大米抗氧化活性肽的分離純化和性質(zhì)研究

大米抗氧化活性肽的分離純化和性質(zhì)研究自從Harman提出自由基理論以來,人們認識到人體內(nèi)氧化產(chǎn)生的自由基與人體衰老和許多疾病有關,因此人們越來越關注抗氧化劑。但目前大多數(shù)抗氧化劑都是化學合成物,如叔丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)；這些化學類抗氧化劑雖然效果好,但是對人體具有潛在毒性。近年來,人們把目光轉到天然性的抗氧化劑,如抗壞血酸、α-生育酚、茶多酚、大豆蛋白酶解得到的大豆肽等。近年來研究發(fā)現(xiàn),大米源抗氧化活性肽(antixox-idativepeptide)也具有較強的抑制生物大分子過氧化和清除體內(nèi)自由基的功能,而且這些抗氧化活性肽往往強于蛋白質(zhì)和氨基酸,并且具有低毒、高效等特點,有望利用這些抗氧化活性肽開發(fā)新功能食品和保健品。本文對大米抗氧化活性肽的制備工藝進行了優(yōu)化,通過響應面分析法優(yōu)化了超聲波處理工藝參數(shù)的最佳組合；通過不同的體外體系,研究大米堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物的抗氧化活性,然后進一步分離和純化,得到了幾段抗氧化活性高的片段；并通過體外模擬人體消化,評價分析了消化對大米抗氧化活性肽抗氧化活性的影響?，F(xiàn)將主要結果和結論歸納如下：1、選取超聲功率、超聲處理時間、超聲處理初始溫度做3因素3水平響應面分析實驗,采用SAS程序?qū)嶒灁?shù)據(jù)進行回歸分析,得出模型中最佳提取工藝參數(shù)：超聲功率1750W、超聲處理時間30min、超聲處理初始溫度40℃,其DPPH·清除率預測可達到78.2%。對以上工藝參數(shù)進行驗證實驗,經(jīng)3次平行測定,各抗氧化肽的DPPH·清除率分別為：76.0%、75.8%和77.4%,此時抗氧化肽的濃度分別為1.5037、1.5163和1.5085mg/mL,DPPH清除率的平均值為76.4%,抗氧化肽的平均濃度為1.5095mg/mL,實驗結果較理想。在優(yōu)化工藝條件下,抗氧化肽得率由31.6%提高到42.2%。2、本章采用了5種抗氧化活性檢測的方法,其中包含了脂類物質(zhì)氧化抑制能力的方法、清除自由基能力的方法和還原能力的測定方法,較全面地反映了大米多肽的抗氧化能力。并和Vc的抗氧化能力做了比較,在高濃度20.00～50.00mg/mL,大米多肽和Vc對·OH清除能力相當,但是在其他濃度和清除其他自由基的情況時,大米多肽的能力都低于Vc?？偟膩碚f,大米多肽的抗氧化能力在一定范圍內(nèi),與濃度呈一定的量效比。3、使用葡聚糖凝膠SephadexG-25初步分離純化后,發(fā)現(xiàn)分子量在132.7-1153.9的小肽占得相當大的比例,為下一步純化分離打下了基礎。4、利用SP-SephadexC-25作為離子交換層析介質(zhì),pH4.0,0.02mol/LHAc-NaAc為起始緩沖液,流速120mL/h,NaCl(0～1mol/L)梯度洗脫,大米堿性蛋白酶水解產(chǎn)物NHREP得到了較好的分離,混合肽組分被分離出七個組分(A-G),組分F的DPPH·清除能力最強(80.09±1.22%)。5、利用SephadexG-15凝膠色譜又將組分F分成了4個組分F1、F2、F3和F4。并分別檢測了各組分的DPPH·清除能力。結果發(fā)現(xiàn),組分F3表現(xiàn)出最強的DPPH·清除能力(達到77.64%)。組分F3經(jīng)RP-HPLC分離后,分成五個主要組分,其中組分F3b的DPPH·清除能力最強,達到了89.53%；組分F3c次之,其對DPPH·的清除能力為76.21%。6、通過體外模擬人體消化過程,測定大米活性多肽清除DPPH·的能力,來評價體外模擬人體消化過程對大米多肽抗氧化能力影響的情況。經(jīng)過人體模擬消化后,最后