微生物檢驗第十六章球菌

第十六節(jié)球菌1整理ppt

生物學形態(tài)2整理ppt知識要點球菌是一種呈球形或近似球形的細菌，對人類有致病性的球菌主要引起化膿性炎癥，故又稱化膿性球菌。革蘭陽性球菌有葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌和腸球菌等，革蘭陰性球菌有腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和布蘭漢菌等。3整理ppt葡萄球菌是無芽胞細菌中抵抗力最強的細菌。淋病奈瑟菌是性傳播疾病最常見的病原菌，形態(tài)與腦膜炎奈瑟菌相似。腦膜炎奈瑟菌營養(yǎng)要求高。0ptochin敏感試驗、膽汁溶茵試驗與菊糖發(fā)酵試驗可用于甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌的鑒別。4整理ppt學習目標掌握病原性球菌的生物學性狀及鑒定熟悉病原性球菌的致病性及臨床意義。5整理ppt6整理ppt第一節(jié)葡萄球菌屬

葡萄球菌屬細菌因堆積成葡萄串狀而得名，為最常見的化膿性球菌，廣泛分布于自然界、人和動物的體表及與外界相通的腔道中，多數(shù)為腐生或寄生菌。少數(shù)人可攜帶致病性葡萄球菌，醫(yī)務人員的帶菌率可高達70％，而且多為耐藥性菌株，是醫(yī)院感染的重要傳染源?？梢鹌つw、黏膜及多種組織器官的化膿性炎癥。7整理ppt8整理ppt(一)生物學性狀

1．形態(tài)與染色葡萄球菌呈球形或略呈橢圓形，直徑0.5～1.5微米，無鞭毛、無芽胞，呈單個、成雙或葡萄串狀的革蘭陽性球菌。衰老、死亡和被吞噬后常呈陰性。2．培養(yǎng)特性與生化反響葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上易生長，需氧或兼性厭氧。在液體培養(yǎng)基中均勻混濁生長，最適pH為7.4。多數(shù)菌株耐鹽性強，接種至瓊脂平板過夜培養(yǎng)后可形成直徑2mm左右，呈金黃色、白色、檸檬色等不透明、凸起、外表光滑、濕潤、邊緣整齊的菌落。金黃色葡萄球菌在血平板上的菌落周圍有明顯的透明溶血環(huán)。葡萄球菌的生化活性強，能分解多種糖類、蛋白質和氨基酸，角蟲酶陽性。9整理ppt10整理ppt

生物學特性SPAcapsuleteichoicacidpeptidoglycan莢膜多糖：有利于細菌粘附多糖抗原：存在于細胞壁的磷壁酸有群特異性。

11整理ppt3．抗原構造與分類(1)抗原構造：葡萄球菌經(jīng)水解后，用沉淀法分析可得到2種抗原1〕蛋白質抗原：主要為葡萄球菌A蛋白(SPA)，存在于細胞壁外表，90％以上的金黃色葡萄球菌有此抗原，但含量有差異，是具有種、屬特異性的完全抗原。12整理ppt2)多糖類抗原：為半抗原，存在于細胞壁上，是金黃色葡萄球菌的一種重要抗原，具有型特異性。SPA的作用有①抗吞噬作用：SPA與吞噬細胞爭奪抗體的Fc段，從而降低抗體的調理作用。②細菌檢測：SPA與IgGl、IgG2和IgG4的Fc段結合后IgG的Fab段仍能與相應抗原發(fā)生特異性結合，從而建立了協(xié)同凝集試驗，該試驗已廣泛用于多種細菌抗原的檢測。③促分裂：SPA對T、B細胞是良好的絲裂原。13整理ppt根據(jù)伯杰系統(tǒng)細菌學手冊第9版，葡萄球菌屬分為32個種及亞種。傳統(tǒng)的分型方法有①根據(jù)產(chǎn)生的色素不同將葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌3種；②按凝固酶產(chǎn)生與否分為凝固酶陰性與凝固酶陽性的葡萄球菌兩大類。③按噬菌體分型法將葡萄球菌分為5群26型。其他還有分子生物學方法，如質粒圖譜分析和染色體DNA的脈沖電泳分型法等。(2)分類14整理ppt4．抵抗力葡萄球菌抵抗力強，為無芽胞菌中抵抗力最強的一種。在枯燥膿汁中能生存數(shù)月，濕熱80℃，30～60min才被殺死。在50g／L苯酚、0.1％氯化汞中10～15min死亡。但對甲紫敏感，1:100000～200000稀釋的甲紫溶液即可抑制其生長，故常用2％～4％的甲紫治療皮膚黏膜的感染。葡萄球菌對青霉素、磺胺、金霉素、紅霉素和慶大霉素較敏感，但近年來耐藥菌株逐年增多，對青霉素耐藥菌株達90％以上。15整理ppt(二)致病性

1．致病物質(1)凝固酶：金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生游離凝固酶(freecoagulase)和結合凝固酶(boundcoagulase)兩種，前者分泌至菌體外，被血漿中的協(xié)同因子(cofactor)激活為凝血酶，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，導致血漿凝固。后者結合于菌體外表不釋放，能與纖維蛋白原結合，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白而引起細菌凝固，故又稱凝聚因子。金黃色葡萄球菌凝固酶均為陽性，凝固酶試驗是鑒定金黃色葡萄球菌的重要標志。16整理ppt(2)葡萄球菌溶素：致病性葡萄球菌能產(chǎn)生多種葡萄球菌溶素(staphylolysin)。葡萄球菌溶素是損傷細胞膜的毒素，按其抗原性不同分為a、G、7、艿4種，對人致病的主要是a溶素。17整理ppt(3)殺白細胞素：殺白細胞素是一種可溶性物質，能破壞中性粒細胞和巨噬細胞，具有抵抗宿主細胞的吞噬、增強侵襲力的作用。18整理ppt(4)腸毒素：30％～50％金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生腸毒素(enterotoxin)，有A、B、Cl、C2、C3、D、E、G和H等9個血清型，均能引起食物中毒。腸毒素的化學本質為蛋白質，100℃30min不被破壞。食物被產(chǎn)毒株葡萄球菌污染，在適宜溫度下，經(jīng)8～10h，即可產(chǎn)生大量的腸毒素。食用含有腸毒素的食物，可發(fā)生急性胃腸炎，稱為食物中毒，其發(fā)病率占食物中毒的首位。19整理ppt(5)剝脫毒素：剝脫毒素(exfoliatin)又稱表皮溶解毒素，主要由噬菌體Ⅱ群金黃色葡萄球菌產(chǎn)生?？梢馉C傷樣皮膚綜合征(剝脫性皮炎)，多見于新生兒及免疫功能低下者。20整理ppt(6)毒性休克綜合征毒素一1：毒性休克綜合征毒素一1由噬菌體工群金黃色葡萄球菌產(chǎn)生，可引起機體發(fā)熱、多個器官系統(tǒng)的功能紊亂或毒性休克綜合征。21整理ppt2．所致疾病(1)侵襲性疾?。褐饕鹁植炕蛉砘撔匝装Y。①皮膚及軟組織感染：如毛囊炎、癤、癰等，其特點是病灶局限，且與周圍組織界限清楚，膿汁黃而黏稠。②全身性感染：如敗血癥、膿毒血癥等。③內臟器官感染：如支氣管炎、肺炎、膿胸、中耳炎、心包炎等。22整理ppt(2)毒素性疾?。河山瘘S色葡萄球菌產(chǎn)生的外毒素引起。有食物中毒、假膜性腸炎、燙傷樣皮膚綜合征和毒性休克綜合征等。人對金黃色葡萄球菌有一定天然免疫力。當機體皮膚黏膜損傷或機體抵抗力下降時才易引起感染。病后能獲得一定免疫力，但作用不強、且不持久，可再次感染。23整理ppt金黃色葡萄球菌燙傷樣皮膚綜合征24整理ppt(三)微生物學檢驗

1．標本采集根據(jù)葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集膿汁、滲出液、血液、尿液、糞便、痰液以及腦脊液等。25整理ppt2．檢驗方法

26整理ppt(3)鑒定

1)血漿凝固酶試驗2)甘露醇發(fā)酵試驗3)耐熱核酸酶試驗4)腸毒素測定5)SPA的檢測27整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬鏈球菌屬鏈球菌屬細菌種類繁多，廣泛分布于自然界、人及動物腸道和健康人鼻咽部，大多數(shù)不致病，是化膿性球菌中的常見細菌，為鏈狀或個別種成雙排列的革蘭陽性球菌。鏈球菌引起人類的疾病主要有各種化膿性炎癥、猩紅熱、新生兒敗血癥、細菌性心內膜炎、風濕熱以及腎小球腎炎等超敏反響性疾病。28整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬一、鏈球菌

<一>生物學性狀

1、形態(tài)與染色

球形，鏈狀排列，革蘭染色陽性(G+)29整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬2.培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求高：血平板或含血清培養(yǎng)基液體培養(yǎng)為沉淀生長血平板呈灰白色外表光滑小菌落，不同菌株溶血不一。30整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬3、生化反響觸酶陰性分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不分解菊糖，不被膽汁溶解〔鑒別甲型溶血性鏈球菌與肺炎鏈球菌〕31整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬4、抗原構造(1)蛋白質抗原：或稱外表抗原。具型特異性，有M、T、R、S4種，位于C抗原外層。(2)多糖抗原：或稱C抗原。為群特異性抗原，位于細胞壁。(3)核蛋白抗原：或稱P抗原。無特異性，為各種鏈球菌所共有，并與葡萄球菌有交叉。32整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬5、分類鏈球菌的分類

(1)按產(chǎn)生溶血與否及溶血現(xiàn)象分類①甲型溶血性鏈球菌②乙型溶血性鏈球菌③丙型鏈球菌

(2)根據(jù)抗原結構分類按鏈球菌細胞壁中多糖抗原不同，可分為A、B、C、D等20個群。溶血現(xiàn)象名稱類別致病性草綠色溶血

溶血甲型溶血性鏈球菌多為條件致病菌完全溶血

溶血乙型溶血性鏈球菌致病力強不溶血丙型鏈球菌無致病性33整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬(二)致病性1．致病物質A群鏈球菌有較強的侵襲力，可產(chǎn)生多種外毒素和胞外酶。(1)鏈球菌溶血素(streptolysin)：有溶解紅細胞、破壞白細胞和血小板的作用。分“O〞和“S〞兩種。對紅細胞、白細胞、心肌有毒性。臨床抗“O〞試驗檢測的是“O〞溶血素抗體。(2)致熱外毒素(pyrogenicexotoxin)：又稱紅疹毒素或猩紅熱毒素，是人類猩紅熱的主要毒性物質。(3)M蛋白：具有抗吞噬作用。34整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬2．所致疾病(1)化膿性感染：如丹毒、癰、膿皰瘡、淋巴管炎、腦膜炎及產(chǎn)褥熱等。(2)中毒性疾?。河芍聼嵬舛舅匾鸬男杉t熱。(3)超敏反響性疾?。褐饕酗L濕熱和急性腎小球腎炎。35整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬(三)微生物學檢驗檢驗方法①桿菌肽(bacitracin)敏感試驗②Optochin試驗③膽鹽溶菌試驗④血清學分類鑒定⑤抗鏈“O〞試驗36整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬二、肺炎鏈球菌肺炎

(一)生物學性狀

1．形態(tài)與染色

雙球菌，革蘭染色陽性矛頭狀：平面相對，尖面相背有厚莢膜無芽胞無鞭毛37整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬熒光染色掃描電鏡38整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬2．培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求高，在含有葡萄糖、血清或腹水的培養(yǎng)基中才能生長。兼性厭氧。液體培養(yǎng)初期渾濁生長，后因自溶酶變澄清

39整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬3、生化反響分解葡萄糖，乳糖，菊糖膽汁溶菌：參加膽汁或10%去氧膽酸鈉，37℃，5~10min，激活本菌的自溶酶，出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象40整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬4、抗原結構與分型(1)莢膜多糖抗原：亦稱型特異性抗原，存在于肺炎鏈球菌的莢膜中，能溶于水(2)菌體種特異性抗原：亦稱菌體多糖抗原，存在于肺炎鏈球菌細胞壁，為各型菌株所共有。(3)M蛋白：為型特異抗原，與A群鏈球菌M蛋白類似，但抗原性不同。5、抵抗力

肺炎鏈球菌抵抗力不強，加熱56℃、10min死亡41整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬(二)致病性1．致病物質肺炎鏈球菌的致病力主要依靠其莢膜的抗吞噬作用。蛋白黏附素、脂磷壁酸及肺炎鏈球菌溶素42整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬2．所致疾病

大葉性肺炎:肺炎球菌主要引起人類大葉性肺炎還可引起慢性支氣管炎，化膿性胸膜炎、鼻竇炎，中耳炎及化膿性腦膜炎等43整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬

(三)微生物學檢驗直接涂片鏡檢：別離培養(yǎng)：與甲鏈鑒別菊糖分解試驗膽汁溶菌試驗Optochin敏感試驗動物試驗G+有莢膜的雙球菌44整理ppt第三節(jié)腸球菌屬是人類腸道中的正常菌群，常見于腹部和盆腔感染所別離出的混合菌叢中，在分類上屬于鏈球菌科。在引起醫(yī)院感染的革蘭陽性球菌中，腸球菌僅次于葡萄球菌屬。45整理ppt(一)生物學性狀1．形態(tài)與染色腸球菌為革蘭陽性球菌，直徑0.6～2.0微米，呈單個、成雙或短鏈狀排列。瓊脂平板上生長的細菌呈球桿狀，液體培養(yǎng)基中呈卵圓形、鏈狀排列。無芽胞，無莢膜，個別腸球菌有稀疏鞭毛。46整理ppt2．培養(yǎng)特性與生化反響腸球菌為需氧及兼性厭氧菌對營養(yǎng)要求較高在含有血清的培養(yǎng)基上生長較好。接種血平板37℃過夜，可形成灰白色、不透明、外表光滑、直徑為0.5～1.0mm的圓形菌落腸球菌能分解多種糖類產(chǎn)酸。觸酶陰性，多數(shù)具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解毗略烷酮-β-萘基酰胺(PYR)。47整理ppt3．分類腸球菌在Lancefield血清學分類上屬于D群目前將腸球菌屬分為18種細菌4．抵抗力腸球菌抵抗力較弱，但對大多數(shù)常用的抗菌藥物呈天然耐藥，第三代頭孢菌素類對其無效48整理ppt(二)致病性最常見于尿路感染。腸球菌引起的菌血癥常發(fā)生于有嚴重根底疾患的老年人、長期住院接受抗生素治療的免疫功能低下患者。49整理ppt(三)微生物學檢驗1．標本采集根據(jù)病種不同，可采集尿液、血液及膿性分泌物等。2．檢驗方法腸球菌檢驗程序(1)直接鏡檢：可見單個、成雙或短鏈狀排列的卵圓形革蘭陽性球菌。(2)別離培養(yǎng)：可用血平板或用選擇性培養(yǎng)基，如疊氮鈉膽汁七葉苷瓊脂進行別離培養(yǎng)。(3)鑒定方法1)PYR試驗：是一種快速篩選鑒定試驗。腸球菌瓊脂(膽鹽-七葉苷-疊氮

50整理ppt第四節(jié)奈瑟茵屬和布蘭漢菌屬奈瑟菌屬(Neisseria)是一群革蘭陰性雙球菌。共同特點:是菌體成雙排列，如咖啡豆狀，無鞭毛，無芽胞，有菌毛。需氧，氧化酶和觸酶陽性。奈瑟菌屬包括腦膜炎奈瑟菌(N.rneningitidis)、淋病奈瑟菌(N.gonorrhoeae)、枯燥奈瑟菌(N.sicca)、淺黃奈瑟菌(N.sud.f1ava)、金黃奈瑟菌(N.flavescens)、黏膜奈瑟菌(N.mocosa)等。人類是奈瑟菌屬細菌的自然宿主，對人致病的只有腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。除淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜外，其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜51整理ppt(一)腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌俗稱腦菌(meningococcus)，是流行性腦脊髓膜炎(簡稱流腦)的病原菌。(一)生物學性狀1．形態(tài)與染色腦膜炎球菌呈腎形或豆形，是成雙排列、坦面相對的革蘭陰性球菌，直徑0.6～0.8微米。人工培養(yǎng)后可成卵圓形或球形，排列不規(guī)那么，單個、成雙或四個相聯(lián)等。在患者腦脊液中位于中性粒細胞內。新別離株多有莢膜和菌毛。52整理ppt2．培養(yǎng)特性與生化反響腦膜炎球菌專性需氧，初次別離時需5％～10％CO。環(huán)境才能生長。營養(yǎng)要求高，需在含有血液、血清等培養(yǎng)基中才能生長。常用培養(yǎng)基為巧克力(色)瓊脂平板、血平板和卵黃雙抗平板。最適生長溫度37℃，最適pH7.4～7.6。在巧克力平板上的菌落為圓形、扁平、光滑、半透明、邊緣整齊；在血平板上除具備上述特征外，不溶血；在卵黃雙抗培養(yǎng)基上菌落較大且光滑、濕潤、扁平、邊緣整齊等。腦膜炎奈瑟菌能分解葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不能分解蛋白質，不液化凝固血清或明膠，氧化酶試驗陽性。53整理ppt

3．抗原構造與分型腦膜炎奈瑟菌主要抗原有莢膜多糖群特異性抗原、外膜蛋白型特異性抗原、脂多糖抗原和核蛋白抗原四種。根據(jù)莢膜多糖抗原的不同，可將腦膜炎奈瑟菌分為A、B、C、D、x、Y、Z、29E、W135、H、I、K和I，等13個血清群。其中H、I、K血清群是由我國學者發(fā)現(xiàn)的。我國流行的菌株以A群為主。54整理ppt4．抵抗力腦膜炎奈瑟菌對外界環(huán)境和理化因素抵抗力弱，對枯燥、熱均很敏感，在生理鹽水中僅能存活數(shù)小時，加熱60℃、5min即死亡。對寒冷極敏感，特別是新別離的菌株，故采集標本和轉運均應注意保溫，用于接種的培養(yǎng)基亦需預溫。腦膜炎奈瑟菌對磺胺類、青霉素、鏈霉素均敏感。55整理ppt(二)致病性

1．致病物質腦膜炎奈瑟菌的主要致病物質是莢膜、菌毛和內毒素。菌毛：粘附于黏膜上皮細胞，利于定植；莢膜：有抵抗吞噬的作用；內毒素：可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙，嚴重者可致內毒素休克、血栓、DIC等。56整理ppt2．所致疾病腦膜炎奈瑟菌主要引起流腦，該菌主要寄居于人類鼻咽部，人群攜帶率為5％～10％，流行期間可高達20％～90％。感染者以5歲以下兒童為主，6個月至2歲的嬰兒發(fā)病率最高。

傳染源：病人和帶菌者，人是唯一易感宿主傳染途徑：呼吸道傳播，飛沫或接觸普通型三種臨床類型爆發(fā)型慢性敗血癥型

57整理ppt1.標本3.別離培養(yǎng)與鑒定

腦脊液、血液、出血點滲出液、鼻咽拭子保暖、保濕、立即送檢，培養(yǎng)基預溫。2.直接涂片鏡檢

中性粒細胞內、外有革蘭陰性雙球菌可作出初步診斷。巧克力(色)培養(yǎng)基直接凝集試驗通過氧化酶試驗、觸酶試驗及糖類發(fā)酵等生化反響作出鑒定。4.快速診斷

對流免疫電泳

SPA協(xié)同凝集試驗〔三〕微生物學檢查58整理ppt

(一)生物學性狀

1．形態(tài)與染色淋病奈瑟菌形態(tài)與腦膜炎奈瑟菌相似，直徑0.6～0.8肚m。常成雙排列，兩菌接觸面平坦，呈腎形或咖啡豆的革蘭陰性球菌。膿液標本中，大多數(shù)淋病奈瑟菌常位于中性粒細胞內，但慢性淋病患者多分布于細胞外(彩圖16—9)。淋病奈瑟菌無芽胞，無鞭毛，從患者體內新別離株有莢膜和菌毛。

淋病奈瑟菌俗稱淋球菌(gonococcus)，是人類淋病的病原菌。二淋病奈瑟菌59整理ppt2．培養(yǎng)特性與生化反響淋病奈瑟菌對營養(yǎng)的要求比腦膜炎奈瑟菌更高，只能在巧克力平板和專用選擇培養(yǎng)基中生長，初次別離須供給5％COz。最適溫度為35～37℃，最適pH7.5。經(jīng)24～48h培養(yǎng)后，形成圓形、凸起、灰白色、直徑0.5～1.0mm的光滑型菌落。根據(jù)菌落大小和色澤等分為T1～T55種類型，新別離菌株屬T1、T2型，菌落小，有菌毛。人工傳代培養(yǎng)后，菌落可增大，或成扁平菌落，即T3、T4和T5型。菌落具有自溶性，不易保存。淋病奈瑟菌只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、蔗糖和麥芽糖。氧化酶和觸酶試驗陽性。不產(chǎn)生靛基質或硫化氫，硝酸鹽復原陰性。60整理ppt3．抗原構造與分型淋病奈瑟菌的抗原至少有3類①菌毛蛋白抗原。②脂多糖抗原。③外膜蛋白抗原。根據(jù)外膜蛋白抗原的不同，將淋病奈瑟菌分成A、B、C、D、E、F、G、H、N、R、S、T、U、V、W和X等16個血清型，在流行病學調查上有重要意義。4．抵抗力淋病奈瑟菌對外界環(huán)境抵抗力低。不耐枯燥、寒冷和熱?？菰锃h(huán)境僅存活1～2h，濕熱55℃、5min死亡，室溫下能活1～2d。在患者分泌物污染的衣褲、被褥、毛巾及廁所坐墊上，能存活18～24h。對各種消毒劑極敏感。61整理ppt(二)致病性

菌毛：粘附作用；抵抗吞噬。外膜蛋白Ⅱ：有助于粘附。IgA蛋白酶：能破壞黏膜外表sIgA。內毒素：損害人體黏膜的重要因素。1.致病物質

淋?。?/p>

人類是淋病奈瑟菌的唯一宿主，屬性傳播疾病(exuallytransmitteddisease，STD)主要通過性接觸引起泌尿道和生殖系統(tǒng)炎癥

淋病新生兒淋菌性結膜炎/新生兒膿漏眼：新生兒由產(chǎn)道感染有淋病性陰道炎或子宮頸炎的孕婦，胎兒經(jīng)產(chǎn)道娩出時可被感染。62整理ppt(三)微生物學檢驗1.標本3.別離培養(yǎng)與鑒定泌尿生殖道膿性分泌物，用無菌棉拭沾取，子宮頸口外表分泌物，標本采集后應注意保暖保濕，立即送檢接種2.直接涂片鏡檢

中性粒細胞內發(fā)現(xiàn)G－雙球菌有價值

巧克力(色)培養(yǎng)基，5%~10%CO2