工過(guò)程和條件的批中選擇。選擇樣品是隨機(jī)的。實(shí)驗(yàn)樣品的選擇和處置技術(shù)應(yīng)明確，以免對(duì)樣品上所含的微生物的數(shù)量和種類呵斥污染和改動(dòng)。實(shí)驗(yàn)樣品可以選擇制造過(guò)程中的不合格產(chǎn)品，它們應(yīng)該代表這個(gè)消費(fèi)批的加工程序和條件。用于實(shí)驗(yàn)的不合格產(chǎn)品應(yīng)不會(huì)影響無(wú)菌測(cè)試的有效性。醫(yī)療器械無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南〔2021版〕其它應(yīng)留意